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Artigo de método

Estabelecimento de hepatocarcinoma em camundongos BALB/c-nu e investigação do efeito terapêutico da fórmula de Sanleng Jiashen

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DOI:

10.3791/66599

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26 de janeiro de 2024

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Neste artigo

Resumo

Aqui, apresentamos o protocolo passo a passo para investigar os efeitos terapêuticos e inibitórios vasculares da fórmula de Sanleng Jiashen em camundongos BALB/c-nu com carcinoma hepatocelular ortotópico.

Resumo

A letalidade do câncer de fígado e a resistência a drogas químicas forçaram a busca por prescrições eficazes de ervas tradicionais para o câncer de fígado. Modelos animais que são repetíveis, fáceis de manipular e altamente imitam os processos fisiopatológicos do câncer de fígado são o pré-requisito para a triagem bem-sucedida de candidatos a medicamentos eficazes. Enquanto isso, indicadores e meios confiáveis de avaliação da eficácia do medicamento também são a garantia da pesquisa e desenvolvimento de medicamentos anticâncer de fígado.

Fórmula Sanleng Jiachen, uma prescrição representativa da medicina tradicional chinesa contendo Sparganium stoloni erum, Buch. -Presunto. (Sanleng), Panax ginseng C. A. Mey. (ginseng), Rheum officinale Baill. (ruibarbo) e Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong), é prescrito para nutrir o fígado e limpar o calor, remover toxinas e promover a circulação sanguínea para tratar o câncer de fígado. Este protocolo experimental descreve a preparação da fórmula liofilizada de Sanleng Jiashen e o processo de estabelecimento do câncer de fígado in situ em camundongos BALB/c-nu. Coloração histopatológica, detecção imuno-histoquímica de marcadores de câncer, imagem in vivo de camundongos e teste de membrana corioalantóide de embrião de galinha foram usados para explorar a inibição e o efeito antiangiogênese da fórmula de Sanleng Jiashen na proliferação maligna do tecido de câncer de fígado. Os dados mostram que a fórmula Sanleng Jiashen pode resistir efetivamente à proliferação maligna do tecido cancerígeno do fígado, que se manifesta pela redução do volume de massa tumoral, melhora do dano patológico e níveis mais baixos do marcador de câncer ki67.

A inibição superior da angiogênese também sugere que a fórmula Sanleng Jiashen pode ter o potencial de tratar e prevenir a progressão e deterioração do câncer de fígado. Todo o esquema experimental mostra um processo abrangente de componentes da medicina tradicional chinesa no tratamento do câncer de fígado de camundongo, que fornece uma referência para o estabelecimento e otimização de um modelo de câncer de fígado, bem como a pesquisa e desenvolvimento de medicamentos para prevenir e tratar o câncer de fígado.

Introdução

O câncer de fígado é um câncer mortal que se origina no fígado e é a segunda causa mais comum de morte relacionada ao câncer em todo o mundo1. As taxas de doenças hepáticas nos Estados Unidos e em alguns países em desenvolvimento estão mostrando níveis elevados, e pode haver mais de 1 milhão de casos de câncer de fígado em todo o mundo até 20302. Devido a hábitos de vida pouco saudáveis, como tabagismo, obesidade e bebida, e aos estragos da hepatite B, hepatite C e outros vírus, a incidência e a mortalidade do câncer de fígado aumentaram significativamente ano a ano3

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Protocolo

Camundongos nus machos BALB/c-nu livres de patógenos específicos, com 5 semanas de idade e pesando 18-22 g foram alimentados no Centro Experimental Animal de Transformação Medical College da Universidade de Jilin; as condições de alimentação foram de 22 °C-24 °C com 40%-60% de umidade relativa. O número de licença do animal experimental é SYXK(Ji) 2018-0006, e o processo experimental está em conformidade com as regras e regulamentos do Comitê de Ética da Universidade de Jilin, e o número de aprovação da ética animal é 20221228-01.

1. Preparação da fórmula Sanleng Jiashen liofilizada15

  1. Col....

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Resultados

Conforme mostrado na Figura 2A, estabelecemos um modelo de câncer de fígado in situ de camundongos BALB/c-nu e avaliamos o efeito antitumoral da fórmula Sanleng Jiachen. A Figura 2B mostra que a fórmula de Sanleng Jiashen pode suprimir significativamente o crescimento de tumores hepáticos. Os resultados patológicos indicaram que, em comparação com o grupo controle, os focos tumorais no grupo modelo tinham limites claros com o tecido circundante, focos t.......

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Discussão

Uma grande quantidade de evidências confirmou que Sanleng, ginseng, ruibarbo e Chuanxiong na fórmula Sanleng Jiashen têm efeitos farmacológicos no tratamento do câncer de fígado. Estudos mostraram que o Sanleng pode inibir significativamente a proliferação e o crescimento de células tumorais para prevenir a invasão e metástase de células tumorais, induzir a apoptose celular e regular o ciclo celular e o microambiente tumoral20. Foi provado que o kaempferol, o ingr.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pela Fundação de Filosofia e Ciências Sociais da China (20VYJ070), pelo Projeto do Departamento de Educação da Província de Jilin (JJKH20230963KJ) e pelo Segundo Lote do Projeto de Engenharia de Acadêmicos Xinglin na Universidade de Medicina Chinesa de Changchun (QNKXJ2-2021 + ZR25).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Solução de tripsina a 0,25%HyClone, AméricaSH30042.01B
Seringa descartável de 1 mLMingankang Medical Equipment Co., Ltd., ChinaRWSB
1% de penicilina e solução de estreptomicinaHyclone, AméricaSV30010
Tubo de centrífuga de 1,5 mLCorning, AméricaMCT-150-C-S
Pinçade agulha de 12 cmHesdick, ChinaHKQS-211
6-0 suturas cirúrgicasShanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Xangai, ChinaCR631
75% álcoolSichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Sichuan, China1.00009E + 11
placas de 96 poçosNEST, China701001
AcetonaTianjin Dingfu Chemical General Plant, Tianjin, ChinaGB686-89
Camundongos nus machos BALB/c-nuBeijing Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., Pequim, ChinaSYXK(Ji) 2018-0006
Máquina de cozimento de tecidos biológicosLeica, AlemanhaLeica HI1220
Placa de cultura de célulasNEST, ChinaNEST.706001
Solução de ácido cítricoWuhan Canos Technology Co., Ltd., Wuhan, Chinasj1074
D-luciferinaGold Biotechnology®, Inc., ChinaLUCK-100
DMEMHyclone, AméricaSH30243.01
Iluminador de ovosShandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, ChinaWZSDT
Solução de coloração de eosinaHunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, China110703061
Pomada para os olhos de eritromicina  Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Xangai, ChinaH37022025
Soro fetal bovinoClark, AméricaFB25015 
Incubadora de pintinhos inteligente totalmente automáticaShandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, China29538
Solução de lentivírus GFPSuzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, ChinaF22AZ
Soro de cabraShenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, ChinaWLA067
Broca de crânio de rato portátilSTRONGWT, China190
Linha celular HCCLM3WheLab, Xangai, ChinaC1010
Almofada de aquecimentoZhongke Life Technology Co., Ltd., Hangzhou, ChinaGEJRD-10W
HematoxilinaHunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, ChinaB-YH250-1
decocção inteligenteHangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., Hangzhou, China3003BQ
  Microscópio de fluorescência invertidoOlympus, JapãoIX73
ki67 anticorpo primárioWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, ChinaGB121141-100
Lodophor desinfetanteCofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, China202110073
LuciferaseSuzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, ChinaE26JZ
Colade matrizCorning, América356234
Gaze médicaYunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Yunnan, China71712049971
MetanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Guangdong, China1.17001.023
tesoura oftálmicaHesdick, ChinaHKQS-209
Pinça oftálmicaHesdick, ChinaHKCL-20
Máquina de embutir parafinaLeica, Alemanha 
Máquina de fatiar parafinaLeica, AlemanhaLeica CM1950
ParaformaldeídoBiosharp, ChinaBL539A
PBS bufferWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, ChinaG2156-1L
PuromycinBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Pequim, ChinaP8230
RefrigeradorThermo Scientific, AméricaTDE40086FV-ULTS
BisturiHesdick, ChinaHKCL-93
Anticorpo secundárioWuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, ChinaGB23301
Sistema de imagem ao vivo para animais de pequeno porteCaliper Life Sciences, AméricaIVIS Lumina XR
SorafenibShanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Xangai, China284461-73-0 
Molho transparente3M, ciência9534HP
Triton X-100Beijing Solarbio & Technology Co., Ltd., Pequim, ChinaT8200
Secador de congelamento a vácuo Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Ningbo, Chinasz-10N
Ovos de galinha de penas brancasShandong Haotai Experimental Animal Breeding Co., Ltd., Shandong, ChinaSCXK (Lu) 20180004
XyleneSigma-Aldrich, América534056
Pote deEG1150H de America

Referências

  1. Sia, D., Villanueva, A., Friedman, S. L., Llovet, J. M. Liver cancer cell of origin, molecular class, and effects on patient prognosis. Gastroenterology. 152 (4), 745-761 (2017).
  2. Starley, B. Q., Calcagno, C. J., Harrison, S. A. Nonalcoholic fatty l....

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Reimpressões e permissões

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