Aqui, apresentamos o protocolo passo a passo para investigar os efeitos terapêuticos e inibitórios vasculares da fórmula de Sanleng Jiashen em camundongos BALB/c-nu com carcinoma hepatocelular ortotópico.
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Artigo de método
Aqui, apresentamos o protocolo passo a passo para investigar os efeitos terapêuticos e inibitórios vasculares da fórmula de Sanleng Jiashen em camundongos BALB/c-nu com carcinoma hepatocelular ortotópico.
A letalidade do câncer de fígado e a resistência a drogas químicas forçaram a busca por prescrições eficazes de ervas tradicionais para o câncer de fígado. Modelos animais que são repetíveis, fáceis de manipular e altamente imitam os processos fisiopatológicos do câncer de fígado são o pré-requisito para a triagem bem-sucedida de candidatos a medicamentos eficazes. Enquanto isso, indicadores e meios confiáveis de avaliação da eficácia do medicamento também são a garantia da pesquisa e desenvolvimento de medicamentos anticâncer de fígado.
Fórmula Sanleng Jiachen, uma prescrição representativa da medicina tradicional chinesa contendo Sparganium stoloni erum, Buch. -Presunto. (Sanleng), Panax ginseng C. A. Mey. (ginseng), Rheum officinale Baill. (ruibarbo) e Ligusticum chuanxiong Hort. (Chuanxiong), é prescrito para nutrir o fígado e limpar o calor, remover toxinas e promover a circulação sanguínea para tratar o câncer de fígado. Este protocolo experimental descreve a preparação da fórmula liofilizada de Sanleng Jiashen e o processo de estabelecimento do câncer de fígado in situ em camundongos BALB/c-nu. Coloração histopatológica, detecção imuno-histoquímica de marcadores de câncer, imagem in vivo de camundongos e teste de membrana corioalantóide de embrião de galinha foram usados para explorar a inibição e o efeito antiangiogênese da fórmula de Sanleng Jiashen na proliferação maligna do tecido de câncer de fígado. Os dados mostram que a fórmula Sanleng Jiashen pode resistir efetivamente à proliferação maligna do tecido cancerígeno do fígado, que se manifesta pela redução do volume de massa tumoral, melhora do dano patológico e níveis mais baixos do marcador de câncer ki67.
A inibição superior da angiogênese também sugere que a fórmula Sanleng Jiashen pode ter o potencial de tratar e prevenir a progressão e deterioração do câncer de fígado. Todo o esquema experimental mostra um processo abrangente de componentes da medicina tradicional chinesa no tratamento do câncer de fígado de camundongo, que fornece uma referência para o estabelecimento e otimização de um modelo de câncer de fígado, bem como a pesquisa e desenvolvimento de medicamentos para prevenir e tratar o câncer de fígado.
O câncer de fígado é um câncer mortal que se origina no fígado e é a segunda causa mais comum de morte relacionada ao câncer em todo o mundo1. As taxas de doenças hepáticas nos Estados Unidos e em alguns países em desenvolvimento estão mostrando níveis elevados, e pode haver mais de 1 milhão de casos de câncer de fígado em todo o mundo até 20302. Devido a hábitos de vida pouco saudáveis, como tabagismo, obesidade e bebida, e aos estragos da hepatite B, hepatite C e outros vírus, a incidência e a mortalidade do câncer de fígado aumentaram significativamente ano a ano3
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Camundongos nus machos BALB/c-nu livres de patógenos específicos, com 5 semanas de idade e pesando 18-22 g foram alimentados no Centro Experimental Animal de Transformação Medical College da Universidade de Jilin; as condições de alimentação foram de 22 °C-24 °C com 40%-60% de umidade relativa. O número de licença do animal experimental é SYXK(Ji) 2018-0006, e o processo experimental está em conformidade com as regras e regulamentos do Comitê de Ética da Universidade de Jilin, e o número de aprovação da ética animal é 20221228-01.
1. Preparação da fórmula Sanleng Jiashen liofilizada15
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Conforme mostrado na Figura 2A, estabelecemos um modelo de câncer de fígado in situ de camundongos BALB/c-nu e avaliamos o efeito antitumoral da fórmula Sanleng Jiachen. A Figura 2B mostra que a fórmula de Sanleng Jiashen pode suprimir significativamente o crescimento de tumores hepáticos. Os resultados patológicos indicaram que, em comparação com o grupo controle, os focos tumorais no grupo modelo tinham limites claros com o tecido circundante, focos t.......
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Uma grande quantidade de evidências confirmou que Sanleng, ginseng, ruibarbo e Chuanxiong na fórmula Sanleng Jiashen têm efeitos farmacológicos no tratamento do câncer de fígado. Estudos mostraram que o Sanleng pode inibir significativamente a proliferação e o crescimento de células tumorais para prevenir a invasão e metástase de células tumorais, induzir a apoptose celular e regular o ciclo celular e o microambiente tumoral20. Foi provado que o kaempferol, o ingr.......
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Os autores não têm nada a divulgar.
Este trabalho foi apoiado pela Fundação de Filosofia e Ciências Sociais da China (20VYJ070), pelo Projeto do Departamento de Educação da Província de Jilin (JJKH20230963KJ) e pelo Segundo Lote do Projeto de Engenharia de Acadêmicos Xinglin na Universidade de Medicina Chinesa de Changchun (QNKXJ2-2021 + ZR25).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução de tripsina a 0,25% | HyClone, América | SH30042.01B | |
| Seringa descartável de 1 mL | Mingankang Medical Equipment Co., Ltd., China | RWSB | |
| 1% de penicilina e solução de estreptomicina | Hyclone, América | SV30010 | |
| Tubo de centrífuga de 1,5 mL | Corning, América | MCT-150-C-S | |
| Pinça | de agulha de 12 cmHesdick, China | HKQS-211 | |
| 6-0 suturas cirúrgicas | Shanghai Jinhuan Medical Equipment Co., Ltd., Xangai, China | CR631 | |
| 75% álcool | Sichuan Youbang Enterprise Co., Ltd., Sichuan, China | 1.00009E + 11 | |
| placas de 96 poços | NEST, China | 701001 | |
| Acetona | Tianjin Dingfu Chemical General Plant, Tianjin, China | GB686-89 | |
| Camundongos nus machos BALB/c-nu | Beijing Weitonglihua Experimental Animal Technology Co., Ltd., Pequim, China | SYXK(Ji) 2018-0006 | |
| Máquina de cozimento de tecidos biológicos | Leica, Alemanha | Leica HI1220 | |
| Placa de cultura de células | NEST, China | NEST.706001 | |
| Solução de ácido cítrico | Wuhan Canos Technology Co., Ltd., Wuhan, China | sj1074 | |
| D-luciferina | Gold Biotechnology®, Inc., China | LUCK-100 | |
| DMEM | Hyclone, América | SH30243.01 | |
| Iluminador de ovos | Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, China | WZSDT | |
| Solução de coloração de eosina | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, China | 110703061 | |
| Pomada para os olhos de eritromicina | Cisen Pharmaceutical Co., Ltd., Xangai, China | H37022025 | |
| Soro fetal bovino | Clark, América | FB25015 | |
| Incubadora de pintinhos inteligente totalmente automática | Shandong Weizhen Incubation Equipment Company, Shandong, China | 29538 | |
| Solução de lentivírus GFP | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, China | F22AZ | |
| Soro de cabra | Shenyang Wanlei Biotechnology Co., Ltd., Shengyang, China | WLA067 | |
| Broca de crânio de rato portátil | STRONGWT, China | 190 | |
| Linha celular HCCLM3 | WheLab, Xangai, China | C1010 | |
| Almofada de aquecimento | Zhongke Life Technology Co., Ltd., Hangzhou, China | GEJRD-10W | |
| Hematoxilina | Hunan BKMAM Biotechnology Co., Ltd., Hunan, China | B-YH250-1 | |
| decocção inteligente | Hangzhou Jiuyang living Appliance Co., Ltd., Hangzhou, China | 3003BQ | |
| Microscópio de fluorescência invertido | Olympus, Japão | IX73 | |
| ki67 anticorpo primário | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China | GB121141-100 | |
| Lodophor desinfetante | Cofoe Medical Technology Co., Ltd., Hunan, China | 202110073 | |
| Luciferase | Suzhou GenePharma Co., Ltd., Suzhou, China | E26JZ | |
| Cola | de matrizCorning, América | 356234 | |
| Gaze médica | Yunnan Chenye Biotechnology Co., Ltd., Yunnan, China | 71712049971 | |
| Metanol | Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd., Guangdong, China | 1.17001.023 | |
| tesoura oftálmica | Hesdick, China | HKQS-209 | |
| Pinça oftálmica | Hesdick, China | HKCL-20 | |
| Máquina de embutir parafina | Leica, Alemanha | ||
| Máquina de fatiar parafina | Leica, Alemanha | Leica CM1950 | |
| Paraformaldeído | Biosharp, China | BL539A | |
| PBS buffer | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China | G2156-1L | |
| Puromycin | Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd., Pequim, China | P8230 | |
| Refrigerador | Thermo Scientific, América | TDE40086FV-ULTS | |
| Bisturi | Hesdick, China | HKCL-93 | |
| Anticorpo secundário | Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd., Wuhan, China | GB23301 | |
| Sistema de imagem ao vivo para animais de pequeno porte | Caliper Life Sciences, América | IVIS Lumina XR | |
| Sorafenib | Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd., Xangai, China | 284461-73-0 | |
| Molho transparente | 3M, ciência | 9534HP | |
| Triton X-100 | Beijing Solarbio & Technology Co., Ltd., Pequim, China | T8200 | |
| Secador de congelamento a vácuo | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd., Ningbo, China | sz-10N | |
| Ovos de galinha de penas brancas | Shandong Haotai Experimental Animal Breeding Co., Ltd., Shandong, China | SCXK (Lu) 20180004 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich, América | 534056 |
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