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Artigo de método

Um modelo de bolsite em ratos após proctocolectomia e anastomose ileal bolsa-anal usando sulfato de dextrano sódico

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DOI:

10.3791/66623

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31 de maio de 2024

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve o método para estabelecer um modelo de bolsite em ratos. O modelo de bolsa ileal foi criado através da realização de cirurgia de anastomose ileal-bolsa anal (IPAA) usando técnicas microcirúrgicas. Após a cirurgia, o rato foi tratado com sulfato de dextrano sódico (DSS) a 4% por 4 dias.

Resumo

A colite ulcerativa () é uma doença crônica imunomediada que afeta todo o cólon e reto com um curso recidivante e remitente, causando morbidade ao longo da vida. Quando o tratamento médico é ineficaz, especialmente em casos de sangramento gastrointestinal maciço, perfuração, megacólon tóxico ou carcinogênese, a cirurgia se torna a última linha de defesa para curar a colite ulcerativa. A ressecção colorretal total e a anastomose ileal bolsa-anal (IPAA) oferecem a melhor chance de tratamento a longo prazo. A bolsite é a complicação pós-operatória mais comum e problemática. Nesta investigação, a microcirurgia é empregada para criar um modelo de bolsa ileal em ratos experimentais por meio de cirurgia IPAA. Posteriormente, um modelo de bolsite sustentado em ratos é estabelecido pela indução da inflamação da bolsa ileal com sulfato de dextrano sódico (DSS). O estabelecimento bem-sucedido da bolsite de ratos é validado por meio da análise do estado geral pós-operatório, peso, ingestão de alimentos e água, dados fecais, bem como patologia do tecido da bolsa, imuno-histoquímica e análise de fatores inflamatórios. Este modelo animal experimental de bolsite fornece uma base para estudar a patogênese e o tratamento da doença.

Introdução

A bolsite é uma inflamação inespecífica que afeta a bolsa ileal e é uma complicação prevalente após proctocolectomia total e anastomose ileal-bolsa anal (IPAA) em indivíduos com colite ulcerativa ()1,2,3. Essa condição tem uma taxa de ocorrência relativamente alta de até 50% e pode causar várias manifestações clínicas, incluindo diarreia, dor abdominal, perda de sangue fecal e febre. A causa exata da bolsite permanece indefinida, embora alguns pesquisadores acreditem que uma mudança na flora da bolsa possa desencadear a ativação imunológica e....

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Protocolo

Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com as políticas dos comitês de ética do Hospital Geral da Universidade Médica de Tianjin. Ratos Sprague-Dawley machos com idade entre 9 e 12 semanas, pesando aproximadamente 320-360 g, foram utilizados para este estudo. Os detalhes dos reagentes e equipamentos usados estão listados na Tabela de Materiais.

1. Seleção e manutenção de animais

  1. Selecione um animal saudável (peso corporal de ~ 220-240 g).
  2. Certifique-se de que eles atendam aos critérios do nível específico de livre de patógenos (FPS)....

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Resultados

Avaliação do estado geral de ratos modelo bolsa ileal após o estabelecimento
Após o operador passar pela curva de aprendizado cirúrgico do IPAA, os ratos toleraram bem a cirurgia, com duração cirúrgica de 192,94 min ± 27,15 min, e ocorreram menos complicações pós-operatórias. Durante o período pós-operatório imediato, os ratos experimentaram uma diminuição na ingestão alimentar, mas seu apetite pré-operatório foi restaurado dentro de 10 dias a 14 dias após a cirurgia. A atividade pós-operatória precoc.......

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Discussão

A colite ulcerativa () é uma inflamação intestinal crônica caracterizada por dor epigástrica recorrente, diarreia e fezes com muco sanguinolento. Afeta principalmente o reto e pode envolver o cólon em progressão em graus variados. A cirurgia desempenha um papel crucial no manejo da colite ulcerativa 17,18,19. Desde que Parks et al.20 introduziram a colectomia total com um.......

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Etanol anidroTianjin Fengchuan Chemical Reagent Technology Co., LtdChinaColoração de hematoxina-eosina
Sulfato de dextrano de sódio   Yeasen 60316ES76Usado para induzir a inflamação da bolsa
Solução de formaldeídoTianjin Zhiyuan Reagent CompanyChinaGaze de coloração de hematoxina-eosina
Jiangxi Zhonggan Medical Equipment CompanyChinaUsado para microcirurgia animal
HematoxilinaPequim Zhongshan Jinqiao CompanyChinaHematoxina-eosina Coloração
Interferon &gama;   Kit de reagentes de detecçãoCloud-cloneSEA049RaDetecção de fatores inflamatórios
Kit de detecção de interleucina-10Cloud-cloneSEA056RaDetecção de fatores inflamatórios
Kit de detecção de interleucina-17Cloud-cloneSEA063RaDetecção de fatores inflamatórios
Kit de detecção de interleucina-6Cloud-cloneSEA079RaDetecção de fatores inflamatórios
IodophorTangpai Medical Equipment Co., LtdChinaUsado para microcirurgia animal
Instrumentos de manipulação microscópicaAesculapAlemanhaUsado para microcirurgia animal
Occludinabcamab216327Teste imuno-histoquímico
Agulha de costuraYangzhou Fuda Medical Equipment Co., LtdChinaUsado para microcirurgia animal
fator de necrose tumoral &alfa; Kit de reagentesde detecção Cloud-cloneSEA133RaDetecção de fatores inflamatórios
Microscópio cirúrgico binocular de duas pessoasOPTONAlemanhaUsado para microcirurgia animal
XilenoTianjin Yingda Fábrica de reagentes raros e preciososChinaColoração de hematoxina-eosina

Referências

  1. Yang, M. L., Brar, M. S., Kennedy, E. D., De Buck Van Overstraeten, A. Laparoscopic versus transanal IPAA for ulcerative colitis: A patient-centered treatment trade-off study. Dis Colon Rectum. 67 (1), 107-113 (2024).
  2. Aktas, M. K., et al.

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Modelo de Pouchite em RatosColite UlcerativaModelo Animal ExperimentalPatogênese da PouchiteTécnica de MicrocirurgiaAnálise de Fatores InflamatóriosImunohistoquímicaManejo Pós-operatório