Apresenta-se um protocolo para cirurgia de osteotomia femoral com o uso de fixação interna em axolotes maduros. O procedimento pode ser utilizado para realizar estudos comparativos sobre regeneração de membros e consolidação de fraturas em anfíbios aquáticos.
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Artigo de método
Estabilização de uma osteotomia de fêmur com fixação de placa em Ambystoma mexicanum
Neste artigo
Resumo
Resumo
O axolote (Ambystoma mexicanum) é um organismo modelo promissor para a medicina regenerativa devido à sua notável capacidade de regenerar órgãos perdidos ou danificados, incluindo membros, cérebro, coração, cauda e outros. Estudos sobre axolotes lançam luz sobre as vias celulares e moleculares que regem a ativação do progenitor e a restauração tecidual após a lesão. Esse conhecimento pode ser aplicado para facilitar a cicatrização de lesões incompetentes de regeneração, como a não consolidação óssea. No protocolo atual, a estabilização da osteotomia do fêmur usando um sistema de fixação de placa interna é descrita. O procedimento foi adaptado para uso em animais aquáticos (axolote , Ambystoma mexicanum). Foram utilizados axolotes de ≥20 cm focinho-cauda com fêmures comparáveis totalmente ossificados do tamanho de camundongos, e atenção especial foi dada ao posicionamento e fixação da placa, bem como aos cuidados pós-operatórios. Esta técnica cirúrgica permite a fixação óssea padronizada e estabilizada e pode ser útil para comparação direta com a regeneração de membros de axolotes e estudos análogos de cicatrização óssea em anfíbios e mamíferos.
Introdução
O axolote (Ambystoma mexicanum) é um modelo importante para a regeneração de órgãos, incluindo cauda, medula espinhal, cérebro, coração, brânquias e membros 1,2,3,4,5. Estudos detalhados da regeneração de membros de axolotes descobriram mecanismos de desdiferenciação celular e a formação de um pool de células-tronco, blastema, no local da amputação. Devido à capacidade das células do blastema de reconstruir todas as partes dos membros ausentes, incluindo um esquele....
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Protocolo
O seguinte procedimento foi realizado com a aprovação do Magistrado de Viena (GZ: MA 58-65248-2021-26). Axolotes longos (Ambystoma mexicanum) de 5 a 8 anos de idade, ≥ 20 cm focinho à ponta da cauda (focinho à ponta da cauda) foram usados para cirurgia de fratura e amputações. Tanto homens quanto mulheres foram usados para as cirurgias. Os axolotes foram criados nas instalações do Instituto de Pesquisa de Patologia Molecular. A dor e o risco de infecções foram controlados com analgésicos e antibióticos adequados para garantir um resultado bem-sucedido. Os reagentes e equipamentos utilizados para o estudo estão listados na
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Resultados
O procedimento cirúrgico aqui descrito (Figura 1) dura entre 20 min e 30 min e requer um cirurgião e um assistente. Opcionalmente, use um microscópio de dissecção binocular ou sistema de lupa.
Figura 1: Esquemas do procedimento cirúrgico e da configuração experimental. (A) O .......
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Discussão
O método atualmente descrito de fixação e osteotomia da placa do fêmur permite sua aplicação em animais aquáticos, como o Ambystoma mexicanum (axolote). Este método cirúrgico foi recentemente utilizado para comparar a consolidação de fraturas e regeneração de membros em axolotes com a consolidação de fraturas em camundongos9. Como nos camundongos, uma placa fixadora de 4 orifícios pode ser fixada ao osso com parafusos auto-quebráveis, e uma serra Gigly po.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver interesses conflitantes.
Agradecimentos
Os autores gostariam de agradecer a Sabine Stumpp pelo excelente suporte técnico e a Lidia Grösser pela assistência nas cirurgias. Esta pesquisa foi financiada pelo Fundo Austríaco de Ciência [Hertha Firnberg Fellowship número T-1219], ERC [Advanced Grant, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Serra de fio Gigly de 0,66 mm | RISystem | RIS.590.120 | |
| 7.0 Sutura Optilene | Braun | C3090538 | |
| benzocaína | Sigma-Aldrich | E1501 | diluir para 0,03% antes de usar |
| Butorfanol (Butomidor 10 mg/mL) | Richter Pharma AG-diluir | para 0,5 mg/L antes de usar | |
| Broca 0,30 mm | RISystem | RIS.590.200 | |
| Dumont #5 Fórceps - Padrão/Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Broca Manual | RISystem | RIS.390.130 | melhor ter pelo menos 3 peças |
| Micro CT analisador de dados | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan NRecon software | |
| Micro CT specimen scanner | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan 1172 | |
| Pinça de íris Moria MC31b - lisa, curva, 10 cm | Ferramentas de Belas Ciências | 11373-12FST | 2 peças |
| Broca MouseFix-& Guia de serra 1,75 mm, | RISystem | RIS.301.102 | |
| Placa MouseFix 4 furos, | RISystem | RIS.401.110 | |
| Parafuso MouseFix, L =2,00 mm | RISystem | RIS.401.100 | precisa de 4 por osso |
| Pinça de padrão estreito | VWR | FSCI11002-12 | |
| penicilina/estreptomicina | Gibco | 15140-122 | |
| Pinça de anel | Fine Science Tools | 11103-09 | |
| bisturi #15 | B Braun, Thermo Fischer Scientific | 5518032 | |
| Chave de caixa quadrada 0,50 mm | RISystem | , RIS.590.111 | |
| Cera de osso estéril, 2,5 g | Ethicon, Johnson & Tesoura Fina para | Johnson W810 | |
| - Reta/11.5cm | Ferramentas de Ciência Fina | 91460-11 |
Referências
- Amamoto, R., et al. Adult axolotls can regenerate original neuronal diversity in response to brain injury. Elife. 5, 13998(2016).
- Butler, E. G., Ward, M. B. Reconstitution of the spinal cord following ablation in urodele larvae. J Exp Zool. ....
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Reimpressões e permissões
