Injeção intracameral em ratos com baixo risco de efeitos adversos

Resumo

Este protocolo descreve uma técnica para injeção intracameral em ratos usando uma incisão central na córnea e um longo túnel na câmara anterior. Este método de injeção minimiza o risco de induzir danos inadvertidos ao tecido e, assim, melhora a precisão e a reprodutibilidade.

Resumo

A injeção intracameral é uma rotina de administração padrão em oftalmologia. A aplicação da injeção intracameral em roedores para pesquisa é desafiadora devido às dimensões limitantes e anatomia do olho, incluindo o pequeno volume de humor aquoso, a curvatura do cristalino e a espessura do cristalino. Danos potenciais durante injeções intracamerais introduzem efeitos adversos e variabilidade experimental. Este protocolo descreve um procedimento para injeção intracameral em ratos, permitindo precisão e reprodutibilidade.

Ratos Sprague-Dawley foram usados como modelos experimentais. Como a posição do cristalino em ratos se projeta para a câmara anterior, a injeção da periferia, como feito em humanos, é desfavorável. Portanto, uma incisão é criada na região central da córnea usando uma lâmina de estilete de calibre 31 de 0,8 mm para formar um túnel autovedante na câmara anterior. Uma incisão em um ângulo próximo ao plano permite criar um túnel longo, o que minimiza a perda de humor aquoso e o raso da câmara anterior. Uma nanoagulha de calibre 34 é inserida no túnel para injeção. Isso permite a penetração com resistência mínima ao atrito e evita tocar na lente. A injeção de azul de tripano permite visualizar por microscopia de fenda a presença do corante na câmara anterior e excluir vazamentos. A biodisponibilidade para a camada endotelial da córnea é demonstrada pela injeção do corante Hoechst, que corou os núcleos das células endoteliais da córnea após a injeção.

Em conclusão, este protocolo implementa um procedimento para injeção intracameral precisa em ratos. Este procedimento pode ser usado para entrega intracameral de vários medicamentos e compostos em modelos experimentais de ratos, aumentando a eficiência e a reprodutibilidade da pesquisa oftalmológica.

Introdução

A biodisponibilidade dos compostos administrados por administração tópica à superfície do olho é muito limitada, normalmente <5%¹. Os compostos administrados por colírios são eliminados principalmente por drenagem, lacrimejamento induzido, renovação do fluido lacrimal e absorção conjuntival. Além disso, a permeação de compostos através da superfície ocular é altamente restrita pela barreira córnea-conjuntiva ^1,2,3. A córnea é composta por três camadas principais: o epitélio mais externo, o estroma intermediário e o endotélio mais interno. O epitélio su....

Protocolo

Os experimentos do protocolo foram aprovados pelo Comitê Nacional de Permissão - para ciência animal e cumprem a Declaração ARVO o uso de animais em pesquisas oftalmológicas e visuais. Ratos Sprague-Dawley, fêmeas, com idade entre 8 e 10 semanas, foram utilizados para o presente estudo e foram expostos a ciclos claro-escuro de 12/12 h. Os animais foram obtidos de uma fonte comercial (ver Tabela de Materiais).

1. Preparação animal

1. Prepare uma mistura anestésica de cetamina (80 mg / kg de peso corporal em 0,8 mL) e xilazina (4 mg / kg de peso corporal em 0,2 mL) e injete-a por via intraperitoneal em....

Resultados

Ratos Sprague Dawley foram injetados intracameralmente com 5 μL de azul de tripano, de acordo com o protocolo descrito acima. O exame com lâmpada de fenda imediatamente após a injeção demonstrou que a câmara estava corada com azul de tripano, indicando que o material injetado atingiu a câmara anterior (Figura 3). Além disso, a profundidade da câmara anterior estava intacta, sugerindo que a injeção não causou vazamento de humor aquoso e superficialidade da câmara.

Discussão

Os modelos de pesquisa pré-clínica devem fornecer um ambiente controlado e reprodutível para garantir a confiabilidade e aplicabilidade dos achados. Na pesquisa oftalmológica, os modelos de injeção ocular são comumente usados em diversos aspectos de pesquisa, desde o estabelecimento de modelos de doenças, testes de novos tratamentos e avaliação de reações teciduais e potenciais efeitos adversos.

As injeções intracamerais servem como uma técnica comum em oftalm.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Vermelho de alizarina	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorfina	Richter pharma	102047
Dexametasona 0,1%	Hamilton Fisher Pharmaceutical	393102-0413
10 μ L	Hamilton Co.
Hoeschst	Merck	B2261
Cetamina	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacina 0,3% colírio	Allergan	E92170
Cloridrato de oxibuprocaína 0,4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sódico 200 mg/mL	CTS	N/A
Microscópio de fenda	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Lâmina de estilete 31 G 0.8 mm	Microscópio cirúrgico Tecfen medical (skymed)	QKN2808
	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health

Seringa de vidro 721711615648