Isolamento de células endoteliais pancreáticas de camundongo

Alonso Tapia; Naseeb Kaur Malhi; Xuejing Liu; Muxi Chen; Zhen Bouman Chen

doi:10.3791/66690

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Artigo de método

Isolamento de células endoteliais pancreáticas de camundongo

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DOI:

10.3791/66690

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21 de junho de 2024

Alonso Tapia¹^,² , Naseeb Kaur Malhi² , Xuejing Liu² , Muxi Chen² , Zhen Bouman Chen¹^,²

¹Irell and Manella Graduate School, City of Hope, ²Department of Diabetes Complications and Metabolism, City of Hope

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve o isolamento de células endoteliais de camundongos de todo o pâncreas.

Resumo

O pâncreas é um órgão vital para manter o equilíbrio metabólico dentro do corpo, em parte devido à sua produção de hormônios metabólicos, como insulina e glucagon, bem como enzimas digestivas. O pâncreas também é um órgão altamente vascularizado, uma característica facilitada pela intrincada rede de capilares pancreáticos. Esta extensa rede capilar é composta de células endoteliais (CEs) altamente fenestradas importantes para o desenvolvimento e função do pâncreas. Assim, a disfunção dos CEs pode contribuir para a do pâncreas em doenças como diabetes e câncer. Assim, pesquisar a função dos CEs pancreáticos (CEPs) é importante não apenas para a compreensão da biologia do pâncreas, mas também para o desenvolvimento de suas patologias. Modelos de camundongos são ferramentas valiosas para estudar doenças metabólicas e cardiovasculares. No entanto, não existe um protocolo estabelecido com detalhes suficientes descritos para o isolamento de pECs de camundongos devido à população relativamente pequena de ECs e às abundantes enzimas digestivas potencialmente liberadas do tecido acinar que podem levar a danos celulares e, portanto, baixo rendimento. Para enfrentar esses desafios, criamos um protocolo para enriquecer e recuperar pECs de camundongos, combinando dissociação física e química suave e seleção mediada por anticorpos. O protocolo apresentado aqui fornece um método robusto para extrair CEs intactos e viáveis de todo o pâncreas do camundongo. Este protocolo é adequado para vários ensaios a jusante e pode ser aplicado a vários modelos de camundongos.

Introdução

O pâncreas, fundamental para o controle metabólico e a homeostase, é um órgão altamente vascularizado. O pâncreas tem funções endócrinas e exócrinas, controlando a regulação da glicose no sangue e das enzimas digestivas, respectivamente. Esses dois compartimentos estão ligados entre si pela extensa rede de vasos sanguíneos pancreáticos, facilitando a troca e o transporte de oxigênio, hormônios e enzimas. Criticamente, essa densa rede capilar penetra na ilhota de Langerhans, um aglomerado de células reguladoras de hormônios dentro do pâncreas responsável por sua função endócrina, consistindo nas células alfa (α) secretoras de glucagon,....