Este trabalho descreve a produção automatizada de até 1,7 GBq de [68Ga]Ga-FAPI-46 no sintetizador iPHASE MultiSyn para imagens PET da proteína de ativação de fibroblastos.
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Artigo de método
Uma Radiossíntese Automatizada de [68Ga]Ga-FAPI-46 para Uso Clínico de Rotina
Neste artigo
Resumo
Resumo
[68Ga]Ga-FAPI-46 é um novo marcador promissor para a imagem da proteína de ativação de fibroblastos (FAP) por tomografia por emissão de pósitrons (PET). Os inibidores de FAP marcados (FAPIs) demonstraram captação em vários tipos de câncer, incluindo câncer de mama, pulmão, próstata, pâncreas e colorretal. O FAPI-PET também possui uma vantagem prática sobre o FDG-PET, pois não são necessários jejum e repouso. [68Ga]O Ga-FAPI-46 exibe propriedades farmacocinéticas aprimoradas, retenção tumoral aprimorada e imagens de maior contraste do que as imagens apresentadas anteriormente [68Ga]Ga-FAPI-02 e [68Ga]Ga-FAPI-04. Embora um protocolo de síntese manual para [68Ga]Ga-FAPI-46 tenha sido inicialmente descrito, nos últimos anos, métodos automatizados usando diferentes sintetizadores comerciais foram relatados.
Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento da síntese automatizada de [68Ga]Ga-FAPI-46 usando o sintetizador iPHASE MultiSyn para aplicações clínicas. Inicialmente, foram investigadas a otimização do tempo de reação e a comparação do desempenho de quatro diferentes cartuchos de extração em fase sólida (SPE) para purificação do produto final. Em seguida, o desenvolvimento e a validação da produção de 0,6-1,7 GBq de [68Ga]Ga-FAPI-46 foram conduzidos usando esses parâmetros otimizados. O produto foi sintetizado em 89,8 ± rendimento corrigido de caimento de 4,8% (n = 6) ao longo de 25 min. O produto final atendeu a todas as especificações de controle de qualidade recomendadas e foi estável até 3 h após a síntese.
Introdução
A proteína de ativação de fibroblastos (FAP) tornou-se um alvo proeminente para imagens e terapia do câncer1,2. A PAF é um marcador específico de fibroblastos associados ao câncer (CAFs), um tipo de célula estromal que constitui grande parte do microambiente de cânceres sólidos. Os CAFs desempenham um papel fundamental no crescimento, invasão e metástase do tumor3. Eles são encontrados na maioria dos tumores sólidos, incluindo câncer de mama, próstata e pâncreas1. Ao direcionar a PAF com inibidores de pequenas moléculas marcados com radionuclídeos diagnósticos ou....
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Protocolo
ATENÇÃO: Este protocolo envolve o manuseio de materiais radioativos. Todos os profissionais que realizarem este trabalho devem ser adequadamente treinados no manuseio de radioisótopos não selados e devem ter a aprovação do responsável pela segurança radiológica de sua instituição. O sintetizador automatizado deve estar localizado em uma cela quente dedicada e blindada. Experimentos manuais devem ser realizados em uma cela quente blindada ou atrás de proteção contra radiação. Os experimentos preliminares para a otimização do tempo de reação e para o teste de diversos cartuchos de ECP são descritos na Seção Suplementar 1 (Arquivo Suplementar 1
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Resultados
A eficiência de marcação radioativa avaliada entre 5 e 20 minutos de reação a 95 °C é apresentada na Tabela 2. As cartuchas de SPE pós-purificação HLB 30 mg, Strata X 60 mg e Sep-Pak C18 Plus Short 360 mg apresentaram recuperações muito semelhantes (94,3 ± 0,5% corrigida para decaimento [DC]) (Tabela 3). Em nossa experiência, a recuperação na HLB 225 mg foi muito menor (63,8 ± 3,5% DC).
Tabela 2: Resumo da conversão radioquímica da reação bruta medida .......
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Discussão
Este trabalho descreve a produção confiável e de alto rendimento de [68Ga]Ga-FAPI-46 no sintetizador MS para aplicações clínicas. O trabalho preliminar deste protocolo testou, na mesma série de experimentos, diferentes tempos de reação para a síntese de [68Ga]Ga-FAPI-46, bem como quatro cartuchos SPE diferentes para a purificação do produto final. A fim de (i) reduzir a dose de radiação para o operador e (ii) recriar as condições em que a produção de rotina de [68Ga]Ga-FAPI-46 seria desen.......
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Divulgações
Os autores não têm parcerias comerciais ou fontes de financiamento que resultem em um conflito de interesse real ou percebido relacionado a este trabalho para divulgar.
Agradecimentos
Os autores reconhecem e agradecem à SOFIE Biosciences Inc. por fornecer o precursor químico FAPI-46 e o padrão [natGa]Ga-FAPI-46, à Charlies Foundation for Research pelo apoio financeiro, Stan Poniger da iPHASE Pty Ltd e à equipe de Produção de Radiofármacos (RAPID) do Departamento de Tecnologia Médica e Física do Hospital Sir Charles Gairdner por seu apoio científico e técnico. Os autores também reconhecem a assistência do WA National Imaging Facility Node, que é apoiado por financiamento de infraestrutura do Governo do Estado da Austrália Ocidental em parceria com o Governo Federal Australiano, por meio da capacidade da Estratégia Nacional de Infraestrutu....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,1 M Ácido clorídrico (HCl) ultra puro | ABX composto bioquímico avançado (Radberg, Alemanha) | HCl-103-G | Usado para eluição de gerador (es) |
| Acetato de amônio | Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Austrália) | A1542-250G | Usado para fazer a fase móvel iTLC |
| C18 SepPak Plus curto (360 mg) | Águas | WAT020515 | Sílica pós-purificação SPE |
| Chromolith Performance RP-18 endcapped 100-4.6 monolítico | Merck Pty Ltd (Victoria (Austrália) | 1021290001 | HPLC RP-18 endcapped column, usado para controle de qualidade de HPLC |
| Calibrador de dose | Capintec | CRC-15PET | Usado para calibrar e medir a atividade de 68Ga |
| Dual scan-RAM | LabLogic Limited (VA, EUA) | SR-1A | Scanner Radio-TLC para análise do papel iTLC |
| Precursor FAPI-46 (GMP) | Composto bioquímico avançado ABX (Radberg, Alemanha) | 3601.0000.050 | Precursor de peptídeos |
| Facilidade de enchimento Frasco de vácuo estéril (10 mL) | Iosotopos HUAYI | SVV-10C | Usado para amostras de esterilidade e retenção |
| Facilidade de enchimento Frasco de vácuo estéril (25 mL) | Iosotopos | HUAYISVV-25A | Usado para radiomarcação de |
| peptídeo Ga68 do produto final com pré-purificação do gerador | iPHASE Technologies (Melbourne, Austrália) | MSR-120G- (RK-3296) | Conjunto de reagentes |
| Radiomarcação Ga68 com pré-purificação do gerador | iPHASE Technologies (Melbourne, Austrália) | MSH-120 | Hardware + conjunto de auxiliares |
| Sistema de cromatografia gasosa (GC) | Tecnologias Agilent (Vic, Austrália) | G2630A | Usado para medir solvente residual |
| GS Fonte padrão (Ba133) | Global Medical Solutions Pty Ltd (Austrália) | D-102-19 | Usado para calibrar o espectômetro gama |
| GS Fonte padrão (Co60) | Global Medical Solutions Pty Ltd (Austrália) | 1559-84 | Usado para calibrar o espectômetro gama |
| Sistema de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) | Shimadzu Scientific Instruments (NSW, Austrália) | LC-20 | Equipamento HPLC |
| Agulha de ventilação hidrofóbica | Baldwin Medical (Victoria, Austrália) | 1088 | Usado com frasco de produto final |
| IGG100 | Eckert & Produtos de isótopos Ziegler (Berlim, Alemanha) | Gerador IGG100-65M-NT | 68Ge/68Ga |
| Seringa de 5 mL (Seringa individual Injekt luer lock) | B Braun (Melsungen, Alemanha) | 4606710V | Seringas de polipropileno (PP)/polietileno (PE), livres de látex, PVC e seringa livre de óleo de silicone usadas para reagentes |
| Tecnologias Agilent de papel iTLC-SG | (Vic, Austrália) | SGI0001 | Usado para análise iTLC |
| Software LabLogic (LAURA) | LabLogic Limited (VA, EUA) | Software LAURA versão 6.1 | Usado para análise de rádio-TLC |
| Ácido L-ascórbico Trace select | Fluka Sigma | 05878-100G | Usado como eliminador de radicais na mistura de reação |
| Lichrosolv Acetonitrila (ACN) | Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Austrália) | 1.00030.2500 | Usado para fazer HPLC fase móvel orgânica |
| Lichrosolv Water | Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Austrália) | 1.15333.2500 | Usado para fazer HPLC fase móvel aquosa |
| Metanol (MeOH) | Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Austrália) | 1060182500 | Usado para fazer detector de fase móvel iTLC |
| Na + < / sup > I-< / sup> | LabLogic Limited (VA, EUA) | 1 "NaI / PMT | Radiodetector usado para radio-HPLC |
| Oasis HLB (30 mg) | Waters (Milford, MA, EUA) | WAT094225 | Copolímero de pós-purificação SPE |
| Oasis HLB Plus curto (225 mg) | Waters (Milford, MA, EUA) | 186000132 | Tiras de pH SPE de copolímero de pós-purificação |
| Thermo Fisher Scientific Australia Tty Ltd | 90424 | Usado para medir o pH do produto | |
| Detector PS | LabLogic Limited (VA, EUA) | Radiodetector de plástico/PMT | PS usado para rádio-TLC |
| Tubo Safe Lock (1,5 mL) | Eppendorf | 0030 120.086 | Usado para amostras de controle de qualidade |
| (+)-L-ascorbato de sódio | Merck Pty Ltd (Victoria (Austrália) | 11140-250G | Estabilizador do produto final Solução de |
| cloreto de sódio (NaCl) (solução salina) | Pfizer | PS111 | 0,9%, para injeção, grau USP |
| Sterican 100 Needles | B Braun (Melsungen, Alemanha) | 4667093 | Usado para produto final |
| Filtro de seringa estéril (0,22 µ m) | Millipore Sigma (Burlington, MA, EUA) | SLGSV255F | Millex-GV |
| Strata SCX (no kit de de hardware) | Phenomenex dentro do kit de hardware da iPHASE Technologies (Melbourne, Austrália) | MSH-120 | Sílica de pré-purificação SPE dentro do |
| de hardware Strata X (no kit de de hardware) | Phenomenex dentro do kit de hardware da iPHASE Technologies (Melbourne, Austrália) | MSH-120 | Sílica de pós-purificação SPE dentro do de hardware |
| Trace Select Water para análise de traços | Honeywell Riedel-de-Haen | 95305-2.5L | Usado para mistura de reação e para pré-condicionar o cartucho SPE de pré-purificação |
| Ácido trifluoracético (TFA) | Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Austrália) | 302031-10X1mL | Usado para fazer seringa de insulina ultrafina de fase móvel aquosa HPLC |
| (0,5 mL) | BD | 326769 | Usado para dispensar amostras de controle de qualidade |
| Filtro ventilado Cathivex-GV 0.22 µ m, membrana Durapore PVDF de baixa ligação a proteínas | Merk Millipore (Cork, Irlanda) | SLGV02505 | Usado para filtrar o produto final |
Referências
- Imlimthan, S., et al. New frontiers in cancer imaging and therapy based on radiolabeled fibroblast activation protein inhibitors: a rational review and current progress. Pharmaceuticals. 14 (10), 1023(2021).
- Siveke, J. T.
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Reimpressões e permissões
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