Estabelecendo um modelo de inflamação grave da córnea em ratos com base na curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea

Xiaoyu Tian; Meng Zhang; Yiming Wu; Liying Zhang; Lingli Zhang; Xueer Zheng; Shangkun Ou; Hao Gu

doi:10.3791/67305

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Artigo de método

Estabelecendo um modelo de inflamação grave da córnea em ratos com base na curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea

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DOI:

10.3791/67305

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22 de novembro de 2024

Xiaoyu Tian^*¹^,²^,³ , Meng Zhang^*¹^,² , Yiming Wu⁴ , Liying Zhang¹^,² , Lingli Zhang¹^,² , Xueer Zheng¹^,² , Shangkun Ou¹^,² , Hao Gu¹^,²

¹Department of Ophthalmology, the Affiliated Hospital of Guizhou Medical University, ²School of Clinical Medicine, Guizhou Medical University, ³The Second People's Hospital of Guiyang City, ⁴Department of Biomedical Sciences, School of Infection, Inflammation and Immunology, College of Medicine and Health, University of Birmingham

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Desenvolvemos um modelo de rato de inflamação grave da córnea por meio de curetagem do epitélio da córnea combinada com suturas da córnea. O estudo avaliou os padrões de inflamação da córnea, proliferação epitelial e alterações nas células-tronco límbicas sob condições inflamatórias.

Resumo

A inflamação da córnea, especialmente a inflamação grave da córnea, desempenha um papel significativo no desenvolvimento da disfunção das células-tronco límbicas da córnea. A construção de modelos animais apropriados pode nos ajudar a focar nos efeitos da inflamação grave nas células-tronco límbicas da córnea. Um removedor de ferrugem de 2 mm foi usado para remover o epitélio central da córnea de ratos Sprague Dawley (SD) para criar uma lesão. Em seguida, o estroma central da córnea foi suturado com pontos de náilon para induzir inflamação persistente. Dessa forma, foi construído um modelo de inflamação da córnea com abrasão do epitélio central da córnea e sutura do estroma central, que induziu inflamação corneana grave. Foram observadas as alterações na inflamação da córnea e na condição das células-tronco límbicas em 1, 3 e 7 dias após a modelagem. No^3º dia após a modelagem, o limbo corneano dos ratos estava severamente edemaciado, com evidente neovascularização e hiperplasia local, sinais típicos de deficiência de células-tronco límbicas. No^7º dia, o edema da córnea piorou gradativamente e a neovascularização continuou a aumentar. Por meio da reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa quantitativa (RT-qPCR) e coloração por imunofluorescência, descobrimos que os fatores inflamatórios epiteliais da córnea foram significativamente regulados positivamente, a diferenciação epitelial da córnea foi anormal, as células-tronco epiteliais da córnea foram significativamente reduzidas e a proliferação celular e a estaminalidade também diminuíram. Portanto, este modelo demonstra que a inflamação grave pode induzir danos às células-tronco límbicas sem danificar diretamente as células-tronco límbicas. O modelo é benéfico para observar os efeitos da inflamação grave nos mecanismos biológicos das células-tronco e fornece uma plataforma ideal para estudar os mecanismos da disfunção das células-tronco epiteliais da córnea induzida pela inflamação.

Introdução

A disfunção das células-tronco límbicas (LSCD) é caracterizada por defeitos epiteliais persistentes, vascularização da córnea, inflamação crônica, cicatrização e conjuntivalização da córnea ^1,2. Pode surgir da depleção ou disfunção das células-tronco límbicas após doenças graves da superfície ocular, como queimaduras químicas, queimaduras térmicas, síndrome de Stevens-Johnson e lesão iatrogênica causada por cirurgias oculares ^2,3,4. Os mecanismos patogênicos do LSCD envolvem principal....