O protocolo descreve o desenvolvimento de dois modelos de roedores que imitam terapias hormonais de afirmação de gênero por meio da administração subcutânea de testosterona ou estradiol mais acetato de ciproterona (usado em terapias humanas para pessoas transgênero): definição das doses, identificação de biomarcadores relevantes e avaliação dos efeitos.
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Artigo de método
Estabelecimento de modelos de ratos imitando terapias hormonais de afirmação de gênero
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Pessoas transgênero (TG) são indivíduos cuja identidade de gênero e sexo atribuídos no nascimento não correspondem. Freqüentemente, são submetidas à terapia hormonal de afirmação de gênero (GAHT), uma intervenção médica que permite a aquisição de características sexuais secundárias mais alinhadas à sua identidade de gênero individual, proporcionando resultados consistentes na melhora de inúmeras variáveis sociopsicológicas. No entanto, o GAHT tem como alvo diferentes sistemas do corpo, e alguns efeitos colaterais são registrados, embora ainda não totalmente identificados e caracterizados. Portanto, as pessoas TG submetidas ao GAHT podem ser consideradas um subgrupo suscetível da população e atenção específica deve ser dada no âmbito da avaliação de risco, por exemplo, por meio do uso de modelos animais direcionados. O presente trabalho descreve os procedimentos estabelecidos para implementar dois modelos de ratos que mimetizam o GAHT: o modelo desmasculinizante-feminizante (dMF) que imita o GAHT para mulheres TG e o modelo desfeminizante-masculinizante (dFM) que imita o GAHT para homens TG. Os modelos foram implementados através da administração dos mesmos hormônios usados para GAHT humano, ou seja, β-estradiol mais acetato de ciproterona para dMF e testosterona para dFM, pelas mesmas vias de exposição por um período de 2 semanas. Os ratos são verificados diariamente durante o tratamento para avaliar o estado de saúde e comportamentos potencialmente agressivos. No sacrifício, o sangue e os tecidos-alvo foram amostrados e armazenados para análise bioquímica, molecular e histopatológica. Parâmetros específicos do sexo, a saber, contagem de espermatozóides e dimensões do clitóris, também foram avaliados. Além disso, as isoformas do CYP450, expressas exclusiva e/ou preferencialmente no fígado de ratos machos e fêmeas, são identificadas e caracterizadas como novos biomarcadores para verificar o sucesso do GAHT e definir o modelo. O envolvimento da tireoide também tem sido explorado como um alvo chave no sistema endócrino.
Introdução
A percepção psicológica do indivíduo de ser homem, mulher, nenhum, ambos ou algo entre1 é chamada de identidade de gênero. Pode corresponder ao sexo biológico (cisgênero) ou pode ser diferente (transgênero - TG). Um homem TG é um indivíduo nascido como mulher, mas que se identifica como homem. Uma mulher TG nasce como homem, mas se identifica como mulher2. Estima-se que, atualmente, existam 25 milhões de TG em todo o mundo3, a maioria delas portadoras de disforia de gênero, condição psicológica caracterizada pela incongruência entre o gênero e o que lhes foi atrib....
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Protocolo
Os estudos são realizados de acordo com a Diretiva 2010/63/UE, o Decreto Legislativo Italiano n. 26 de 4 de março de 2014 e os Princípios de Boas Práticas de Laboratório (BPL) da OCDE. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Ministério da Saúde italiano (autorização nº 806/2021-PR). Aqui, 16 ratos Sprague-Dawley jovens sexualmente maduros de ambos os sexos (304 ± ratos machos de 13 g e 190 ± ratos fêmeas de 7 g, 8-9 semanas de idade) são comprados e alojados em duas gaiolas em condições laboratoriais padrão (22 ± 0,5 ° C, 50% -60% de umidade relativa, 12 h de alternância de luz escura com 12-14 trocas de ar por hora) com água e comida....
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Resultados
Conforme demonstrado por Tassinari et al.14 e por Tammaro et al.33, os resultados a seguir mostraram o sucesso do GAHT em ratos e a adequação dos modelos.
Nenhuma mortalidade ou comportamento anormal, como agressividade, é registrada, e nenhum sinal clínico de toxicidade ou sofrimento (por exemplo, diminuição da atividade, piloereção e aparência não preparada)é observado 14.
As concentrações pla.......
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Discussão
A implementação de modelos de roedores que imitam o GAHT é crucial para estudar a potencial suscetibilidade e vulnerabilidade específica de pessoas TG e os resultados a longo prazo das terapias, geralmente durando toda a vida.
Dado o escasso número de estudos semelhantes na literatura, o ponto crítico deste experimento é a seleção das doses para definir os modelos; Essas doses devem ser suficientemente baixas para serem compatíveis com a administração a longo .......
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Divulgações
Os autores declaram que a pesquisa foi conduzida sem quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem criar um conflito de interesses.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Balança analítica ABJ 320-4NM | Kern | Z741091 | |
| Bouin | Biooptica | 05-M01008 | |
| Centrífuga 5415 R | Eppendorf | Para eppendorf | |
| Acetato de ciproterona | Sigma-Aldrich | C3412 | |
| D-MEM médio | Gibco | ||
| ExcelTaq 2X Fast Q-PCR Master Mix (SYBR, ROX), 200 RXN | Smobio | TQ1210 | |
| Solução de formalina, tamponado neutro, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| Software GraphPad Prism versão 5.0 para Windows | Software GraphPad Hematoxylin | ||
| Biooptica | 05-06002/L | ||
| Heosin | Biooptica | 05-10007/L | |
| Software de imagem | Nikon | NIS-BR | |
| Software estatístico JMP 10 | SAS Institute | ||
| Microm | Thermo Scientific | HM 325 | |
| Microscopia | Nikon Microphot FX | ||
| Mouse/Rato Testosterona ELISA | Biovendor | RTC001R | 96T |
| NanoDrop 1000 Espectrofotômetro | Thermo Scientific | ND-1000 | |
| Paraffina | Biooptica | 087910 | |
| Balanças Portáteis SCOUT STX2202 | OHAUS | br/> 30253064 | |
| Primers | Life | Desenvolvido por PrimerBlast | |
| Estradiol de Rato ELISA | Biovendor | RTC009R | 96T |
| Kit ELISA de TSH de Rato (Hormônio Estimulante da Tireoide) ELK | Biotechnology ELK2283 | 96T | |
| Kit ELISA de TSH de Rato (Hormônio Estimulante da Tireoide) ELK | Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Kit de Síntese SensiFASTcDNA | Bioline | BIO-65053 | 50 reações |
| Óleo Sesam | ACROS | AC241000010 | |
| ratos Sprague Dawley masculino e feminino | Envigo | 8/9 semanas de idade | |
| Dietas padrão | Mucedola | 4RF18 | |
| T4 (tiroxina) ELISA Kit ELK | Biotecnologia ELK8716 | 96T | |
| Enantato de testosterona | Sigma-Aldrich | T3006 | |
| Thermal Cycler LineGene 9600 Plus Bioer | Aurogene | ||
| Processador de tecidos | Shandon Excelsior ES, Thermo Scientific) | ||
| KIT de purificação total de RNA | Norgen | 17200 | 50 colunas |
| Victor 3 Leitor multietiquetador | Perkin Elmer | ||
| β-Estradiol 17-valerate | Sigma-Aldrich | E1631 |
Referências
- Rokach, A., Patel, K. Human sexuality: Function, dysfunction, paraphilias, and relationships. , Academic Press. (2021).
- American Psychological Association. Guidelines for psychological practice with transgender and gender nonconforming people. Am Psychol. 70 (9), 832-864 (2015).
- Ammari, T., Sluiter, E. C., Gast, K., Kuzon, W. M.
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Reimpressões e permissões
