Este protocolo apresenta um método validado de cromatografia líquida-mobilidade iónica e espectrometria de massa de alta resolução para determinar a presença de alcaloides da cravagem nos alimentos, em conformidade com o Regulamento (UE) 2023/915 da Comissão, recentemente publicado.
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Artigo de método
Detecção de Alcalóides Ergot Regulados em Matrizes de Alimentos por Cromatografia Líquida - Espectrometria de Mobilidade Iônica Aprisionada - Espectrometria de Massa por Tempo de Voo
Neste artigo
Resumo
Resumo
A espectrometria de massa de mobilidade iônica (IMS) atua como uma dimensão de separação adicional quando integrada aos fluxos de trabalho de cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS). Os métodos LC-IMS-MS fornecem maior resolução de pico, separação aprimorada de compostos isobáricos e isoméricos e melhor relação sinal-ruído (S/N) em comparação com os métodos tradicionais de LC-MS. O IMS fornece outra característica molecular para a identificação de analitos, ou seja, o parâmetro de seção transversal de colisão (CCS), reduzindo os resultados falsos positivos. Portanto, os métodos LC-IMS-MS abordam importantes desafios analíticos no campo da segurança alimentar (ou seja, detecção de compostos em níveis de traços em matrizes alimentares complexas e identificação inequívoca de moléculas isobáricas e isoméricas).
Os alcalóides da cravagem (EAs) são uma família de micotoxinas produzidas por fungos que atacam uma ampla variedade de espécies de gramíneas, incluindo pequenos grãos como centeio, triticale, trigo, cevada, painço e aveia. Foram estabelecidos teores máximos (ML) destas micotoxinas em vários géneros alimentícios, tal como especificado no Regulamento (CE/2023/915) da Comissão. Esta nova legislação inclui seis EAs principais e seus epímeros correspondentes, portanto, é necessária uma metodologia eficiente para distinguir adequadamente essas moléculas isoméricas considerando sua co-ocorrência.
Portanto, o objetivo deste protocolo é mostrar como a integração do IMS em fluxos de trabalho LC-MS contribui para a separação de EAs isoméricos, aumentando a seletividade do método analítico. Além disso, ilustra como a geração de bibliotecas de CCS por meio da caracterização de padrões analíticos fornece maior confiança para a identificação de micotoxinas. Este protocolo foi concebido para explicar claramente os benefícios da implementação do SGI na segurança alimentar, tomando como exemplo a determinação de EAs em cereais. Uma extração baseada em QuEChERS seguida por uma análise de espectrometria de mobilidade iônica com aprisionamento por LC (TIMS)-MS forneceu limites de quantificação variando de 0,65 a 2,6 ng/g com precisão aceitável (embora baixa recuperação para ergotaminina) em 1,5x, 1x e 0,5x o ML e exibiu um efeito de matriz insignificante.
Introdução
A espectrometria de massa de mobilidade iônica (IMS) está se tornando uma técnica analítica cada vez mais usada, muitas vezes apresentada como uma dimensão de separação adicional integrada à cromatografia líquida/gasosa tradicional (LC/GC) acoplada a fluxos de trabalho de MS. O IMS consiste na separação de moléculas ao longo de uma célula de mobilidade, preenchida com um gás tampão, sob um campo elétrico e à pressão atmosférica1. Dependendo da relação massa-carga (m/z) e da conformação geométrica, uma molécula ionizada interagirá com o gás tampão à medida que se move pela célula de mobilidade, o que é refletido no parâmetro de mobilida....
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Protocolo
1. Preparação de soluções padrão, intermediárias e de trabalho
NOTA: Use luvas de nitrilo, jaleco e óculos de segurança.
- Prepare soluções de estoque individuais dos 12 EAs (consulte a Tabela de Materiais) a 10.000 ng / mL em frascos de vidro âmbar de 4 mL usando acetonitrila. As formas R (-ine) foram previamente aliquotadas em porções de 25.000 ng, enquanto as formas S (-inine) foram distribuídas em porções de 10.000 ng. Este estudo iniciou-se com essas alíquotas, atingindo concentrações de 10.000 ng/mL diluindo as formas R e ....
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Resultados
Primeiro, soluções padrão de trabalho foram injetadas no instrumento LC-IMS-MS para obter todos os recursos de identificação (ou seja, tempo de retenção, CCS e espectros de massa) de cada EA analisado aqui. Como os parâmetros de identificação, exceto a massa exata, eram inicialmente desconhecidos, o método de aquisição foi baseado em um evento de duas varreduras, começando com uma varredura completa de todo o espectro de massa seguida por um bbCID. A forma retrospectiva de abordar este estudo é possibilitada pelo espectr.......
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Discussão
O sucesso do uso desse protocolo baseia-se na otimização do procedimento de extração, previamente realizada por Carbonell-Rozas et al.17, que implementaram o uso de um solvente de extração eficaz o suficiente para extrair EAs de matrizes alimentares complexas, como cevada e trigo, e uma limpeza que forneceu valores de SSE relativamente baixos. A escolha do solvente de extração representa uma etapa crítica considerando as características químicas dos analitos e a l.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Esta investigação foi financiada pela Consejería de Universidad, Investigación e Innovación - Junta de Andalucía (PROYEXCEL_00195) e a bolsa de pós-doutoramento atribuída pela Generalitat Valenciana e Fundo Social Europeu+ (CIAPOS/2022/049). Os autores agradecem ao "Centro de Instrumentación Científica (CIC)" da Universidade de Granada por fornecer acesso à instrumentação analítica usada neste protocolo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Acetonitrila | VWR | 83640.32 | |
| Tubos de vidro âmbar 4 mL | VWR | 548-0052 | |
| Tubos de vidro âmbar 12 mL | VWR | 548-0903 | |
| Frascos âmbar 1,5 mL | Agilent | 5190-9063 | |
| Carbonato de amônio | Fluka | 9716 | |
| Balança analítica BAS 31 | Balança 4400519 | ||
| CP 323 S | Sartorius | 23-84182 | |
| C18 | Supelco | 52604-U | |
| , 15 mL | VWR | 525-1082 | |
| Tubos de centrífuga, 50 mL | VWR | 525-0155 | |
| Centrífuga Universal 320 R | Hettich | 1406 | |
| Compass HyStar | Software de aquisição Bruker | ||
| DataAnalysis | Software qualitativo Bruker | ||
| Elute PLUS UHPLC | Bruker | ||
| EVA EC-S evaporador | VLM | V830.012.12 | |
| Ácido fórmico GR para análise ACS, Reag. Ph Eur | Merck | 100264 | |
| Grinder TitanMill300 | Cecotec | 1559 | |
| Metanol | VWR | 83638.32 | |
| Sistema de purificação de água Milli-Q (18.2 MΩ cm) | de pipeta Millipore ZD5211584 | ||
| 1- 5 mL | Labortecnic | 162005 | |
| Pontas de pipeta 100 - 1000 µ L | Labortecnic | 1622222 | |
| Ponteiras de pipeta 5 - 200 µ L | Labortecnic | 162001 | |
| Pippette Transferpette S variável, DE-M 10 - 100 µ L | MARCA | 704774 | |
| Pippette Transferpette S variável, DE-M 100 - 1000 µ L | MARCA | 704780 | |
| Pippette Transferpette S variável, DE-M 500 - 5000 µ L | MARCA | 704782 | |
| Seringa 2 mL | VWR | 613-2003 | |
| Filtro de Seringa 13 mm, 0.22µ m | Phenomenex | AF-8-7707-12 | |
| TASQ | Bruker | Software | |
| quantitativo timsTOFPro2 IM-HRMS | Bruker | ||
| Vortex Genie 2 | Scientific Industries | 15547335 | |
| Zorbax Eclipse Plus RRHD C18 coluna (50 x 2,1 mm, 1,8 e micro; m tamanho de partícula) | Agilent | 959757-902 | |
| Z-Sep+ | Supelco | 55299-U | Sorvente à base de zircônia |
| alcalóides da cravagem< | strong>Sorvente de registro CAS | ||
| Ergocornine (Eco) | Techno Spec | E178 | 564-36-3 |
| Ergocorninina (Econ) | Techno Spec | E130 | 564-37-4 |
| Ergocristina (Ecr) | Techno Spec | E180 | 511-08-0 |
| Ergocristinina (Ecrn) | Techno Spec | E188 | 511-07-9 |
| Ergokryptine (Ekr) | Techno Spec | E198 | 511-09-1 |
| Ergopkryptinine (Ekrn) | Techno Spec | E190 | 511-10-4 |
| Ergometrina (Em) | Romer Labs | "002067" | 60-79-7 |
| Ergometrinine (Emn) | Romer Labs | LMY-090-5ML | 479-00-5 |
| Ergosine (Es) | Techno Spec | E184 | 561-94-4 |
| Ergosina (Esn) | Techno Spec | E194 | 596-88-3 |
| Ergotamine (Et) | Romer Labs | "002069" | 113-15-5 |
| Ergotaminine (Etn) | Romer Labs | "002075" | 639-81-6 |
Referências
- Kanu, A. B., Dwivedi, P., Tam, M., Matz, L., Hill, H. H. Jr Ion mobility-mass spectrometry. J Mass Spectrom. 43 (1), 1-22 (2008).
- Gabelica, V., et al. Recommendations for reporting ion mobility Mass spectrometry measurements. Mass Spectrom Rev. 38 (3), 291-320 (2019)....
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Reimpressões e permissões
