A lavagem nasal salina pode ser usada para coletar amostras do microambiente imunológico nasal canino. Como a abordagem é relativamente não invasiva e não rompe os tecidos nasais, ela pode ser realizada em série. Células e proteínas coletadas da técnica de lavagem nasal podem ser processadas para várias análises laboratoriais.
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Artigo de método
Lavagem salina para amostragem do microambiente imunológico nasal canino
Neste artigo
Resumo
Resumo
Avaliar o microambiente imunológico local da cavidade nasal canina pode ser importante para investigar condições normais de saúde e doença dos tecidos, particularmente aquelas associadas à inflamação local. Otimizamos uma técnica para avaliar o microambiente imune nasal local de cães por meio de lavagem nasal seriada. Resumidamente, com cães sob anestesia e posicionados em decúbito esternal, solução salina estéril pré-aquecida é lavada na narina afetada usando um cateter de borracha macia flexível. O refluxo do fluido é coletado em tubos cônicos e esse processo é repetido. Os fluidos contendo células e proteínas desalojadas são agrupados e as amostras de lavagem nasal agrupadas são filtradas através de um filtro de células para remover grandes detritos e muco. As amostras são centrifugadas e os pellets celulares são isolados para análise. Uma vez que as amostras tenham sido processadas, as análises que podem seguir a lavagem nasal incluem citometria de fluxo, análise transcriptômica de células via RNA seq em massa ou de célula única e/ou quantificação de citocinas presentes no fluido de lavagem.
Introdução
Os cães desenvolvem rotineiramente condições nasais inflamatórias ao longo da vida. A causa subjacente da rinite aguda ou crônica em cães pode variar de infecciosa (viral: por exemplo, gripe, parainfluenza, herpesvírus; bacteriana [por exemplo, Bordetella, micoplasmas], fúngica [por exemplo, aspergilose, criptococose]; parasitária [por exemplo, ácaros nasais]) a neoplásica (por exemplo, neoplasias nasossinusais, mais comumente histotipos de carcinoma ou sarcoma) a material estranho (por exemplo, corpo estranho, migração intranasal de dentes deslocados) a doença periodontal, bem como rinite inflamatória idiopática canina
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Protocolo
Este procedimento de lavagem nasal foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Estadual do Colorado e pelo Conselho de Revisão Clínica (IACUC # 2425). Um esquema do método de lavagem nasal é apresentado na Figura 1.
1. Preparação para a lavagem nasal
- No dia anterior ao procedimento de lavagem nasal, encha cinco seringas de 20 mL com soro fisiológico estéril (solução de cloreto de sódio a 0,9%) e feche com uma tampa. Coloque as seringas em uma incubadora ajustada para 37 oC para que possam aquecer du....
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Resultados
Com este método de lavagem nasal, a amostra coletada parecerá ligeiramente turva, possivelmente com pedaços visíveis de detritos celulares e muco quando o tubo for girado. Uma amostra seria considerada contaminada com sangue periférico se o procedimento de lavagem induzir inadvertidamente sangramento e a amostra for tingida de vermelho. Embora parte da solução salina infundida seja perdida durante o procedimento, uma lavagem negativa seria considerada se a solução salina infundida não fluir de volta para fora da narina e.......
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Discussão
Existem várias etapas críticas no protocolo de lavagem nasal. Com relação ao cão submetido ao procedimento de lavagem nasal, o cão deve estar dentro de um plano de anestesia profundo o suficiente para que não reaja à colocação do cateter ou à administração da lavagem. Se forem reagentes sob anestesia, isso pode comprometer a qualidade e a quantidade da coleta da amostra de lavagem, além de aumentar potencialmente os riscos de lesão aguda do tecido nasal devido a trauma local do cateter i.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.
Agradecimentos
A técnica de lavagem nasal canina aqui descrita foi otimizada por meio de projetos apoiados pelo K01 OD03109, CCTSI Colorado Pilot Grant Award, Programa de Recursos Compartilhados do Conselho de Pesquisa da Faculdade CSU CVMBS e CO HNC SPORE CA261605: Programa de Aprimoramento de Carreira. A Figura 1 foi criada com BioRender.com.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 1,5 mL Tubos | Eppendorf | 05-402 | |
| 1000 µ L Pipeta | VWR | 89079-974 | |
| 1x PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 20 mL Seringas | VWR | BD302830 | |
| 50 mL Tubos Cônicos | VWR | 89039-656 | |
| 70 µ m Cell Strainer | Fisherbrand | 22-363-548 | |
| 8FR Cateter de Borracha Vermelha Estéril | Med Vet International | 50-252-2428 | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A1049201 | |
| Centrifuge | Beckman Coulter | 366816 | |
| Physiological Salino (0,9%) | Vetivex | 17033-492-01 | |
| Vortex | VWR | 10153-838 |
Referências
- Cohn, L. A. Canine nasal disease: An update. Vet Clin: Small Anim Pract. 50 (2), 359-374 (2020).
- Mortier, J., Blackwood, L. Treatment of nasal tumours in dogs: A review. J Small Anim Pract. 61 (7), 404-415 (2020).
- Plickert, H., Tichy, A., Hirt, R.
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Reimpressões e permissões
