O estudo demonstra o papel da pele na modulação das respostas imunes em camundongos por meio da imunização epicutânea (EC). A imunização contra CE com um antígeno proteico pode suprimir as respostas imunes na hipersensibilidade de contato ou reverter a supressão induzida pela pele quando combinada com padrões moleculares associados a patógenos. A imunização contra a CE mostra-se promissora como uma abordagem eficaz e sem agulha para a imunoterapia.
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Artigo de método
Modelo Murino de Imunomodulação Induzida por Epicutâneo
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A pele, como o maior órgão do corpo humano em interface com o ambiente externo, desempenha papéis fisiológicos cruciais, incluindo (1) proteger o organismo de xenobióticos e microorganismos, (2) facilitar a termorregulação, (3) manter o equilíbrio hídrico e eletrolítico, (4) sintetizar vitamina D e (5) participar da imunidade. Este artigo destaca o envolvimento fundamental da pele nos mecanismos imunológicos, mostrando sua capacidade de imunomodular suprimindo ou potencializando a resposta imune. Descobertas anteriores revelam que, em camundongos, a imunização epicutânea (EC) com um antígeno, isoladamente ou em conjunto com padrões moleculares associados a patógenos (PAMPs), pode suprimir ou potencializar as respostas imunes, respectivamente. Especificamente, observou-se que a imunização contra CE com um antígeno pode suprimir as respostas imunes em vários modelos murinos de doenças autoimunes ou dermatite alérgica de contato. Os resultados indicam que a imunização contra CE com um antígeno combinado com PAMPs pode servir como uma estratégia eficaz para aumentar a imunidade contra patógenos ou aliviar alergias dependentes de linfócitos T helper tipo 2 (Th2). Este protocolo descreve um método para induzir a supressão da pele por meio da aplicação epicutânea de um antígeno em um modelo murino de dermatite de contato alérgica humana (DAC) - hipersensibilidade de contato (CHS) mediada por células Th1. No entanto, também pode ser aplicado a vários modelos de distúrbios murinos. O artigo apresenta a imunomodulação induzida por CE como um modelo murino atraente para imunoterapia sem agulha em vários distúrbios.
Introdução
Este artigo apresenta um método para induzir tolerância (referida como 'supressão' ao longo deste texto) em um modelo de camundongo de hipersensibilidade de contato (CHS) e para reverter essa tolerância (referida como 'contrassupressão' ao longo deste texto) por meio da aplicação epicutânea (EC) de um antígeno sozinho ou em combinação com ligantes para receptores de reconhecimento de patógenos (PRRs), respectivamente1. No protocolo descrito, (a) imunoglobulinas de camundongo haptenizadas (TNP-Ig) são usadas como antígeno para suprimir a hipersensibilidade de contato ou (b) antígeno com padrões molecula....
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Protocolo
Todos os experimentos apresentados neste artigo foram aprovados e conduzidos de acordo com as diretrizes do1º e2º Comitê Local de Ética em Testes em Animais em Cracóvia, Polônia. Os procedimentos obedeceram às recomendações locais, principalmente quanto à administração de cetamina/xilazina ou isoflurano como anestésicos, raspagem da pele de camundongo com lâminas de barbear, aplicação de substâncias/haptenos na pele raspada e em ambos os lados da orelha e coleta de órgãos imunológicos periféricos. O estudo utilizou camundongos machos e fêmeas CBA/J (H-2k), de 6 a 12 semanas de idade, com pesos corporais variando ....
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Resultados
Este estudo examina se os antígenos aplicados via pele isoladamente ou combinados com PAMP podem induzir células Ts ou Tcs, respectivamente, que modulam a reação de CHS. A imunização de camundongos CBA/J via CE com 100 μg de TNP-Ig ou TNP-Ig mais 100 μg de LPS induz células Ts ou Tcs, respectivamente. Os camundongos foram então sensibilizados com 5% de TNCB e desafiados com o mesmo hapteno 4 dias depois. A reação foi avaliada medindo o inchaço da orelha antes e após o d.......
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Discussão
As investigações foram conduzidas em muitos modelos animais diferentes e usando muitas cepas de camundongos como BALB/c, C57BL/6, HLADR4-Tg, DBA 1 e B10.PL e SJL demonstram que a imunização CE com um antígeno atribuído pode servir como um meio versátil e potencialmente ilimitado de criar tolerância e controlar respostas imunes indesejadas. O protocolo atual descreve dois modelos de transferência celular: (1) 'transferência adotiva IN', que é útil para avaliar a imunomodulação durante as .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado por doações do Comitê Polonês de Bolsas de Pesquisa Científica 3 PO5B 091 25, 2PO5A 204 29 e do Centro Nacional de Ciências N N401 3554 33 para MS Os gráficos foram desenhados usando o software GraphPad Prism 10.2.3, e as figuras 1-3 foram criadas no BioRender. Zemelka-Wiacek, M. (2025): (1) https://BioRender.com/3ux2px; (2) https://BioRender.com/s0y8zs7; (3) https://BioRender.com/0qziglw. Os autores agradecem a Dorota Woźniak por cuidar das colônias de camundongos.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 2,4,6-trinitroclorobenzeno (TNCB) | Tokyo Chemical Industry CO., LTD, Japão | C0307 | |
| Imunoglobulina de camundongos conjugada com 2,4,6-trinitrofenil (TNP-Ig) | Cátedra de Ciências Biomédicas, Faculdade de Ciências da Saúde, Faculdade de Medicina da Universidade Jaguelônica, Cracóvia, Polônia | ||
| Acetona (reagente ACS, ≥ 99.5%) | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | 179124 | |
| Papel alumínio | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | Z185140 | |
| balanço analítico | Sartorius Weighing Technology GmbH, Goettingen, Alemanha | PRACTUM224-1, 29105177 | |
| Albumina sérica bovina (BSA) | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | A9418 | |
| CBA/J (H-2k) | Unidade de melhoramento da Cátedra de Ciências Biomédicas, Faculdade de Ciências da Saúde, Faculdade de Medicina da Universidade Jaguelônica, Cracóvia, Polônia | ||
| Filtro de células, tamanho do poro 70 e mu; m | BIOLOGIX, China | 15-1070 | |
| Capacidade das pipetas descartáveis: 5 mL, 10 mL, 25 mL | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | Z740301, Z740302, Z740303 | |
| Dulbecco & prime; S soro salino tamponado com fosfato (DPBS) | ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EUA | 14190144 | |
| Tubos Eppendorf Safe-Lock 1,5ml | Eppenforf, Alemanha | 30120086 | |
| Tubos Eppendorf Safe-Lock, 2,0 ml | Eppenforf, Alemanha | 30120094 | |
| etanol 100% (álcool absoluto) | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | 1.07017 | |
| etanol 96% | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | 1.59010 | |
| Soro fetal bovino (FBS) | ThermoFisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EUA | A3160802 | |
| Lâminas de microscópio de vidro (jateado com areia simples, com fosco) | ThermoScientific, Portsmouth, NH, EUA | 421-004T | |
| Prisma Graph Pad | GraphPad Software Inc. | v. 10.2.3 | |
| sabonete cinza (barra de sabão Bialy jelen) | Polena ostrzeszó w, Producent Chemii Gospodarczej Sp. Z.o.o., Sp. K., Polônia | 163057 | |
| Hemocitômetro | VWR, Avantor, EUA | 612-5719 | |
| incubadora Heracell 150i | Termo Eletrônico & nbsp; LED Gmbh, Alemanha | 41071068 | |
| isoflurano (Aerrane) | Baxter, Deerfield, IL, EUA | 8AGG9623 | |
| cetamina 100 mg/mL, solução para injeção | Biowet Pulawy Sp. z o.o., Pulawy, Polônia | cat.# não disponível | |
| Centrífuga de laboratório (Heraeus Fresco 21) | Thermo Scientific, Alemanha | 75002425 | |
| Centrífuga de laboratório (Heraeus Megafuge 1.0R) | Thermo Scientific, Alemanha | B00013899 | |
| Lipopolissacarídeo (LPS) | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | L-8274 | |
| máscara (FFP2) | VWR, Radnor, Pensilvânia, Estados Unidos | 111-0917 | |
| Micrometro | Mitutoyo, Tóquio, Japão | 193-111 | |
| Microscópio com objetivos | Leica Microsystems CMS GmbH, Alemanha | DM1000, 294011-082007 | |
| propilenoglicol | Chempur, Piekary  Polônia | 114489005 | |
| Lâmina de barbear | VWR, Radnor, Pensilvânia, Estados Unidos | PERS94-0462 | |
| Capas transparentes para documentos 30 & micro; m | ESQUEMÁTICO | 5906961126542 | |
| Azul de tripan | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | T8154 | |
| tubos 15 mL estéreis | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | CLS430055 (Cornining) | |
| tubos de 50 mL, estéreis | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | CLS430290 (Corning) | |
| frascos, tampa roscada, vidro transparente (apenas frasco) 22 mL | Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha | 27173 | |
| Viscoplast Polovis, adesivo de seda, 5x0,0125m | 3M Polônia, Nadarzyn, Polônia | 7100231620 | |
| banho-maria | AJL Electronic, Polônia | LW102 | |
| Solução de xilazina (xylapan 20 mg/mL) para injeção | Vetoquinol Biowet Sp. z o.o., Gorzow Wielkopolski, Polônia | cat.# não disponível |
Referências
- Szczepanik, M., Majewska-Szczepanik, M. Transdermal immunotherapy: Past, present and future. Pharmacol Rep. 68 (4), 773-781 (2016).
- Majewska-Szczepanik, M., et al. Epicutaneous immunization with hapten-co....
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Reimpressões e permissões
