Artigo de método

Procedimento de implante cirúrgico e configuração de fiação para monitoramento contínuo de EEG/ECG de longo prazo em coelhos

1.4K vistas

⸱

DOI:

10.3791/67620

⸱

24 de janeiro de 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Norton College of Medicine, SUNY Upstate Medical University, 2Department of Pharmacology, SUNY Upstate Medical University, 3Department of Medicine-Cardiology, SUNY Upstate Medical University

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O estudo descreve um protocolo para o projeto, fabricação e colocação de um novo sistema contínuo de registro de EEG / ECG em coelhos. Este sistema com fio permite gravações contínuas de EEG / ECG de nove eletrodos distintos na cabeça e no tórax, o que facilita avaliações abrangentes da atividade elétrica no cérebro e no coração.

Resumo

Uma abordagem multissistêmica que inclui a coleta contínua de registros de eletroencefalograma (EEG) e eletrocardiograma (ECG) facilita uma avaliação abrangente da atividade elétrica no cérebro e no coração, particularmente antes e ao redor de eventos episódicos. Com base em nosso protocolo anterior que facilita a coleta de registros intermitentes de EEG / ECG de coelhos conscientes contidos, desenvolvemos um protocolo para a coleta de registros contínuos de EEG / ECG de coelhos não amarrados. Este novo método permite gravações de alta qualidade 24 horas por dia, 7 dias por semana na gaiola de alojamento, que captura a faixa normal de estados fisiológicos e permite que os coelhos se movam, comam, bebam e durmam livremente. Ele permite avaliações abrangentes da prevalência, incidência e suscetibilidade a anormalidades no EEG/ECG, convulsões, arritmias e morte súbita. Este procedimento envolve a colocação cirúrgica de eletrodos subdérmicos e o projeto e fabricação de um sistema de fiação robusto que é impermeável a danos pelos coelhos. O procedimento cirúrgico inclui duas incisões e a tunelização subdérmica de nove eletrodos e fios que saem por uma porta feita sob medida. O conector externo se conecta a um chicote de fios que inclui um giro elétrico, que permite o movimento do coelho em toda a gaiola. Além disso, os fios são colocados em uma bainha de metal suspensa por um cabo retrator no teto da gaiola do coelho. Os fios são então conectados a um amplificador/digitalizador para a aquisição de gravações contínuas de EEG/ECG de alta qualidade.

Introdução

Anteriormente, desenvolvemos um protocolo para coletar gravações agudas (< 5 h) de vídeo/EEG/ECG de coelhos. Envolve o uso de nove eletrodos subdérmicos de EEG e ECG, colocação do coelho em uma contenção e o investigador monitorando de perto o coelho durante toda a duração da gravação1. Embora este sistema forneça gravações de vídeo/EEG/ECG de alta qualidade, ele tem várias limitações. Arritmias, crises epilépticas e outras anormalidades de EEG/ECG podem ser desencadeadas por vários substratos fisiológicos e ambientais, portanto, esses eventos podem ser perdidos durante a realização de registros intermitentes. Assim, esta plataforma de registro não facilita avaliações abrangentes e precisas da função elétrica neurocardíaca ao longo do dia, durante vários estados fisiológicos ou no ambiente normal de alojamento dos coelhos.

O monitoramento contínuo por vídeo/EEG/ECG é importante para avaliar a função elétrica cardíaca e neuronal durante vários estados fisiológicos. Facilita a avaliação precisa da prevalência e incidência de atividade epileptiforme e arritmias, bem como a concordância e progressão de alterações multissistêmicas em torno de eventos episódicos. Por exemplo, as flutuações circadianas na função autonômica, bem como as alterações autonômicas mediadas por estresse e atividade, influenciam muito as métricas de frequência cardíaca e ECG e podem fornecer um gatilho para arritmias 2,3. Em certos tipos de epilepsia (por exemplo, epilepsia mioclônica juvenil), as convulsões são mais prováveis de ocorrer durante o sono ou dentro de 1-2 horas após acordar4. As mudanças dinâmicas na atividade elétrica no cérebro durante o sono podem influenciar a suscetibilidade, origem e disseminação das convulsões5.

Estresse, atividade e convulsões motoras podem causar artefatos musculares e deslocamento dos eletrodos, o que influencia na qualidade e estabilidade dos registros. Em particular, durante estudos pró-convulsivantes, os coelhos apresentam convulsões mioclônicas, clônicas, tônicas e tônicas. A fase tônica envolve a extensão involuntária do pescoço, que pode desalojar os eletrodos dos pinos e, assim, interromper o sinal durante uma fase crítica do experimento. Como tal, o sistema temporário envolvendo eletrodos de pinos tem limitações críticas que devem ser abordadas. Além disso, como os coelhos estão em uma contenção, é difícil documentar toda a extensão das manifestações motoras.

Portanto, é importante desenvolver um procedimento para implantar eletrodos para gravações multissistêmicas contínuas e estáveis de longo prazo quando o animal está em seu ambiente normal sem restrições. Isso facilitará avaliações detalhadas durante uma ampla gama de estados fisiológicos e em resposta a gatilhos ambientais. Também será valioso para capturar eventos episódicos raros. Como a configuração não exige que o investigador esteja presente durante a gravação, aumenta a eficiência e o rendimento da plataforma de pesquisa. Também minimiza a frequência de pessoas perturbando os coelhos. Finalmente, como esse procedimento permite que os animais permaneçam em seu ambiente natural de alojamento durante toda a gravação, melhora a qualidade de vida dos coelhos e melhora o bem-estar geral dos animais.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

O estudo descreve um protocolo para o projeto, fabricação e colocação de um novo sistema contínuo de registro de EEG / ECG em coelhos. O protocolo é aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da SUNY Upstate Medical University. Todos os requisitos da IACUC para bem-estar animal, diretrizes cirúrgicas e desfechos do estudo são seguidos. Os investigadores e o corpo docente / funcionários do Departamento de Pesquisa em Animais de Laboratório da SUNY Upstate realizam verificações regulares de bem-estar e cuidados gerais. Quaisquer lesões, desconforto, infecção ou efeitos adversos são tratados imediatamente.

1. Construção de um conjunto de eletrodos implantáveis

  1. Realize a fabricação interna do conjunto de eletrodos implantáveis em um ambiente sanitário, que inclui uma bancada de laboratório limpa, luvas de exame de nitrilo e uma máscara de procedimento.
  2. Se estiver adaptando um feixe de fios existente com um plugue de conexão rápida e conectores DIN, remova as extremidades macho e fêmea dos plugues (Figura Suplementar 1A). Guarde os plugues e o fio longo com os conectores DIN para os estágios posteriores da montagem do fio (Figura Suplementar 1B).
  3. Adicione ou remova os fios de ambos os plugues e do feixe de fios revestido com conectores DIN para garantir que ele tenha o número de eletrodos necessários (9 para este exemplo de configuração; Figura suplementar 1A).
  4. Reúna 5 eletrodos de EEG (cores vermelho, laranja, amarelo, verde e azul) e 4 eletrodos de ECG (cores preto, rosa, branco e cinza). Usando um tubo termorretrátil e uma pistola de ar quente, agrupe os fios nos comprimentos corretos para o modelo animal da cabeça de cada eletrodo (Figura Suplementar 2A).
    NOTA: Para um coelho branco da Nova Zelândia (1,25 a 13 meses de idade e 0,8 a 4,17 kg): os fios de EEG estão a 25 cm da cabeça do eletrodo, os fios de ECG preto e rosa têm 40 cm (braço esquerdo e perna esquerda), o fio de ECG branco tem 35 cm (braço direito) e o fio de ECG cinza tem 30 cm (perna esquerda). Isso fornece amplo comprimento para tunelar os fios e eletrodos até o local desejado, além de fornecer comprimento extra para o crescimento e movimento do coelho.
  5. Passe o feixe de fios pela bucha de passagem do cabo (Figura Suplementar 2B).
    NOTA: A esterilização por plasma é realizada nos implantes montados antes da cirurgia.
  6. Corte a lateral dos fios do eletrodo a aproximadamente 1-1.5 cm da extremidade da bucha de passagem do cabo e retire um pequeno segmento de ~5 mm de revestimento das extremidades de cada fio (Figura Suplementar 2B).
  7. Conecte uma extremidade de um conector de topo a cada fio que sai da bucha de passagem, crimpando para baixo para uma fixação segura. Coloque um pedaço de tubo termorretrátil em cada fio do plugue. Insira a extremidade desencapada de um fio do plugue no lado não crimpado do conector de topo e conecte-o ao fio correspondente da mesma cor (Figura Suplementar 2C).
    NOTA: Não prenda o tubo termorretrátil, pois ele pode rasgar e deixar o metal condutor dos conectores de topo exposto. A soldagem pode ser feita no lugar dos conectores de topo se o fio selecionado for compatível.
  8. Cubra e termorretrátil cada conector/conexão de topo (sem metal exposto) com um pequeno tubo termorretrátil para isolar cada canal.
  9. Deslize um pedaço de tubo termorretrátil grande sobre o plugue até a base da bucha de passagem do cabo, cobrindo todos os fios e deixando o mínimo de fio exposto na base do plugue (Figura Suplementar 2D). Use a pistola de calor e as luvas de proteção para encolher o tubo termoencolhível.
    NOTA: Certifique-se de não encolher o tubo sobre o mecanismo de travamento necessário para o plugue.
  10. Gere um molde que sirva para moldar a base de acrílico na lateral da porta com os eletrodos (Figura Suplementar 3).
    NOTA: Use uma tampa de tubo cônico de 50 mL, remova as roscas com uma lixadeira e faça quatro fendas em um grupo e depois mais cinco fendas 110 ° -120 ° do primeiro grupo de fendas (Figura Suplementar 3A). Faça um furo de 0,5 polegada na base do molde (tampa do tubo). Aplique fita adesiva no interior do molde. Corte a fita das fendas.
  11. Abaixe a porta montada com bucha de passagem no molde com o plugue (vermelho) passando pelo orifício na parte inferior do molde. A unidade está no lugar quando a bucha de passagem do cabo fica nivelada com a parte inferior do molde (Figura Suplementar 3B).
  12. Organize os fios de forma que os cinco eletrodos de EEG fiquem dentro das cinco fendas no lado esquerdo do molde e os quatro fios de ECG fiquem dentro das quatro fendas no lado direito do molde. Cubra as fendas no interior do molde com fita adesiva.
  13. Em uma área bem ventilada, misture o acrílico dental em um frasco de vidro usando duas partes de pó de resina e uma parte de líquido de resina. Usando uma pipeta de transferência, misture o pó e o líquido até que a mistura fique viscosa, mas ainda flua através de uma pipeta de transferência.
  14. Use uma pipeta de transferência para distribuir a mistura acrílica no molde, garantindo que todos os fios estejam cobertos. Deixe o acrílico começar a endurecer, mas remova a base de acrílico da tampa do tubo antes que o acrílico endureça totalmente.
  15. Lixe todas as bordas ásperas da base da porta de acrílico. A Figura 3C suplementar ilustra o produto final dos fios embutidos no acrílico, que passam pela bucha de passagem, conectam-se ao plugue e são todos vedados com tubos termorretráteis.

2. Conjunto do chicote de fios

  1. Obtenha o plugue que é complementar ao plugue na porta. Obtenha o giro e guarde nove fios pré-conectados de cada lado (Figura Suplementar 4).
  2. No lado giratório pequeno, apare os fios com 5 cm de comprimento e retire 5 mm do revestimento do fio da extremidade de cada um (Figura Suplementar 5A).
  3. Corte um pedaço pequeno de tubo termorretrátil de 2 cm e coloque-o sobre cada fio do plugue complementar (Figura Suplementar 5A).
  4. Solde os fios do plugue ao fio da cor correspondente no lado pequeno do giro (Figura Suplementar 5A).
  5. Para cada fio, deslize o tubo termorretrátil sobre as conexões de solda. Use pistola de calor para fixar.
  6. Passe um longo pedaço de tubo termorretrátil grande sobre o plugue e deslize para cobrir todo o comprimento do feixe. O tubo termorretrátil deve ser longo o suficiente para cobrir 2,5 mm do plugue e o máximo possível do lado pequeno do giro sem impedir sua capacidade de girar. Use uma pistola de calor para afixar (Figura Suplementar 5B).
  7. No lado grande do giro, retire 5 mm de revestimento da extremidade de cada fio. Deslize um > pedaço de revestimento de metal de 45 cm sobre o feixe de fios (isso é mais fácil se começar pela extremidade cortada, não pela extremidade com conectores DIN) e passe até que os fios cortados fiquem expostos.
    NOTA: Corte pedaços de 2 cm de comprimento de um pequeno tubo termorretrátil e coloque-os sobre cada um dos fios no lado grande do giro (Figura Suplementar 5B). Corte um pedaço maior de filme retrátil (5 cm de comprimento) e deslize-o sobre todo o feixe de fios. Nas etapas a seguir, mantenha todos os tubos termorretráteis longe do calor/solda.
  8. Prenda os fios da extremidade maior do giro aos fios do eletrodo cortado (extremidade com conectores DIN) por meio de torção e solda do fio (Figura Suplementar 5B).
  9. Fixe o pequeno tubo termorretrátil com uma pistola de calor sobre cada conexão. Para evitar pressão ou esmagamento dos fios no lado grande do giro, adicione um pedaço extra grande de tubo termorretrátil adesivo diretamente sobre a extremidade grande do giro (cobrindo 8 mm do giro) e nos fios (cobrindo 2 cm de fio). Use uma pistola de calor para fixar (Figura Suplementar 5C).
  10. Deslize o revestimento de metal sobre os fios recém-conectados e gire (Figura Suplementar 6A). Se o revestimento de metal não deslizar sobre o giro, use um alicate ou uma esmerilhadeira para remover e alisar o colar do giro para que ele se encaixe bem no revestimento de metal. Isso deve exigir que o usuário gire o revestimento sobre o giro.
  11. Continue torcendo até que o revestimento atinja a base do plugue, mas não iniba a rotação de girar. Isso é importante para que o revestimento permaneça afixado ao giro (Figura Suplementar 6B).
  12. Estique o revestimento de metal até o comprimento máximo e observe este local no revestimento de náilon/feixe de arame.
  13. Corte um pedaço de tubo de borracha de 15 mm (diâmetro externo, diâmetro externo, OD) de 1 cm de comprimento e deslize-o sobre a folha de náilon e o feixe de fios (começando no lado do conector DIN, Figura Suplementar 6C).
  14. Coloque um pedaço de tubo retrátil grande de 3 cm sobre o tubo de borracha. Usando uma pistola de ar quente, fixe a borracha e o tubo retrátil neste local marcado. Isso funcionará como uma rolha para evitar que os fios puxem o revestimento de metal.
  15. Adicione dois pedaços de tubo termorretrátil (1 cm de comprimento) sobre o revestimento de metal não esticado a 20 cm e 24 cm da extremidade do plugue. Use uma pistola de calor para fixar (Figura Suplementar 6C). Esses locais são usados posteriormente para prender o suporte do cabo retrator. A Figura 7 suplementar ilustra o chicote de fios completo, que inclui o plugue, os fios, o giro, o revestimento de metal, a rolha e os pontos de fixação do cabo retrator.

3. Procedimento cirúrgico

  1. Administre antibióticos orais (por exemplo, doxiciclina a 5 mg/kg) 24 h e 48 h antes do procedimento cirúrgico, bem como diariamente por 5 dias após a operação.
  2. Calcule a dosagem de cetamina (40 mg/kg) e xilazina (6 mg/kg) com base no peso (sem restrições de peso ou sexo, mas recomenda-se que os coelhos sejam pelo menos desmamados para reduzir a chance de a mãe ou irmãos de ninhada perturbarem o implante do eletrodo). Administre esses medicamentos por injeção intramuscular (IM).
  3. Quando o coelho estiver totalmente sedado (sem resposta a estímulos físicos), aplique gel umedecedor protetor nos olhos do coelho. Feche as pálpebras sobre o gel para distribuir uniformemente.
  4. Use um barbeador elétrico (grosso e depois fino) para remover o pelo entre os olhos do coelho até 5 cm caudal ao ângulo inferior das escápulas. Remova o pelo ao redor do flanco direito do coelho. Continue a raspar o pelo ventral do coelho entre os membros dianteiros até a borda inferior das costelas.
  5. Inicie a anestesia de manutenção inalatória (2%-3% de isoflurano). Comece com 1,5-2 L/min (LPM) com administração simultânea de oxigênio a 1,5 LPM. Coloque uma máscara de anestesia veterinária que se ajuste bem ao nariz e à boca do coelho. Certifique-se de que a junta de borracha vede adequadamente ao redor do rosto do animal sem que o nariz do coelho empurre a parte de trás da máscara.
  6. Coloque uma sonda de SpO2 na pata do coelho e confirme os valores fisiológicos e as formas de onda. Posicione o animal do lado esquerdo para que o flanco direito fique acessível. Realize o restante do procedimento cirúrgico sob técnica asséptica, que inclui os cirurgiões vestindo um avental estéril, rede de cabelo, capas de sapato, máscara de procedimento, esfregando e usando luvas estéreis. Esterilize todas as ferramentas, soluções e implantes.
    NOTA: O investigador deve verificar se o coelho está aquecido enquanto anestesiado. Recomenda-se uma mesa de procedimento aquecida ou almofadas de aquecimento, juntamente com campos cirúrgicos.
  7. O assistente cirúrgico não estéril distribui betadina e álcool isopropílico para bacias estéreis. Cubra a área com betadina seguida de álcool isopropílico e repita 3x, começando no local cirúrgico pretendido e irradiando para fora em um padrão circular. Coloque cortinas estéreis sobre o coelho de forma que o local cirúrgico pretendido ainda fique exposto.
  8. Execute a colocação de eletrodos de ECG conforme descrito abaixo.
    1. Faça 4 pequenas marcas usando um marcador de ponta estéril nos locais pretendidos para a colocação do eletrodo de ECG. Os locais pretendidos incluem a parede torácica superior medial à (1) axila direita (RA) e (2) esquerda (AE) e no aspecto anterior (3) direito (RL) e (4) esquerdo (LL) da borda inferior das costelas inferiores (ao longo da linha hemiclavicular; Figura Suplementar 8A). Isso criará a configuração de chumbo do triângulo de Einthoven com um aterramento no local inferior direito.
    2. Faça uma incisão longitudinal de 2,5-3,5 cm no flanco direito do animal, cerca de 1 cm dorsal ao membro frontal direito do coelho (Figura Suplementar 8B).
    3. Usando hemostáticos, disseque ventralmente sem rodeios, de modo que uma bolsa subdérmica seja feita em todo o tórax. Certifique-se de que esta bolsa se estenda até os quatro locais marcados para cada um dos quatro eletrodos de ECG.
    4. Usando a extremidade sem agulha da sutura de monofilamento 3-0, amarre 3 conjuntos de nós cirúrgicos ao redor da base do eletrodo (Figura Suplementar 9A). A Figura 9B suplementar ilustra a maneira ideal de carregar a agulha nos hemostáticos: agarrando-a na base da sutura de forma que a agulha fique paralela ao comprimento dos hemostáticos. Isso é para ajudar a passar a agulha pela bolsa subdérmica sem ficar presa no tecido próximo.
    5. Passe a agulha agora presa a um eletrodo pela bolsa subdérmica e saia da pele no local marcado (Figura Suplementar 10A). Cobrir a pele com uma pinça ou sutura e uma tração suave para cima na pele aumenta o espaço dentro da bolsa subdérmica e reduz a chance de a agulha ficar presa no tecido conjuntivo.
    6. Aplique tração suave até que o eletrodo permaneça no local marcado (Figura Suplementar 10B). Solte a tração e palpe para verificar se o eletrodo permanece no lugar. Se o tecido conjuntivo estiver impedindo que o eletrodo fique no local marcado, disseque ainda mais o caminho do fio e do eletrodo.
      NOTA: Aplicar força/tração excessiva na sutura para estimular o eletrodo a ficar onde desejado não funcionará e poderá causar danos excessivos ao local da sutura ou quebrar a sutura.
    7. Para prender o eletrodo no local marcado, passe a sutura de monofilamento 3-0 e a agulha pela pele do coelho diretamente adjacente ao local de saída da sutura (Figura Suplementar 11A).
    8. Puxe a sutura parcialmente através da pele, de modo que um pequeno laço permaneça (Figura Suplementar 11B).
    9. Dê um nó cirúrgico padrão usando o barbante singular (com a agulha presa) de um lado e o laço (como se fosse um barbante singular) do outro (Figura Suplementar 11C). A gravata resultante deve ser semelhante à Figura Suplementar 11D. Apare o excesso de sutura restante.
      NOTA: Evite amarrar a sutura externa com muita força ou criar uma covinha na pele. Se necessário, coloque a ponta de uma pequena tesoura afiada dentro do nó à medida que ela é apertada. Isso deixará uma fixação solta, o que reduz o risco de o eletrodo crescer posteriormente através da pele.
    10. Repita esse processo para os eletrodos de ECG restantes. Aplique cola cirúrgica em cada um dos nós externos.
  9. Execute a colocação de eletrodos de EEG conforme descrito abaixo.
    1. Gire o animal para a posição de bruços e certifique-se de que a máscara facial de anestesia esteja presa e os dispositivos de monitoramento fisiológico posicionados corretamente. Cubra a área com betadina seguida de álcool isopropílico e repita 3x, começando no local cirúrgico pretendido e irradiando para fora em um padrão circular. Coloque cortinas estéreis sobre o coelho de forma que o local cirúrgico pretendido ainda fique exposto.
    2. Usando um marcador de ponta estéril, coloque cinco pequenos pontos no local pretendido para a colocação do eletrodo de EEG nos locais de referência frontal direito (RF), frontal esquerdo (LF), occipital direito (RO), occipital esquerdo (LO) e centro (Cz) (Figura Suplementar 12). A partir da incisão no flanco do coelho, dissecar sem corte em direção ao ângulo inferior das escápulas e depois à base da cabeça.
    3. Faça uma pequena incisão transversal na cabeça, com 1,5 cm de comprimento, estendendo-se entre a face anterior da base das orelhas (Figura Suplementar 12). Incise com cuidado para evitar danificar qualquer musculatura subjacente.
    4. Dissecar caudalmente a partir desta incisão até que seja feita uma bolsa subdérmica que se conecte à incisão no flanco. Dissecar cranialmente até que haja uma bolsa subdérmica feita na cabeça do animal que se estende até os locais para a colocação de cada um dos eletrodos de EEG. Tenha cuidado para não aplicar força excessiva aqui, pois as órbitas e vários músculos podem ser danificados.
    5. Passe os hemostáticos emborrachados pela incisão na cabeça até a incisão no flanco. Segure os eletrodos de EEG (1-2 eletrodos de cada vez), puxe pela bolsa subdérmica e saia pela incisão na cabeça. Repita o processo de amarrar uma sutura ao redor da base de cada eletrodo, conforme descrito anteriormente na etapa 3.8.4 e mostrado na Figura Suplementar 9A.
    6. Coloque e prenda os eletrodos de EEG. Passe a agulha pela bolsa subdérmica na cabeça e perfure a pele nos locais marcados. Puxe a sutura no lugar e prenda-a com os métodos descritos nas etapas do protocolo 3.8.7-3.8.9 e ilustradas na Figura Suplementar 11.
    7. Repita para todos os cinco eletrodos. Recomenda-se colocar primeiro os eletrodos frontais, seguidos de Cz, seguidos dos eletrodos occipitais. Aplique cola cirúrgica em todos os nós de sutura externa.
    8. Insira uma pinça grande na incisão no flanco, abra a pinça e levante a pele no local marcado para a porta, que é caudal ao ângulo inferior das escápulas.
    9. Use uma biópsia por punção de 6 mm para criar um orifício circular. Gire suavemente a lâmina de biópsia em qualquer direção até que o orifício esteja completo. Remova a pele incisada dentro da biópsia por punção (Figura Suplementar 13A).
    10. Cubra o plugue do fio com plástico/borracha para evitar que sangue/tecido entre no plugue. Passe a porta pela incisão no flanco e empurre o lado do plugue da porta através do orifício feito pela biópsia por punção. A Figura 13B suplementar ilustra a porta que sai da pele e as cores denotam os fios que são tunelados sob a pele e viajam para a cabeça (EEG) e tórax (ECG).
    11. Pressione a pele até a base da porta para que tudo fique esticado. Coloque uma junta de borracha sobre a porta e empurre para baixo até que fique nivelada com a pele. Coloque o excesso de fio na bolsa subdérmica na parte traseira e no flanco, tomando cuidado para dissecar uma bolsa grande o suficiente para acomodar e distribuir uniformemente o excesso de fiação. Certifique-se de que os fios não se amontoem em nenhuma área ou passem diretamente sob a porta, pois isso pode causar irritação.
    12. Junte suavemente a pele e feche todos os locais de incisão usando suturas simples interrompidas. Aplique cola cirúrgica em todas as suturas de monofilamento 3-0 de fechamento e ao longo do comprimento das incisões. Dê tempo para que a cola cirúrgica seque.
      NOTA: Comece a titular a anestesia inalatória e depois desligue-a após o acrílico endurecer (3.9.14). Mantenha a sonda de SpO2 no lugar por pelo menos 15 minutos para monitoramento pós-operatório.
    13. Misture uma proporção de 2:1 em volume de pó acrílico e líquido usando uma pipeta de transferência. Misture até que pareça fino o suficiente para passar por uma pipeta de transferência, mas grosso o suficiente para permanecer no local da porta.
    14. Aplique a mistura acrílica na parte externa da porta, criando uma pequena cúpula de acrílico que sela o local da porta para a pele. Dê tempo para que o acrílico solidifique. Coloque gaze estéril sobre o local da incisão no flanco do coelho e enrole o coelho com envoltório veterinário (ou seja, solto o suficiente para caber facilmente 2-3 dedos embaixo do envoltório). A incisão na cabeça pode ser deixada descoberta.
    15. Deixe o coelho se recuperar em uma gaiola com acolchoamento, um cobertor e uma fonte de calor. O coelho deve ser supervisionado durante todo este processo. Quando o coelho começar a acordar (espasmos nasais, algum movimento), administre uma dose subcutânea de buprenorfina de liberação sustentada (0,1 mg / kg). Continue a supervisão direta até que o coelho recupere a consciência (em pé e navegando de forma independente na gaiola).
    16. Deixe o coelho cicatrizar (pelo menos 72 h) antes de conectar a porta do coelho ao chicote de fios para coleta de dados.
      NOTA: Siga todas as etapas de cuidados pós-operatórios adequados para garantir a cicatrização e o conforto adequados durante esse período, incluindo, no mínimo, observações diárias da ingestão de alimentos e água, evacuação, micção, cicatrização do local da incisão, níveis de energia e aparência de dor ou desconforto. Remova todas as suturas nos locais de incisão 10 dias após a cirurgia.

4. Medição de EEG/ECG

  1. Passe o chicote de fios pelo centro superior da gaiola do coelho (3/4 de polegada de diâmetro; Figura Suplementar 14).
  2. Conecte os conectores DIN a um dispositivo de monitoramento apropriado. Fixe um cabo retrator na parte superior dentro da gaiola perto do orifício para o chicote de fios.
  3. Estenda o fio do cabo retrator com um clipe na extremidade e prenda-o ao chicote de fios no local entre as 2 peças do tubo retrátil (Figura Suplementar 15).
  4. Prenda os fios na parte superior fora da gaiola para que não deslizem para dentro dela (Figura Suplementar 14, por exemplo, fita adesiva).
  5. Conecte o plugue do chicote de fios ao plugue nas costas do coelho (Figura Suplementar 16). Sinal de registro (Figura 1).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Com essa técnica cirúrgica, não houve casos de mortalidade durante ou após a cirurgia. Existe o risco de infecção e cicatrização incompleta da ferida, principalmente se o coelho arranhar ou morder no local da incisão. Antibióticos pré/pós-operatórios, cobrindo a incisão com um pedaço de gaze estéril seco e colocando um colete no coelho ajudam a proteger o local da cirurgia e permitem uma melhor cicatrização. Todas as gravações são realizadas na gaiola padrão do coelho, que é usada para o ...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

Apresentamos um protocolo detalhado para a geração de um chicote de fios personalizado, a fabricação interna de um implante e o procedimento para a implantação estéril dos eletrodos, fios e porta de EEG/ECG. Essa configuração facilita a coleta de registros contínuos e de alta qualidade de EEG/ECG de maneira eficiente, segura e financeiramente viável. Este protocolo gera um sistema no qual os dados de EEG e ECG podem ser coletados em coelhos sem a necessidade de contenção ou supervisão co...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar. Uma parte das informações contidas neste manuscrito também está presente na tese de mestrado do primeiro autor (Laura Williams) com a permissão adequada.

Agradecimentos

Gostaríamos de agradecer a Pradeep Dumpala, DVM PhD, Sarah Blair, MA, e à equipe de criação da SUNY Upstate Medical University por sua dedicação e atenção em cuidar dos coelhos. NIH-NINDS (1R61NS133273), Departamento de Farmacologia, SUNY Upstate Medical University

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Envoltório termorretrátil 3:1 com adesivoN/AWireflyTubo de poliolefina revestido com adesivo projetado para encolher 1/3 do diâmetro quando aquecido. Isole os eletrodos ao conectar fios e plugues, conectando peças do chicote de fios
Almofadas absorventes-quaisqueralmofadas absorventes para coleta de fluidos
BD E-Z Scrub 116 Escova/Esponja Cirúrgica371163BD E-Z Scrub3% PCMX Escova/Esponja Cirúrgica Para esfregar antes de operar para técnica asséptica
Socadores de Biópsia1315ARGENT, McKessonLâmina de corte circular de 6 mm para incisão circular para porta
Buprenorfina-0,3 mg/mL Buprenorfina Para controle da dor pós-operatória
Conectores de topoX003C7S38PSVAAREmenda de topo de cobre estanhado 26-22 AWG conectores de topo não isolados Conectando fios de fibra de carbono dos eletrodos ao plugue
Caneta de cauterizaçãohttps://jorvet.com/product/cautery-kit-accessories/Laboratórios Jorgensen, Inc.Caneta de Mão Bovie Cautery Para controlar o sangramento
Bucha de cabo coaxial através da paredeCOAX BUSH WHBucha de plástico elétrico comercialcom abertura de diâmetro interno de 6,9 mm e porta de fio de poste de 1 cm +
Envolvimento coesohttps://healthypets.com/vetone-cohesiant-wrap-blue-2x5yd/AmerisourceBergen4in x 5yd envoltório auto-aderente para proteção de feridas pós-operatórias
Bisturi descartável com cabohttps://www.securos.com/Securos Surgical Bisturis descartáveis estéreis AmerisourceBergen para fazer incisões
AnelTaidacentBola de alta velocidade Anel deslizante condutor 12 vias 2A Anel coletor conector rotativo de junta rotativa, Anel deslizante elétrico para permitir a livre circulação do animal sem amarrar o chicote de fios
Eye lube prohttps://domespharma.us/eye-lube-pro-detailer-final-v6/SentrxGel Lubrificante Previne o ressecamento/dano ocular durante a anestesia
GLUtureAdesivo deInstrumentos de Precisão Mundial503763 Para fechamento de locais de incisão 
IsofluranoANADA # 200-129IsospireIsoflurano Para anestesia
Álcool isopropílico500205VETone70% álcool isopropílico Anti-séptico tópico
Jet Liquid1403Lang Dental Mfg. Co., Inc.Resina acrílica líquida de cura rápida Resina acrílica dental líquida para selar a bucha e os fios para a porta de saída do fio.  Também usado para selar a porta na pele.
Jet Tooth Shade Powder1420Lang Dental Mfg. Co., Inc.Pó provisório de cura rápida da resina acrílica da coroa e da ponte. Pó acrílico dental para selar a bucha e os fios para a porta de saída do fio.  Também usado para selar a porta na pele.
Cetamina-100 mg / mL Cetamina Para sedação
Revestimento de chuveiro de metalHOS-960MWaterpikMangueira de chuveiro de metal de substituição ultraflexível, extra longa para chuveiros de mão, 96 polegadas, revestimento de metal cromado para chicote de fios
MR Conditional / CT Electrodes Array and Extension SetMRQW32415RhythmLinkSistema de conexão rápida com plugues macho-fêmea e 8 derivações. Plugs usados para conexão de chicote de fios de porta.  Fios e conectores DIN usados para o chicote de fios
Suturas de Monofilamento Azul de PolipropilenoP8665SECUROPRO3-0, FS-2, sutura de corte reverso de 18". Feche qualquer incisões cirúrgicas
Cabo retrator‎ 0487-013West Coast Manufacturing CompanyCarretilha Retrátil Industrial com Cabo de Aço Inoxidável de 48", Suporte de Aço Traseiro, Frente Cromada, Retração de 8 oz., Braçadeira de Mangueira de Plástico. Puxa o excesso de chicote de fios para cima e para longe do animal
Junta de borrachaE-3603 NSF-51Saint GobainTubo de borracha transparente cortado em 1,5 cm de largura. Junta para proteção/manutenção de um selo. 
Eletrodos Pequenos WebbSWEBB1215RhythmLink6mm, eletrodo de disco plano [WEBB*], cloreto de prata, fio, eletrodos subdérmicos
Luvas Cirúrgicas de Látex Estéril10122AmerisourceBergen, Sem Pó, Vestidas para técnica cirúrgica estéril
Marcador estérilDYNJSM01Marcador Estéril Medline, Marque os locais de incisão/eletrodo 
Cortinas cirúrgicas estéreis com adesivo-qualquerCortina cirúrgica estéril com fita adesiva em um lado, Crie um campo estéril fixo 
Máscaras de anestesia veterinária-quaisquercones de plástico com juntas de borracha para selar o coelho ' s rosto. Vários tamanhos. Entrega de anestesia inalada
Esfoliação cirúrgica veterinária BetadineNDC 67618-154-16BetadinePovidona-iodo, 7,5%, limpador de pele com espuma anti-séptica
xilazina-100 mg / mL xilazina, para sedação
deslizante elétrico Tecido Tópico para Luvas de Látex Estéril

Referências

  1. Bosinski, C., Wagner, K., Zhou, X., Liu, L., Auerbach, D. S. Multi-system monitoring for identification of seizures, arrhythmias and apnea in conscious restrained rabbits. J Vis Exp. (169), e62256(2021).
  2. Finlay, M. C., Lambiase, P. D., Ben-Simon, R., Taggart, P. Effect of mental stress on dynamic electrophysiological properties of the endocardium and epicardium in humans. Heart Rhythm. 13 (1), 175-182 (2016).
  3. Shen, M. J., Zipes, D. P. Role of the autonomic nervous system in modulating cardiac arrhythmias. Circulation Res. 114 (6), 1004-1021 (2014).
  4. Xu, L., et al. Juvenile myoclonic epilepsy and sleep. Epilepsy Behav. 80, 326-330 (2018).
  5. Bazil, C. W. Seizure modulation by sleep and sleep state. Brain Res. 1703, 13-17 (2019).
  6. Ryan, J. M., et al. Heart rate and autonomic biomarkers distinguish convulsive epileptic vs. Functional or dissociative seizures. Seizure. 111, 178-186 (2023).
  7. Brunner, M., et al. Mechanisms of cardiac arrhythmias and sudden death in transgenic rabbits with long QT syndrome. J Clin Invest. 118, 2246-2259 (2008).
  8. Edwards, A. G., Louch, W. E. Species-dependent mechanisms of cardiac arrhythmia: A cellular focus. Clin Med Insights Cardiol. 11, 1179546816686061(2017).
  9. Kaha Sciences. , Ad instruments. http://https://www.adinstruments.com/kaha?creative=524197312959&keyword=kaha%20telemetry&matchtype=e&network=g&device=c&gad_source=1&gclid=CjwKCAjw8fu1BhBsEiwAwDrsjJLJeUjMCwMe-kCxFg2QdpP94gaAOd8qS6UBE6iU-IdP2XGxMvbT7hoCDZAQAvD_BwE (2024).
  10. Stellar telemetry. , TSE Systems. https://www.tse-systems.com/products/stellar-implantable-telemetry/ (2024).
  11. Dsi implantable telemetry. , DSI. https://www.datasci.com/products/implantable-telemetry (2024).
  12. Stellar telemetry. , Kruuse televet ii, telemetric ecg & holter. https://kruuse.com/products/consultation/examination/ekg/kruuse-televet-ii-telemetric-ecg-holter (2024).
  13. Mishra, V., Gautier, N. M., Glasscock, E. Simultaneous Video-EEG-ECG monitoring to identify neurocardiac dysfunction in mouse models of epilepsy. J Vis Exp. (131), e57300(2018).
  14. eeg/emg systems. , Pinnacle technology. https://www.pinnaclet.com/eeg-emg-systems.html (2024).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE

Solicitar permissão

Etiquetas

Monitoramento por EEGImplanta o de Eletrodos em CoelhosRegistro Cont nuo de EEGRegistro Cont nuo de ECGEletrodos Subd rmicosDesign de Chicote de FiosVariabilidade da Frequ ncia Card acaDetec o de Convuls es

Artigos relacionados