Reconstituição individualizada da microbiota do leite humano: uma abordagem viável em ambientes do mundo real

Resumo

O artigo descreve um protocolo para reconstituir a microbiota de leite doado pasteurizado usando a microbiota do leite materno em ambientes práticos do mundo real. Demonstra crescimento bacteriano efetivo e modulação do microbioma, apoiando a aplicação viável desse procedimento dentro dos cuidados de rotina de uma maternidade e seu banco de leite humano associado.

Resumo

O leite materno (MOM) é o recurso nutricional mais completo para recém-nascidos. Nos casos em que as mães não conseguem produzir leite suficiente ou não podem amamentar, a alternativa preferida é o leite humano doado pasteurizado (PDM), que é rotineiramente fornecido por bancos de leite humano. O PDM oferece uma gama superior de elementos nutricionais e imunológicos em comparação com qualquer fórmula disponível comercialmente. No entanto, para garantir a biossegurança, o PDM passa por pasteurização, processo que inativa a microbiota comensal e reduz certos compostos bioativos. Este estudo apresenta um protocolo projetado para restaurar a microbiota do PDM usando MOM como fonte microbiana, adaptando a abordagem a um ambiente clínico do mundo real.

O protocolo foi implementado em um ensaio clínico realizado em uma maternidade e seu banco de leite humano associado, com o objetivo de fornecer leite doado personalizado para bebês prematuros cujas mães não conseguem produzir leite suficiente. A metodologia envolve a inoculação do PDM com 10% de MOM, seguida de incubação a 37 °C por 4 h. A análise microbiológica demonstrou crescimento bacteriano bem-sucedido no leite inoculado (IM) após a incubação, com o perfil da microbiota do leite reconstituído (MR) muito semelhante ao do MOM, indicando uma restauração eficaz da microbiota. Esses resultados sugerem que o protocolo de reconstituição é viável para implementação na assistência neonatal, com potencial para melhorar a qualidade nutricional e imunológica do PDM, auxiliando na saúde e no desenvolvimento de recém-nascidos não amamentados.

Introdução

O leite materno é amplamente reconhecido como a melhor fonte de nutrição para recém-nascidos, fornecendo não apenas macro e micronutrientes essenciais, mas também uma complexa variedade de elementos, incluindo vários metabólitos e componentes do sistema imunológico, como anticorpos, citocinas e células¹. Além disso, as propriedades benéficas do leite materno também surgem de uma comunidade de microrganismos comensais. Todos esses elementos do leite materno desempenham um papel crucial no desenvolvimento do recém-nascido^. A comunidade de microrganismos, conhecida como microbiota, é influe....

Protocolo

Este protocolo foi realizado como parte dos procedimentos de um ensaio clínico conduzido por nosso grupo de pesquisa (Registro Brasileiro de Ensaios Clínicos, ReBEC RBR-729kr8x), e recebeu aprovação do Comitê de Ética (processo CAAE nº 41063520.4.0 000.0121) e o consentimento informado foi obtido de todos os participantes antes da randomização e coleta da amostra.

O procedimento de reconstituição da microbiota do leite é feito em três etapas:

1. Obtenção de leite cru materno

NOTA: O procedimento para obtenção de leite pode ser encontrado....

Resultados

Análise do crescimento bacteriano por cultura em placas
Os testes microbiológicos realizados para validar o método de inoculação do PDM com o MOM, conforme proposto por Cacho et ^al.9, demonstraram que, com base na contagem de UFC/mL, não houve diferenças significativas entre as amostras de leite inoculadas antes e após a incubação de 4 h. No entanto, diferenças no número de colônias foram observadas nesses dois momentos, indicando crescimento bacteriano durante a incubação em M.......

Discussão

Apresentamos aqui um protocolo a ser aplicado em maternidades associadas a um banco de leite humano, com o objetivo de proporcionar ao PDM a reconstituição da microbiota láctea de uma mãe específica que, por motivos diversos, não consegue fornecer leite suficiente ao seu recém-nascido. O protocolo é simples e essencialmente baseado em duas etapas. A primeira envolve a aplicação de procedimentos rotineiramente realizados em bancos de leite humano para a coleta adequada e posterior pasteur.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Bomba elétrica para leite materno	Horigen	XN-2219M2	Bomba macia dual plus
Pyrex  garrafas de mídia	Corning	CLS1395100	Recipientes de vidro com tampas de plástico
1000 µ Pipeta L Labmate pro	Corning HTL SA	5666	Pipetador de volume variável
Frasco criogênico	Corning	CLS431417	Frascos de 2 mL sem DNase/RNase
Tubos de centrífuga de 15 mL Corning		CLS431470	Tubos de 15 mL sem DNase/RNase
Banho-maria	EcoSonics	Q3.0/40A
Man– Rogosa– Sharpe (MRS)	Difco	288210	Meio de crescimento de bactérias lácticas
Ágar Sal de Manitol (MSA)	Himedia	MH118	Staphylococcus  Meio de crescimento
Anaeróbico	Jar Permution		Crie um ambiente de baixo oxigênio para o crescimento de bactérias lácticas
Extraa  Kit - DNA e RNA	Loccus	MPTA-PV16-B Y	Kit de extração de DNA
Nanodrop	Promega	E6150	Quantus DNA
GoTaqG2	Promega	M7841	Sistema de amplicação de PCR
Quórmetro	Promega	E5150	Kit de quantificação de DNA / RNA
MiSeq System	Illumina Inc.	M-GL-00006 v4.0	Equipamento de sequenciamento
Kit de reagentes MiSeq v2 (300 ciclos)	Illumina Inc.	MS-102-2002	Kits e reagentes de sequenciamento
Nome do software
Trimmomatic	http://www.usadellab.org/cms/index.php?page=trimmomatic		Ferramenta de corte de leitura para dados Illumina NGS
QIIME 2	https://docs.qiime2.org/2024.10/		Pacote de análise de microbioma
Nome do primer	Sequência do primer
16S_357F	TCGTCGGCAGCGTCAGA TGTGTATAAGAGACAGC CTACGGGNGGCWGCAG
16S_805R	GTCTCGTGGGCTCGGAG ATGTGTATAAGAGACAGG ACTACHVGGGTATCTAATC