Este protocolo fornece uma metodologia abrangente para a análise quantitativa de placas ateroscleróticas para facilitar pesquisas mais aprofundadas sobre os mecanismos e a progressão da aterosclerose.
Artigo de método
* These authors contributed equally
Este protocolo fornece uma metodologia abrangente para a análise quantitativa de placas ateroscleróticas para facilitar pesquisas mais aprofundadas sobre os mecanismos e a progressão da aterosclerose.
A aterosclerose, uma das principais causas de doenças cardiovasculares, requer um exame detalhado do desenvolvimento e progressão da lesão. Este estudo apresenta um protocolo abrangente para o isolamento e análise histológica do arco aórtico e lesões radiculares em um modelo de camundongo aterosclerótico amplamente utilizado, camundongos knock-out para receptor de lipoproteína de baixa densidade (Ldlr-/-). O arco aórtico e a raiz são locais-chave para lesões ateroscleróticas, e seu exame é fundamental para avaliar o início, progressão ou regressão da aterosclerose, prever riscos de eventos cardiovasculares e identificar potenciais alvos terapêuticos. Este protocolo descreve métodos para quantificar a carga aterosclerótica no arco e na raiz da aorta, incluindo isolamento de tecido, fixação, coloração com óleo vermelho O, secção da raiz da aorta, coloração de hematoxilina e eosina (HE), coloração de Verhoeff-Van Gieson (VVG) e análise de imagem. A coloração Oil Red O mede a área da placa no arco aórtico, avaliando a gravidade da aterosclerose, enquanto a coloração HE da raiz da aorta revela componentes da placa, como o núcleo lipídico e a capa fibrosa, facilitando a avaliação da estabilidade da placa e do risco de ruptura. A coloração VVG pode corar as fibras de colágeno nos tecidos, fornecendo mais informações sobre a composição da placa e informações relacionadas. Essa análise completa oferece informações valiosas sobre os mecanismos de desenvolvimento da lesão e pode orientar a criação de novas estratégias terapêuticas para prevenir e tratar a aterosclerose.
As doenças cardiovasculares, particularmente a aterosclerose, surgiram como um fardo significativo para a saúde e uma das principais causas de morte em todo o mundo 1,2. A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica progressiva caracterizada pelo acúmulo gradual de lipídios e pela formação de placas na parede arterial, levando ao estreitamento da luz arterial e, potencialmente, à ruptura de placas, desencadeando eventos cardiovasculares agudos, como infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral 1,2,3....
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Todos os protocolos animais usados neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Revisão de Ética para Experimentação Animal da Universidade de Esportes de Xangai.
1. Preparação de reagentes e ferramentas de dissecação
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Os resultados representativos demonstram a aplicação da técnica de isolamento e análise para lesões do arco aórtico e da raiz em um modelo de camundongo aterosclerótico. Esses resultados fornecem evidências claras da capacidade da técnica de identificar e caracterizar lesões ateroscleróticas. Por exemplo, imagens histológicas com colorações específicas (por exemplo, Oil Red O) destacam o acúmulo de lipídios, enquanto a coloração de hematoxilina e eosina (H&E) revela a morfologia geral das lesões ateroscleróticas, inc.......
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Aqui, fornecemos informações detalhadas sobre os métodos de amostragem aórtica em camundongos knockout para Ldlr e análise quantitativa de placas.
A precisão do procedimento de dissecção é o maior desafio técnico para a remoção da aorta in vivo no modelo de aterosclerose de camundongos. Com base em nossa experiência, os pontos-chave são os seguintes: (1) use PBS para lavar todo o sangue na artéria para aumentar a comparação entre os ramos do arco aórt.......
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Nada a declarar.
Este trabalho foi apoiado pela Base de Pesquisa Científica de Xangai de Exercício e Saúde Metabólica, o programa de pesquisa de exercício e saúde pública (0831) na Universidade de Esporte de Xangai, programa de financiamento de treinamento de jovens professores de ensino superior de Xangai (A2-0213-22-0058-5) e Comitê Municipal de Ciência e Tecnologia de Xangai de Xangai plano de líderes acadêmicos de destaque (21XD1403200) para Longhua Liu.
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Lâminas de microscópio de adesão (25× 75mm) | CITOTEST | Cat# 80312-3161 | |
| de incorporação | CITOTEST | Cat# 80106-1100-16 | |
| Solução de coloração de Eosina | Beyotime | Cat# C0109 | |
| Etanol | Sinopharm Reagente Químico Co. | Cat# 10009218 Solução | |
| de Coloração de Hematoxilina | Beyotime | Cat# C0107 | |
| Lâminas descartáveis de baixo perfil | Leica | Cat# 14035838925 | |
| Vidro de cobertura do microscópio (24&vezes; 50mm) | CITOTEST | Cat# 10212450C | |
| Meio de montagem de bálsamo neutro | Sango Biotech | Cat# E675007-0100 | |
| Óleo vermelho o pó | Sigma-Aldrich | Cat# 1320-06-5 | |
| parafina com ceresina | Sinopharm Chemical Reagent Co. | Cat# 69019461 | |
| Paraformaldeído | Servicebio | Cat# G1101 | |
| Tamponada com Fosfato (PBS, Pó) | Servicebio | Cat# G0002-2L | |
| Solução de coloração Ponceau S | EveryLab | Cat# FM024 | |
| Victoria Blue' B | Aladdin | Cat # 2580-56-5 | |
| Xylene | Sigma-Aldrich | Cat # 104-81-4 |
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