Um método simples de tubo de centrifugação dupla para obter plasma rico em plaquetas do sangue equino

Resumo

O plasma rico em plaquetas (PRP) é usado no tratamento de distúrbios musculoesqueléticos equinos. Diferentes técnicas produzem PRP com concentrações variadas de plaquetas e leucócitos. Este artigo descreve um método para obter PRP a partir de sangue de cavalo.

Resumo

O plasma rico em plaquetas (PRP) é amplamente utilizado como tratamento de rotina para condições musculoesqueléticas crônicas em equinos, como osteoartrite, tendinopatias e desmopatias. Essa eficácia decorre da alta concentração de fatores de crescimento e citocinas anti-inflamatórias que são liberadas após a ativação desse agente ortobiológico, seja ativado endogenamente ou exogenamente. Apesar de sua crescente popularidade, há uma notável ausência de vídeos instrutivos que demonstrem as técnicas de obtenção de PRP em cavalos.

Este estudo examina um método de tubo de centrifugação duplo para obtenção de PRP em equinos. O sangue total de seis equinos foi coletado em tubos de citrato de sódio e centrifugado duas vezes a 120 × g por 5 min e 240 × g por 5 min. A concentração média de plaquetas para PRP foi de 360,95 ± 56,31 plaquetas (PLT) × 10³/μL, enquanto a concentração média de leucócitos foi de 3,05 ± 1,53 células × 10³/μL. A contagem de plaquetas no PRP foi 2,41 vezes maior do que no sangue total, enquanto a concentração de leucócitos no PRP foi 0,44 vezes menor. A eficiência de coleta para PLT em PRP foi de 17%, enquanto a eficiência de coleta de leucócitos em PRP foi de 3,1%. As concentrações médias do fator de crescimento transformador beta 1 e do fator de crescimento derivado de plaquetas BB no PRP foram 2601,82 (intervalo de confiança (IC) de 95%: 2358,88-2844,76) pg/mL e 1208,05 (IC 95%: 1051,09-1365,02) pg/mL, respectivamente. Esses resultados indicam que o PRP pode ser obtido de forma eficiente e reprodutível por meio de um método simples e econômico, adequado para uso por praticantes de equinos.

Introdução

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto ortobiológico comumente usado para tratar condições musculoesqueléticas crônicas equinas, como tendinopatias, desmopatias, osteoartrite e laminite ^1,2,3. Também é eficaz no tratamento de feridas nos membros e doenças da superfície ocular ^4,5. A justificativa para seu uso baseia-se nas altas concentrações de fatores de crescimento (FGs) liberados principalmente pelas plaquetas⁶. Os leucócitos também contribuem libera....

Protocolo

Este estudo foi conduzido de acordo com os protocolos internos para a preparação e uso de PRP em equinos no Hospital Veterinário Universitário da Universidad de Caldas, Manizales, Colômbia. Este estudo não necessitou de aprovação do Comitê Interno de Cuidados com Animais, pois os dados foram obtidos de cavalos mancos tratados clinicamente em nossa instituição. Dados de seis cavalos crioulos colombianos, três éguas e três castrados, com idade média de 7,4 (± 2,6) anos, foram usados para desenvolver este protocolo. Os proprietários dos cavalos foram informados sobre a natureza do estudo e assinaram um termo de consentimento livre e esclarecido. Todos os cavalos incluído....

Resultados

A contagem média de plaquetas (plaquetas × 10³/μL) foi significativamente maior no PRP do que no sangue total (p < 0,001). Em contraste, a concentração média de leucócitos (leucócitos × 10³/μL) no PRP foi significativamente menor do que no sangue total (p < 0,001) (Tabela 1). Especificamente, a contagem de plaquetas no PRP foi 2,41 vezes maior do que no sangue total, enquanto a concentração de leucócitos no PRP foi 0,44 vezes menor. A eficiência de coleta de PLT no PRP foi de .......

Discussão

O uso do PRP na medicina humana e veterinária para o tratamento de distúrbios musculoesqueléticos crônicos está aumentando 1,8,26,27. No entanto, uma das principais críticas às aplicações do PRP em ambientes experimentais e clínicos é a falta de dados básicos sobre as técnicas e protocolos utilizados para o preparo desses hemocomponentes²⁸

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubos de coleta de sangue venoso simples de 10 mL	BD Vacutainer, Franklin Lakes, NJ, EUA	Referência 366430	Este é apenas um exemplo, tubos de outras marcas podem ser usados.
Tubos de citrato de sódio de 4,5 mL (105 M/3,2%)	BD Vacutainer, Franklin Lakes, NJ, EUA	107451	Este é apenas um exemplo, tubos de outras marcas podem ser usados.
Centrífuga de bancada	Rotofix 32A, Hettich GmbH, Tuttlingen, Alemanha		Outras centrífugas de bancada podem ser usadas.
Agulha borboleta (21 G &vezes; 0,75 pol.) com 12 pol. tubo e suporte pré-anexado	Conjunto de Coleta de Sangue Safety-Lok, BD Vacutainer, Franklin Lakes, NJ, EUA	Referência 367296	Este é apenas um exemplo, agulhas borboleta de outras marcas podem ser usadas.
Solução de espuma de clorexidina a 2,3-4%			A marca ou os nomes comerciais desses produtos podem variar de país para país.
Capela-circuito de fluxo laminar Classe II	Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA		Outras capas de fluxo laminar classe II podem ser usadas
Leitor ELISA	Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA, EUA
Álcool etílico a 95%			A marca ou os nomes comerciais desses produtos podem variar de país para país.
Humano PDGF-BB DuoSet ELISA	R& D Systems, Inc, McKinley Place, MN, EUA	DY220
DouSet ELISA de TGF-beta 1 humano	R& D Systems, Inc, McKinley Place, MN, EUA	DY240
Solução de espuma de iodopovidona a 4-10%			A marca ou os nomes comerciais desses produtos podem variar de país para país.
Software SPSS 25.0	IBM Corp, SPSS, NY, EUA
Seringas luer estéreis de vários volumes	Seringa Discardit, BD Vacutainer, Franklin Lakes, NJ, EUA		Este é apenas um exemplo, seringas de outras marcas podem ser usadas.
Agulha espinhal estéril (18 G &vezes; 90 mm)	Agulha de Espinélio BD Quincke, Franklin Lakes, NJ, EUA		Este é apenas um exemplo, agulhas espinhais de outras marcas podem ser usadas.