Artigo de método

Efeitos neuroprotetores do análogo do octadecaneuropeptídeo administrado por via intranasal em um modelo de camundongo da doença de Parkinson induzida por MPTP

DOI:

10.3791/68122

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29 de agosto de 2025

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1Faculty of Sciences of Tunis, LR18ES03, Laboratory of Neurophysiology Cellular Physiopathology and Biomolecule Valorization, University Tunis El Manar, 2Inserm U1239 NorDiC, Laboratory of Neuroendocrine, Endocrine and Germinal Differentiation and Communication, PRIMACEN, Univ Rouen Normandie, 3Confocal Microscopy Unit, Faculty of Medicine of Tunis, University Tunis El Manar

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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A administração intranasal permite a entrega direta de moléculas bioativas ao cérebro, fornecendo uma alternativa não invasiva ao método intracerebroventricular. Este estudo demonstra que a administração intranasal de ciclo(1-8)OP, um análogo do ODN, exerce fortes efeitos neuroprotetores contra danos oxidativos induzidos por MPTP e apoptose no estriado em um modelo de camundongo com doença de Parkinson, destacando o potencial terapêutico.

Resumo

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A doença de Parkinson (DP) é um distúrbio neurodegenerativo para o qual as terapias existentes são principalmente paliativas e carecem de eficácia curativa. O octadecaneuropeptídeo (ODN) é um peptídeo produzido exclusivamente por astrócitos que protege os neurônios contra danos celulares oxidativos e apoptose em modelos in vitro e in vivo de DP. No entanto, a ODN não pode atravessar a barreira hematoencefálica (BHE) e requer injeção intracerebroventricular para atingir o cérebro, apresentando um desafio significativo para a aplicação terapêutica. Este estudo investiga a eficácia neuroprotetora do ciclo(1-8)OP, um análogo do ODN, administrado por via intranasal (IN) para contornar o BBB em um modelo in vivo de DP. Camundongos C57BL/6J machos foram usados para os experimentos e divididos em quatro grupos: sham, MPTP- (20 mg/kg de peso corporal, intraperitoneal), ciclo(1-8)OP- (10 ng/10 μL, IN) e animais tratados com MPTP + ciclo(1-8)OP. No dia 0 (D0), os animais receberam três injeções intraperitoneais de 100 μL de solução de MPTP em intervalos de 2 horas (camundongos tratados com MPTP e MPTP + ciclo(1-8)OP) ou solução salina (camundongos tratados com sham e ciclo(1-8)OP). Uma hora após a injeção final, foram administrados 10 μL de instilação de IN de ciclo(1-8)OP (camundongos tratados com ciclo(1-8)OP e MPTP + ciclo(1-8)OP) ou solução salina IN (camundongos tratados com placebo e MPTP). No D7, foi realizado um teste de cilindro para avaliar a função motora. Posteriormente, os animais foram sacrificados, e o estriado foi removido e analisado por RT-qPCR para avaliar a expressão do gene da caspase-3. Amostras de tecido também foram usadas para medir atividades de enzimas antioxidantes, espécies reativas de oxigênio (ROS), malondialdeído (MDA) e abundância de proteínas carboniladas. Uma dose única de IN de 10 ng ciclo(1-8)OP, administrada 1 h após a dose final de MPTP, preveniu a neurotoxicidade no estriado 7 dias após o tratamento. A neuroproteção mediada por ciclo(1-8)OP foi associada a uma forte inibição da expressão de caspase-3 induzida por MPTP no estriado. Além disso, o ciclo(1-8)OP restaurou as atividades das enzimas antioxidantes, evitando o acúmulo de ROS, produtos de peroxidação lipídica e carbonilação de proteínas no estriado.

Introdução

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A doença de Parkinson (DP) é uma doença neurodegenerativa marcada pela perda progressiva de neurônios dopaminérgicos na substância negra, que inerva o estriado. Essa perda resulta em sintomas neurológicos significativos, incluindo déficits motores graves, como rigidez muscular, acinesia e bradicinesia1. A prevalência de doenças neurodegenerativas como a DP continua a aumentar, principalmente devido ao envelhecimento da população, representando um desafio substancial para a saúde pública2. Os tratamentos atuais para DP dependem predominantemente de análogos dopaminérgicos e estimulação intracerebral de alta frequência 3,4. No entanto, essas terapias carecem de efeitos neuroprotetores e não conseguem interromper a progressão da doença, ressaltando a necessidade urgente de estratégias inovadoras para prevenir a perda neuronal, promover a regeneração e mitigar o avanço da doença5.

O octadecaneuropeptídeo (ODN) é um peptídeo derivado do processamento proteolítico do inibidor de ligação ao diazepam precursor de 86 aminoácidos (DBI)6, expresso principalmente por células astrogliais no sistema nervoso central de mamíferos. A conservação evolutiva da estrutura primária do ODN sugere seus papéis biológicos significativos. Foi demonstrado que a ODN regula funções-chave, como ingestão de alimentos, sono, agressão e comportamentos relacionados à ansiedade7. Além de seu papel regulador, uma extensa pesquisa demonstrou as propriedades neuroprotetoras do ODN em vários distúrbios neurológicos associados à degeneração neuronal. Por exemplo, o ODN protege os neurônios dopaminérgicos em um modelo de DP8 e reduz o tamanho do infarto enquanto melhora a recuperação funcional após o AVC em roedores9. Uma das principais características da ODN é sua capacidade de neutralizar muitos processos deletérios ativados durante o dano cerebral por meio de suas atividades antiapoptóticas, antiinflamatórias, antioxidantes e imunomoduladoras 10,11,12. Além disso, o ODN pode atuar além da fase aguda do AVC, promovendo a neurogênese e a plasticidade neuronal9. Para possíveis aplicações clínicas de peptídeos ou seus análogos como agentes terapêuticos, a escolha de uma via ideal de administração é crucial para evitar a rápida degradação na corrente sanguínea e minimizar o efeito de primeira passagem. Entre várias estratégias de entrega, a administração intranasal (IN) surgiu como uma alternativa não invasiva promissora, permitindo a entrega direta de certas moléculas bioativas ao cérebro enquanto contorna a barreira hematoencefálica (BHE)13,14,15. Essa rota elimina a necessidade de injeções estereotáxicas invasivas e melhora a biodistribuição cerebral em comparação com os órgãos periféricos. Por exemplo, o polipeptídeo ativador da adenilato ciclase hipofisária (PACAP) demonstrou maior eficácia na captação cerebral e neuroproteção quando administrado por instilação IN em comparação com injeção intravenosa, reduzindo significativamente o volume do infarto e melhorando a recuperação funcional em modelos de AVC9.

Embora a administração de IN seja uma técnica minimamente invasiva e eficiente para fornecer agentes terapêuticos diretamente ao cérebro, ignorando a BHE, sua eficácia permanece dependente de vários parâmetros práticos, incluindo dose e volume total administrado. Em roedores, o volume recomendado varia tipicamente de 10 a 25 μL por narina para evitar aspiração ou transbordamento para o trato gastrointestinal16,17. A eficiência da captação nasal também é afetada pelo tamanho do animal, área de superfície da cavidade nasal, depuração mucociliar e propriedades compostas, como lipofilicidade e peso molecular 18,19. Essas restrições devem ser consideradas durante o projeto do protocolo para garantir a reprodutibilidade e a relevância translacional em modelos pré-clínicos.

Um estudo in vivo mostrou que a injeção intracerebroventricular (ICV) de baixas doses de ODN conferiu efeitos neuroprotetores significativos, particularmente ao prevenir a degeneração de neurônios dopaminérgicos em camundongos tratados com MPTP8. O presente estudo tem como objetivo avaliar a viabilidade e eficácia da administração IN do análogo ODN, ciclo(1-8)OP, como uma alternativa não invasiva à injeção de ICV para fornecer análogo de peptídeo neuroprotetor ao cérebro, especificamente para determinar se essa via pode prevenir a perda neuronal dopaminérgica e melhorar os resultados motores em camundongos tratados com MPTP, um modelo bem estabelecido de DP.

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Protocolo

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Todos os experimentos seguiram as diretrizes da American Veterinary Medical Association e foram aprovados pelo Comitê de Ética Médica do Instituto Pasteur (número de aprovação: FST/LNFP/Pro 160220). Camundongos machos C57BL/6J com dez semanas de idade foram obtidos no Instituto Pasteur de Túnis. Os camundongos foram alojados em três por gaiola em uma sala com temperatura controlada (21 ° C ± 1 ° C) com um ciclo claro/escuro de 12 horas e forneceram livre acesso a comida e água por 1 semana de aclimatação. Os detalhes dos reagentes e equipamentos usados estão listados na Tabela de Materiais.

1. Procedimento de tratamento

  1. Divida os animais em quatro grupos: sham (n = 9), MPTP- (n = 9), cyclo(1-8)OP- (n = 9) e MPTP + ciclo(1-8)OP-tratado (n = 9).
  2. Administre três injeções intraperitoneais (IP) de MPTP (20 mg / kg de p.c.) em 100 μL de NaCl a 0,9% em intervalos de 2 h no primeiro dia de tratamento (D0). 1 h após a injeção final de MPTP, administrar 10 μL por via intranasal (IN) de ciclo(1-8)OP (10 ng) ou solução salina.
  3. Injetar animais de controle com solução salina em vez de MPTP, com ou sem ciclo(1-8)OP (Figura 1).
  4. No sétimo dia (D7), submeta os camundongos ao teste do cilindro. Em seguida, anestesiar profundamente os camundongos usando uma injeção IP de pentobarbital e sacrificá-los (seguindo protocolos aprovados institucionalmente) para coletar cérebros para PCR em tempo real e análises bioquímicas20 (Figura 2).

2. Procedimento de injeção

  1. Injeção intraperitoneal
    1. Posicione o mouse com cuidado e imobilize sua cabeça durante o procedimento.
    2. Oriente o mouse de cabeça para baixo para permitir que os órgãos se desloquem naturalmente com a gravidade, minimizando qualquer contato com a agulha.
    3. Insira a agulha em um ângulo de 45 graus na parte inferior do abdômen.
    4. Administre três injeções de 100 μL no mesmo lado, com intervalo de 2 horas entre cada injeção, todas realizadas no mesmo dia.
    5. Injete solução salina a 0,9% para os grupos simulado e ciclo(1-8)OP, ou solução de MPTP (20 mg/kg de p.c.) para os grupos MPTP e MPTP + ciclo(1-8)OP.
  2. Administração intranasal
    NOTA: A dose selecionada (10 ng) foi baseada em um estudo anterior que demonstrou a eficácia neuroprotetora da administração de ODN8 por ICV. O volume total de 10 μL e o tamanho da gota (5 μL por narina) foram escolhidos de acordo com os protocolos de administração de IN estabelecidos18,21. Esse volume está bem abaixo da capacidade média da cavidade nasal do camundongo (0,032 cm3), minimizando o risco de obstrução ou asfixia das narinas e garantindo uma absorção nasal segura e eficiente22.
    1. Segure firmemente o mouse pela nuca, garantindo que o nariz esteja orientado para cima para facilitar a dosagem precisa e minimizar o movimento da cabeça.
    2. Inverta o animal de forma que seu lado ventral fique voltado para o teto, com o pescoço paralelo ao chão. Certifique-se de que a cabeça do mouse permaneça imobilizada com segurança, evitando movimentos verticais ou horizontais.
    3. Alinhe a ponta da pipeta com a narina do mouse e pressione lentamente o êmbolo para formar uma pequena gota.
    4. Coloque uma gota de 5 μL (metade do volume) perto de cada uma das narinas do camundongo.
    5. Deixe o camundongo inalar naturalmente a solução.
    6. Repita essas etapas para garantir uma dosagem consistente, com 10 μL de ciclo(1-8)OP (10 ng) administrados para os grupos MPTP + ciclo(1-8)OP e ciclo(1-8)OP.
    7. Observe cuidadosamente a boca do mouse durante todo o procedimento. A presença de líquido na boca pode indicar absorção nasal incompleta. Isso pode resultar de tamanho inadequado de gotículas, administração rápida ou inalação insuficiente, permitindo que a solução se acumule na nasofaringe e, posteriormente, saia pela boca.
    8. Minimize esse risco reduzindo o tamanho das gotículas, se necessário, e garantindo tempo adequado para inalação antes de administrar volumes adicionais.
    9. Evite administrar imediatamente uma dose adicional para evitar volume excessivo.
    10. Documente quaisquer doses extraviadas e observe cuidadosamente qualquer líquido expelido.
    11. Certifique-se de que cada camundongo inala totalmente as duas gotículas (uma por narina) antes de prosseguir com a administração.
    12. Confirme o direcionamento preciso do bulbo olfatório realizando uma injeção IN de solução de azul de metileno.
    13. Avalie a precisão inspecionando visualmente a deposição e a propagação da coloração azul.

3. Teste do cilindro

  1. Use um cilindro transparente, de 20 cm de altura e 15 cm de diâmetro, colocado no centro da mesa.
  2. Posicione três painéis de papelão preto ao redor do cilindro (4-8 cm de distância) para minimizar os efeitos de iluminação do ambiente. Deixe um lado do cilindro aberto para gravação de vídeo.
  3. Defina a câmera a 40-60 cm do cilindro para capturar sua visão completa.
  4. Coloque o mouse no cilindro e comece a gravar imediatamente por 5 min.
  5. Depois que cada mouse concluir o teste, limpe o cilindro com água, borrife etanol 70% para remover odores e seque-o antes de testar o próximo mouse.
  6. Reproduza a gravação na metade da velocidade para permitir uma observação detalhada.
  7. Conte cada instância em que o mouse levanta as patas contra a parede do cilindro para avaliar o comportamento exploratório23.

4. Preparação de extratos de tecido cerebral para experimentos bioquímicos

  1. Anestesiar os animais com pentobarbital (40 mg/kg, IP) e depois decapitá-los (seguindo protocolos aprovados institucionalmente).
  2. Dissecar o estriado e homogeneizar em 2 mL de TBS por grama de tecido usando tampão de lise (1% Triton X-100, 50 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA).
  3. A centrífuga homogeneiza a 14.000 × g por 15 min a 4 °C.
  4. Medir a concentração de proteínas utilizando o kit de determinação colorimétrica Biureto e armazenar alíquotas a −20 °C para análise posterior.

5. Medição da formação de ERO intracelular

  1. Incubar o extrato de tecido cerebral com 10 μM de DCFH2-DA a 37 °C por 30 min no escuro.
  2. Remover o sobrenadante e lavar duas vezes com PBS (0,1 M, pH 7,4, 37 °C).
  3. Medir a fluorescência utilizando um leitor de microplacas com um comprimento de onda de excitação de 485 nm e um comprimento de onda de emissão de 538 nm.

6. Medição de marcadores de estresse oxidativo

  1. Malondialdeído
    1. Misture 20 μL de amostra (~ 50 μg de proteína) com 125 μL de 20% de TCA e 50 μL de 0,67% de TBA.
    2. Incubar a 95 °C durante 30 min e depois arrefecer rapidamente a 4 °C.
    3. Adicione 800 μL de butanol, vórtice e centrifugue a 3000 × g por 10 min a 4 °C.
    4. Medir a absorvância a 532 nm e calcular os níveis de MDA utilizando o coeficiente de extinção (1,65 × 105 M-1 cm-1).
  2. Medição de carbonila de proteína
    1. Misture 200 μL de DNPH com 50 μL de amostra de proteína e incube por 1 h.
    2. Adicione 250 μL de 20% de TCA e deixe esfriar por 10 min no gelo.
    3. Centrifugar a 3000 × g durante 10 min a 4 °C e lavar o sedimento com 10% de TCA e, em seguida, com etanol:acetato de etilo (v/v).
    4. Ressuspender o sedimento em 250 μL de cloridrato de guanidina 6 M e medir a absorvância a 370 nm.
    5. Calcule os níveis de PCO usando o coeficiente de extinção (22.000 M-1 cm-1)24.

7. Medição das atividades enzimáticas antioxidantes

  1. Ensaio de superóxido dismutase
    1. Incubar a amostra (~ 50 μg) com catalase bovina (0,4 U / L), DL-epinefrina (5 mg / mL) e tampão Na2CO3 / NaHCO3 (62,5 mM, pH 10,2).
    2. Medir a oxidação da epinefrina a 480 nm utilizando um espectrofotómetro durante 300 s a intervalos de 60 s25.
  2. Ensaio de catalase
    1. Misturar a amostra com 90 mM H2O2 em PBS.
    2. Monitore a diminuição da absorbância de H2O2 a 240 nm por 3 min em intervalos de 30 s.
    3. Calcular a atividade do CAT utilizando o coeficiente de extinção (40 M-1 cm-1).

8. Análise de PCR em tempo real

  1. Extrair o RNA total do estriado do camundongo usando o método ácido de tiocianato-fenol-clorofórmio de guanidínio.
  2. Trate o RNA com DNase I para remover o DNA genômico e medir a concentração de RNA a 260 nm.
  3. Realize RT-PCR quantitativo usando 1 μg de RNA total com um kit de PCR Q-RT de uma etapa.
  4. Amplificar o cDNA com SYBR Green PCR Master Mix e primers (Tabela 1).
  5. Calcule os níveis relativos de cDNA usando o método 2−ΔΔCt com GAPDH como controle interno26.

9. Análise estatística

  1. Realize análises estatísticas usando o software GraphPad.
  2. Use o teste t de Student para comparações únicas. Para comparações múltiplas, use ANOVA de uma ou duas vias seguida do teste post hoc de Bonferroni, conforme apropriado. Em todos os casos, considere um valor de P de 0,05 ou menos como estatisticamente significativo.

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Resultados

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Após a administração de MPTP, os camundongos apresentaram sintomas parkinsonianos característicos, incluindo cauda de Straub elevada e rígida, piloereção, imobilidade e anormalidades posturais, como curvatura da coluna vertebral, confirmando o estabelecimento bem-sucedido do modelo MPTP (Figura 3). A verificação da entrega de IN usando azul de metileno, com camundongos sacrificados 10 minutos após a injeção, mostrou distribuição eficaz do corante nas regiões do bulbo olfatór...

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Discussão

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Estudos anteriores demonstraram que a administração de ODN por ICV neutralizou a degeneração induzida por MPTP de neurônios dopaminérgicos nigroestriatais, dano oxidativo e neuroinflamação8. A presente investigação avaliou a eficácia da entrega IN do análogo ODN, ciclo(1-8)OP, para prevenir deficiências motoras induzidas por MPTP, dano oxidativo e neurotoxicidade em um modelo de DP in vivo usando camundongos C57BL/6J.

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Divulgações

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Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes conhecidos ou relacionamentos pessoais que possam ter influenciado o trabalho relatado neste artigo.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este trabalho foi apoiado pelo Laboratório de Neurofisiologia, Fisiopatologia Celular e Valorização de Biomoléculas, LR18ES03, NorDiC Inserm U1239, o programa de intercâmbio França-Tunísia CMCU-Campus France/PHC Utique 24G0807/50283RD (para Olfa Masmoudi-Kouki e Jérôme Leprince), Programa Horizon-Marie Skłodowska-Curie Actions (MSCA) PsyCoMed Grant agreement ID: 101086247, e o programa de pesquisa e inovação Horizonte 2020 da União Europeia sob o acordo de subvenção Marie Skłodowska Curie No 101034329.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
2', 7'-Diclorofluorescina DCFH2-DASigma Aldrich064M4008V
Espectrofotômetro Bio-RadLaboratórios Bio-Rad, Filadélfia, PA, EUA
Butanol
Câmera
Catalase de fígado bovinoCiência da vida SIGMASLBZ7596
ciclo(1-8)OPINSERM U1239 NorDiC, Rouen
Ensaio do cilindro (copo graduado)
DNPH 
EDTA maisThermo Scientic 11836714
Etanol 70%
Solução de etanol-etilacetato
Software GraphPad La Jolla, Califórnia, EUA
Cloridrato de guanidinaGeneON5CCAE310
H2O2 PharmaghrebeAEQ10101-D
Seringa de insulina 2ml
L-epinefrina MP Biomédicos151065
Azul de metilenoProdutos Químicos Termocientíficos10455081
Micropipeta 
Leitor de microplacas Synergy LX-AgilentSinergia LX-Agilent
MPTPMedChemExpressHY-15608
MPTP
Tampão Na2CO3/NaHCO3 
NaCl 0,9
kit de PCR Q-RT de uma etapa Biolabs da Nova Inglaterra
Pentobarbital Sigma Aldrich
Espectrofotômetro Synergy LX Nanodrop 2000Biotek Agilent
Ácido tiobarbitúrico (TBA, 0,67%) LOBA CHEMIE PVT. LTD626500025
Dicas
Ácido tricloroacético (TCA, 20%)Sisco Research laboratories SRL6740608
Tri-Reagente Sigma AldrichMFCD00213058
Tris-HClThermo Scientic J22638. K2
Tritão X-100Thermo Scientic A16046.AE

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mat Taib, C. N., Mustapha, M. M. MPTP-induced mouse model of Parkinson's disease: A promising direction of therapeutic strategies. Bosn J Basic Med Sci. 21 (4), 422-433 (2021).
  2. Dionísio, P. A., Amaral, J. D., Rodrigues, C. M. P. Oxidative stress and regulated cell death in Parkinson's disease. Ageing Res Rev. 67, 101263(2021).
  3. Charvin, D., Medori, R., Hauser, R. A., Rascol, O. Therapeutic strategies for Parkinson disease: Beyond dopaminergic drugs. Nat Rev Drug Discov. 17 (11), 804-822 (2018).
  4. Stoker, T. B., Barker, R. A. Recent developments in the treatment of Parkinson's disease. F1000Res. 9, (2020).
  5. Airavaara, M., Voutilainen, M. H., Wang, Y., Hoffer, B. J. Neurorestoration. Parkinsonism Relat Disord. 18 Suppl 1 (01), S143-S146 (2012).
  6. Guidotti, A., et al. Isolation, characterization, and purification to homogeneity of an endogenous polypeptide with agonistic action on benzodiazepine receptors. Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (11), 3531-3535 (1983).
  7. Tonon, M. C., et al. Endozepines and their receptors: Structure, functions and pathophysiological significance. Pharmacol Ther. 208, 107386(2020).
  8. Bahdoudi, S., et al. Neuroprotective effects of the gliopeptide ODN in an in vivo model of Parkinson's disease. Cell Mol Life Sci. 75 (11), 2075-2091 (2018).
  9. Cherait, A., Maucotel, J., Lefranc, B., Leprince, J., Vaudry, D. Intranasal administration of PACAP is an efficient delivery route to reduce infarct volume and promote functional recovery after transient and permanent middle cerebral artery occlusion. Front Endocrinol. 11, 585082(2021).
  10. Bourzam, A., et al. promotes cell survival against 6-OHDA-induced oxidative stress and apoptosis by modulating the expression of miR-34b, miR-29a, and miR-21 in cultured astrocytes. Cells. 13 (14), 1188(2024).
  11. Namsi, A., et al. Octadecaneuropeptide (ODN) induces N2a cells differentiation through a PKA/PLC/PKC/MEK/ERK-dependent pathway: Incidence on peroxisome, mitochondria, and lipid profiles. Molecules. 24 (18), 3310(2019).
  12. Masmoudi-Kouki, O., et al. Cytoprotective and neurotrophic effects of octadecaneuropeptide (ODN) in in vitro and in vivo models of neurodegenerative diseases. Front Endocrinol. 11, 566026(2020).
  13. Scafidi, J., et al. Intranasal epidermal growth factor treatment rescues neonatal brain injury. Nature. 506 (7487), 230-234 (2014).
  14. Lopes, C., et al. IGF-1 intranasal administration rescues Huntington's disease phenotypes in YAC128 mice. Mol Neurobiol. 49 (3), 1126-1142 (2014).
  15. Nonaka, N., et al. Intranasal administration of PACAP: Uptake by brain and brain region targeting with cyclodextrins. Peptides. 36 (2), 168-175 (2012).
  16. Illum, L. Transport of drugs from the nasal cavity to the central nervous system. Eur J Pharm Sci. 11 (1), 1-18 (2000).
  17. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  18. Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery to the central nervous system: Mechanisms and experimental considerations. J Pharm Sci. 99 (4), 1654-1673 (2010).
  19. Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Adv Drug Deliv Rev. 64 (7), 614-628 (2012).
  20. Spijker, S., Faliagkas, L., Rao-Ruiz, P. Dissection of rodent brain regions: Guided free-hand slicing and dissection of frozen tissue. Neuroproteomics. 146, 7-19 (2019).
  21. Eyme, K. M., Carvalho, L., Badr, C. E. Intranasal delivery of experimental compounds in orthotopic brain tumor mouse models. STAR Protoc. 2 (1), 100290(2021).
  22. Khan, A. R., Liu, M., Khan, M. W., Zhai, G. Progress in brain targeting drug delivery system by nasal route. J Controlled Release. 268, 364-389 (2017).
  23. Jiang, P. E., et al. Behavioral assessments of spontaneous locomotion in a murine MPTP-induced Parkinson's disease model. J Vis Exp. (143), e58653(2019).
  24. Colombo, G., et al. A step-by-step protocol for assaying protein carbonylation in biological samples. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 1019, 178-190 (2016).
  25. Misra, H. P., Fridovich, I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase. J Biol Chem. 247 (10), 3170-3175 (1972).
  26. Schmittgen, T. D., Livak, K. J. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method. Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).
  27. Jackson-Lewis, V., Przedborski, S. Protocol for the MPTP mouse model of Parkinson's disease. Nat Protoc. 2 (1), 141-151 (2007).
  28. Dufes, C., Olivier, J. C., Gaillard, F., Gaillard, A., Couet, W., Muller, J. M. Brain delivery of vasoactive intestinal peptide (VIP) following nasal administration to rats. Int J Pharm. 255 (1-2), 87-97 (2003).
  29. Silva, S., et al. Encapsulated escitalopram and paroxetine intranasal co-administration: In vitro/in vivo evaluation. Front Pharmacol. 12, 751321(2021).
  30. Selvaraj, K., Gowthamarajan, K., Karri, V. V. S. R. Nose to brain transport pathways an overview: Potential of nanostructured lipid carriers in nose to brain targeting. Artif Cells Nanomedicine Biotechnol. 46 (8), 2088-2095 (2017).
  31. Jeong, S. H., Jang, J. H., Lee, Y. B. Drug delivery to the brain via the nasal route of administration: Exploration of key targets and major consideration factors. J Pharm Investig. 53 (1), 119-152 (2023).
  32. Cherait, A., Banks, W. A., Vaudry, D. The potential of the nose-to-brain delivery of PACAP for the treatment of neuronal disease. Pharmaceutics. 15 (8), 2032(2023).
  33. Crowe, T. P., Hsu, W. H. Evaluation of recent intranasal drug delivery systems to the central nervous system. Pharmaceutics. 14 (3), 629(2022).
  34. Hanson, L. R., Frey, W. H. Intranasal delivery bypasses the blood-brain barrier to target therapeutic agents to the central nervous system and treat neurodegenerative disease. BMC Neurosci. 9 Suppl 3, S5(2008).
  35. Meredith, G. E., Rademacher, D. J. MPTP mouse models of Parkinson's disease: An update. J Park Dis. 1 (1), 19-33 (2011).
  36. Sarrafchi, A., Bahmani, M., Shirzad, H., Rafieian-Kopaei, M. Oxidative stress and Parkinson's disease: New hopes in treatment with herbal antioxidants. Curr Pharm Des. 22 (2), 238-246 (2016).
  37. Hirsch, E. C., Hunot, S. Neuroinflammation in Parkinson's disease: A target for neuroprotection. Lancet Neurol. 8 (4), 382-397 (2009).
  38. Baillet, A., et al. The role of oxidative stress in amyotrophic lateral sclerosis and Parkinson's disease. Neurochem Res. 35 (10), 1530-1537 (2010).
  39. Mythri, R. B., et al. Evaluation of markers of oxidative stress, antioxidant function and astrocytic proliferation in the striatum and frontal cortex of Parkinson's disease brains. Neurochem Res. 36 (8), 1452-1463 (2011).
  40. Venkateshappa, C., et al. Increased oxidative damage and decreased antioxidant function in aging human substantia nigra compared to striatum: Implications for Parkinson's disease. Neurochem Res. 37 (2), 358-369 (2012).
  41. Ghouili, I., et al. Endogenous expression of ODN-related peptides in astrocytes contributes to cell protection against oxidative stress: Astrocyte-neuron crosstalk relevance for neuronal survival. Mol Neurobiol. 55 (6), 4596-4611 (2018).
  42. Kaddour, H., et al. Antioxidant and anti-apoptotic activity of octadecaneuropeptide against 6-OHDA toxicity in cultured rat astrocytes. J Mol Neurosci MN. 69 (1), 1-16 (2019).

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