Aqui, apresentamos um protocolo para coleta e processamento de biópsia conjuntival para identificar penfigóide de membrana mucosa.
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Artigo de método
Técnica de Biópsia Conjuntival e Imunofluorescência Direta para Diagnóstico de Penfigoide de Membrana Mucosa
Neste artigo
Resumo
Resumo
O penfigoide da mucosa ocular (MMP) apresenta-se como conjuntivite cicatrizante crônica que, se não tratada, pode causar cegueira. O diagnóstico oportuno e a terapia imunossupressora previnem a progressão da doença. A coloração direta por imunofluorescência (IFD) da biópsia conjuntival para deposição de imunocomplexos na membrana basal é diagnóstica de MMP. A taxa de positividade da biópsia depende das características da biópsia, lateralidade, idade avançada e atividade da doença. O artigo de métodos atuais descreve a técnica de coleta da biópsia conjuntival e o uso de cartuchos de temperatura de corte ideal para transferência de amostras e preparação de blocos. Uma biópsia é realizada em uma região não cicatrizada, não envolvida ou relativamente menos envolvida da conjuntiva em ambos os olhos. O tamanho usual da biópsia é de 4-5 mm de comprimento, 2-3 mm de largura e deve ter um pequeno tecido subconjuntival subjacente para que a membrana basal não seja perdida. Recomendamos a realização da coloração com ácido periódico de Schiff para confirmar a presença da membrana basal. Usando um protocolo especificado, as criosseções de biópsias são coradas com anticorpos conjugados fluorescentes IgG, IgM, IgA e fatores de complemento C3c e C4c. Uma biópsia positiva mostra a fluorescência verde positiva na membrana basal e, mesmo que um dos anticorpos seja positivo, é positivo para MMP. Uma biópsia negativa não descarta penfigoide; no entanto, um positivo confirma a MMP e a diferencia da conjuntivite cicatrizante induzida por drogas ou pseudopenfigóide.
Introdução
O penfigoide de mucosa (MMP) é uma doença conjuntival cicatrizante crônica de etiologia autoimune e acomete as membranas mucosas do organismo 1,2. A conjuntivite cicatrizante crônica tem diferentes etiologias, sendo necessária a diferenciação da MMP da SSJ, sarcoidose, neoplasia escamosa ocular e pseudopenfigóide, pois a primeira requer imunossupressão sistêmica 3,4. Além disso, a MMP é uma doença potencialmente cegante, em que os pacientes geralmente se apresentam tardiamente e são diagnosticados erroneamente inicialm....
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Protocolo
O protocolo segue as diretrizes do comitê de ética em pesquisa humana do comitê de ética em pesquisa humana do LV Prasad Eye Institute.
1. Técnica de biópsia conjuntival
- Planeje a biópsia de ambos os olhos do paciente com suspeita de penfigoide sob anestesia tópica ou local e microscópio cirúrgico.
- Obtenha o consentimento informado do paciente e liste os possíveis efeitos colaterais de sangramento, cicatrizes e a necessidade de iniciar esteróides tópicos após a cirurgia.
- Coloque 1-2 gotas de proparacaína a 0,5% em ambos os olhos e aguarde 5 minutos antes de i....
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Resultados
A interpretação da IFD requer a confirmação da presença da membrana basal nos cortes teciduais (Figura 1). Nas lâminas coradas com PAS, a membrana basal aparecerá como uma membrana rosa brilhante situada na região basal do epitélio conjuntival (Figura 1C). A continuidade e a arquitetura da membrana basal também devem ser comentadas. A positividade da IFD será vista como MO verde brilhante (Figura 1B), indicando a deposição de IgM (<.......
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Discussão
A técnica de biópsia conjuntival aqui descrita utiliza o meio OCT como meio de transferência, evitando a necessidade de um meio de transferência adicional e evitando o manuseio da biópsia para transferi-lo para o meio OCT para criossecção. Um molde de cartucho de plástico preenchido com meio e biópsia é congelado diretamente para fazer blocos de tecido e depois seccionado. As vantagens da OCT são que ela congela rapidamente com danos mínimos causados pela formação de cristais e encapsula.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a divulgar.
Agradecimentos
Agradecemos à Hyderabad Eye Research Foundation, Índia, por apoiar este estudo.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 1 N ácido clorídrico | Finar química Limited | 7647-01-0 | |
| Acetona | Qualigens | Pergunta 33517 | |
| Albumina | DAKO | F0117 | |
| Fucsina básica | Qualigens | Pergunta 39402 | |
| C3c | Biossistemas de Diagnóstico | F003 | |
| C4c | Biossistemas de Diagnóstico | F005 | |
| Cartucho | Policiências | 25376-500 | |
| Carvão ativado | Sigma | C-5260 | |
| Criostato | Leica | CM1860UV | |
| Lâminas criotomos | Leica | 818 | |
| DAPI | Abcam | ab104139 | |
| Fibrinogênio | Biossistemas de Diagnóstico | F006 | |
| Microscópio de fluorescência | Olimpo | CX43 | |
| Fórceps | Joja cirúrgico | JS1528A | |
| Câmara de Umidade | Biossistemas de Diagnóstico | SM365 | |
| IgA | Biossistemas de Diagnóstico | F007 | |
| IgG | Biossistemas de Diagnóstico | F008 | |
| Grão-mestre | Biossistemas de Diagnóstico | F009 | |
| Lâminas de vidro adesivas IHC | Tomo | 33140455 | |
| Fórceps de Lim | Autódromo | S-7223 | |
| Meio tansport de Michel | Fisher Scinitics | NC0253304 | |
| Vidro de cobertura microscópico | Estrela azul | https://www.bluestarslides.com | |
| OCT Médio | Criomatriz | 6769006 | |
| PBS | DAKO | DM831 | |
| Ácido periódico | Sigma | 375810-25G | |
| Dissulfito de potássio | Sigma | Pág. 2522-500G | |
| Proparacaína 0,5% | Sunway Private | G / 1118A | |
| Tesoura de Westcott | Pillig Instrumentos Cirúrgicos | 423480 |
Referências
- Jain, N., Jakati, S., Shanbhag, S. S., Basu, S. Direct immunofluorescence findings and factors affecting conjunctival biopsy positivity in ocular mucous membrane pemphigoid. Cornea. 43 (2), 159-165 (2024).
- Vazirani, J., et al.
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Reimpressões e permissões
