Construção de Microarray de Tecido à Base de Cola para Pesquisa de Tumores e Doenças

Summary

Este protocolo descreve uma produção de baixo custo e um método de validação eficiente para a construção de TMA à base de cola, fornecendo uma plataforma de diagnóstico patológico conveniente para a pesquisa de tumores e doenças.

Abstract

A tecnologia de microarray de tecido (TMA) é uma plataforma de alto rendimento para a detecção e análise simultâneas de várias amostras de tecido, facilitando a pesquisa eficiente de biomarcadores de tumores e doenças. No entanto, os métodos convencionais de construção de TMA geralmente enfrentam limitações como complexidade operacional, procedimentos demorados e precisão variável. Um método de construção de TMA à base de cola foi desenvolvido para superar esses desafios, oferecendo melhor fixação do núcleo do tecido e maior estabilidade estrutural. A validação sistemática incluiu avaliação histológica (coloração HE), perfil imuno-histoquímico de proteínas-alvo e análise de hibridização in situ fluorescente (FISH). Os resultados demonstraram que o método baseado em cola manteve excelente integridade de corte, melhorou a relação sinal-ruído e garantiu reprodutibilidade consistente de lote para lote. Embora a abordagem seja limitada à operação manual, ela apresenta uma opção confiável e econômica para a produção de TMA de rendimento moderado. Este método é particularmente adequado para ambientes de pesquisa que valorizam a flexibilidade e a diversidade de amostras em vez da automação em larga escala, expandindo a utilidade do TMA em ambientes acadêmicos e de diagnóstico.

Introduction

O Tissue Microarray (TMA) é uma técnica de alto rendimento para analisar amostras de tecido ^1,2,3. Múltiplos núcleos de tecido doador são obtidos e os blocos de parafina do doador são transferidos para blocos de tecido receptor para análise molecular diferencial e comparativa simultânea sob teoricamente as mesmas condições^{de desempenho 2,4}. A maneira clássica de construir um microarray de tecido (TMA) é usar um perfurador para extrair núcleos de tecido de uma amostra de tecido doador ....

Protocol

Todos os blocos de doadores foram obtidos de amostras patológicas de arquivo coletadas entre 2016 e 2018 no Hospital Popular Afiliado Huai'an No.1 da Universidade Médica de Nanjing. As amostras foram desidentificadas antes do uso e processadas em conformidade com os protocolos aprovados (o comitê de ética do Hospital Popular Afiliado Huai'an No.1 da Universidade Médica de Nanjing, KY-2024-250-01).

1. Avaliação e marcação do tecido do dador

1. Selecione blocos de tecido com espessura de ≥5 mm e área de ≥15 mm × 15 mm. Garanta uma margem de segurança de 2 mm nas bordas e exclua regiõ....

Results

No presente estudo, microarrays de tecido de alta qualidade foram construídos usando o método de cola. Para verificar a eficácia do método, uma série de experimentos foi realizada, incluindo coloração H&E, detecção imuno-histoquímica de proteínas específicas e análise de hibridização in situ fluorescente (FISH). Um componente crítico do processo de construção é a presença de pontos do núcleo do tecido nas posições e distâncias esperadas entre si, o que é avaliado por inspeção visual. A inspeção visual dos bl.......

Discussion

Como um método inovador para a construção de microarrays de tecido (TMA), o método de cola tem mostrado vantagens significativas devido à sua facilidade de procedimentos de construção e custo-benefício. Comparado ao método tradicional de arranjo de agulhas, que conta com instrumentos sofisticados^14,15, o método da cola permite a fixação da amostra por colagem, que pode ser feita apenas com ferramentas básicas, reduzindo muito o l.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Kit de detecção de câncer de mama HER2	Anbiping	2502001	Kit de detecção de câncer de mama HER2
anticorpo CDHR4 Abcam	ab166914	CDHR4
anticorpo CDK1 anticorpo Abcam		ab265590	CDK1 anticorpo
CRTAC1 anticorpo	Abcam	ab254691	CRTAC1
anticorpo DNASE1L3 Abcam	ab203669		Máquina
de incorporação de	DNASE1L3 P.S.J MEDICAL	BM450A	Máquina de incorporação
Desidratador de tecidos totalmente automático	Leica Biosystems	ASP3005	Desidratador de tecidos totalmente automático
Lâminas de microscópio de vidro	Citotest	250124A1	Lâminas de microscópio de vidro
Cola	TIZO	200	Cola
GPR146 anticorpo	Abcam	ab117104	GPR146
anticorpo IGSF10	Abcam	ab197671	IGSF10 anticorpo
ITIH1 Abcam		ab233032	ITIH1 anticorpo
Lâminas de micrótomo de baixo perfil	Thermo Fisher	3052835	lâminas de micrótomo de baixo perfil
Caneta marcadora	Deli	SK109	Caneta marcadora
micrótomo	Leica Biosystems	de micrótomo	HistoCore BIOCUT
	Solarbio	YA0012	Anticorpo
SMAD9	Abcam	ab262940	Anticorpo SMAD9
Anticorpo TARBP1 Abcam		ab115896	Anticorpo TARBP1
ZCCHC24 Anticorpo	Abcam	ab88756	Anticorpo ZCCHC24