Este estudo tem como objetivo investigar os efeitos da eletroacupuntura na regeneração da mielina em um modelo de LM em rato e verificar se a via de sinalização Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 desempenha um papel nesse processo.
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Artigo de investigação
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Este estudo tem como objetivo investigar os efeitos da eletroacupuntura na regeneração da mielina em um modelo de LM em rato e verificar se a via de sinalização Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 desempenha um papel nesse processo.
A lesão medular (LME) frequentemente resulta em disfunção neurológica severa, e o reparo da mielina é um passo fundamental na recuperação da função neurológica. A eletroacupuntura (EA), um método terapêutico que combina acupuntura tradicional com estimulação elétrica, tem sido amplamente aplicada no campo da reparação nervosa. No entanto, as vias específicas de sinalização envolvidas na EA não foram totalmente esclarecidas. Este estudo tem como objetivo investigar os efeitos da AA na regeneração da mielina em ratos com lesão medular e verificar se a via de sinalização Neuregulin1 (NRG1)-ErbB4 desempenha um papel nesse processo. Ratos com LM foram induzidos por lesão no clipe de aneurisma no segmento espinhal T10. Um cateter de polietileno (PE) foi implantado no canal vertebral entre os espaços intervertebrais L5-6 e fixado subcutâneamente para estabelecer um sistema de administração de medicamentos a longo prazo. NRG1 exógeno e seu antagonista eram administrados pelo cateter PE dia sim, dia não, com volume de 20 μL por injeção. O tratamento de EA foi aplicado nos pontos de acupuntura Dazhui (GV14) e Mingmen (GV4) dia sim, dia não, cada sessão durando 30 minutos durante 4 semanas consecutivas. Os resultados mostraram que o tratamento com EA promoveu significativamente a expressão da proteína básica de mielina (MBP) no tecido da medula espinhal e melhorou a função motora dos membros posteriores nos ratos. Além disso, o NRG1 exógeno produziu efeitos semelhantes aos EA. Em conclusão, a via de sinalização NRG1-ErbB4 desempenha um papel importante na regeneração da mielina induzida por EA em ratos com LME.
A LM é uma condição traumática que leva a déficits neurológicos severos, tipicamente manifestados por comprometimento motor, perda sensorial e disfunção autonômica, com uma incidência anual de aproximadamente 40-80 casos por milhão de pessoas no mundo 1,2. Após a lesão, ruptura axonal e perda de mielina são as principais características patológicas que dificultam a condução do sinalneural 3. A mielina é formada por oligodendrócitos no sistema nervoso central (SNC) e células de Schwann no sistema nervoso periférico (SNP), e sua integridade é crucial para a condução rápida dos impulsosnervosos 4. No entanto, a resposta inflamatória, o estresse oxidativo e a formação de cicatrizes gliais no microambiente local após LME inibem significativamente a regeneração da mielina, levando à disfunção neurológicacrônica 5. Ao mesmo tempo, a morte de oligodendrócitos (OLs) após LM leva à desmielinização dos axônios, um processo que se desenvolve cronicamente e de forma persistente. Estudos mostraram que a desmielinização axonal em modelos humanos e animais pode ser efetivamente reparada por meio da regeneraçãoda mielina 6. Portanto, explorar estratégias para promover a reparação da mielina é uma das direções-chave no tratamento das LMs.
A acupuntura, como uma técnica médica tradicional antiga, tem sido amplamente aplicada na prática clínica em vários países, incluindo China, Coreia eJapão 7,8. A EA, que combina acupuntura tradicional com estimulação elétrica, tem sido amplamente adotada em ambientes clínicos. Evidências crescentes mostram que a EA tem efeitos terapêuticos em diversas doenças, especialmente na promoção da regeneração da mielina após lesão medular. A seleção dos pontos de acupuntura é fundamental durante o tratamento com EA, como GV14 e GV49. GV14 está localizada abaixo do processo espinhoso dasétima vértebra cervical, próximo à linha média da coluna, enquanto GV4 está localizada entre os processos espinhosos da2ª e3ª vértebras lombares. Estudos anteriores mostraram que vias de sinalização inflamatória, estresse oxidativo, fatores neurotróficos e autofagia desempenham um papel na reparação da mielina induzida peloEA 10,11,12. Além disso, evidências crescentes sugerem que pontos específicos de acupuntura, como GV14 e GV4, desempenham um papel ativo na promoção da regeneração da mielina durante o tratamento comEA 13,14,15. No entanto, os mecanismos moleculares pelos quais a EA regula a regeneração da mielina após lesão da medula espinhal ainda não foram totalmente elucidados.
NRG1 é um membro da família dos fatores de crescimento epidérmicos e, com base em sua região amino-terminal, pode ser classificado em seis tipos (I-VI)16. NRG1 e sua família de receptores, ErbB (ErbB1/2/3/4), desempenham papéis significativos no desenvolvimento e reparo do sistema nervoso, incluindo processos como migração neuronal, diferenciação, remielinização e sinaptogênese. Durante o desenvolvimento da SNP, as células de Schwann (SCs) proliferam e migram ao longo dos axônios dos neurônios para formar mielina, e a via de sinalização NRG1-ErbB4 desempenha um papel fundamental na maturação das células progenitoras de Schwannda SNP 17,18. Estudos anteriores mostraram que a via de sinalização NRG1 está envolvida na diferenciação de células-tronco neurais em células de Schwann e promove a reparação da mielina após aLME 19. Além disso, um estudo mostrou que, após lesão da medula espinhal, a via de sinalização NRG1-ErbB4 promove a transformação de células progenitoras de oligodendrócitos (OPCs) em células semelhantes a Schwann com potencialde remyelinização 20. Alex et al. construíram um sistema de co-cultura de neurônios sensoriais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos e células de Schwann de rato, e descobriram que bloquear a via de sinalização NRG1-ErbB com medicamentos inibia significativamente a mielinização neuronal, fornecendo evidências diretas do papel dessa via na promoção da mielinização do axônio sensorialhumano 21. Outro estudo também mostrou que o tratamento com EA pode aumentar a expressão de NRG1 na medula espinhal e aliviar a dorinflamatória 22.
Pesquisas sobre o impacto da EA na via de sinalização NRG1-ErbBB4 na LME são limitadas, e os mecanismos subjacentes permanecem incertos. Este estudo tem como objetivo investigar se a estimulação do EA nos pontos de acupuntura GV14 e GV4 pode regular a transdução do sinal NRG1-ErbB4 e explorar seu papel potencial na promoção da regeneração da mielina e recuperação da função neurológica em ratos com LME. Este é o primeiro estudo a examinar a relação entre a via de sinalização NRG1-ErbB4 e a regeneração de mielina induzida por EA em ratos com LM, fornecendo evidências experimentais para o desenvolvimento de estratégias de tratamento novas e eficazes para LME.
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Todas as diretrizes éticas foram seguidas durante o experimento para minimizar o sofrimento animal. O protocolo experimental e o desenho foram aprovados pelo Comitê de Experimentos com Animais da Universidade Médica de Kunming (Aprovação nº KMMU2021051) e conduzida de acordo com as diretrizes de pesquisa animal da universidade. Ratos Sprague-Dawley machos adultos (8 semanas, pesando 250-270 g, n = 60) foram obtidos na Universidade Médica de Kunming (Yunnan, China).
Preparação animal
Os animais foram alojados em um ambiente controlado com umidade constante, temperatura moderada e um ciclo de 12 horas de luz/escuro. Os animais foram aleatoriamente distribuídos em 11 grupos: grupo de operação simulada (S, n = 6), grupo LM (M, n = 6), LM com grupo de tratamento EA (M + EA, n = 6), LM com grupo de tratamento NRG-1β (M + NRG-1β, n = 6), LM com grupo solvente DMSO a 5% (M + D, n = 6), LM com inibidor de PD158780 e grupo de tratamento NRG-1β (M + PD+NRG-1β, n = 6), LM com grupo de tratamento PD158780 inibidor e EA (M + EA + PD, n = 6), LM com solvente e grupo de tratamento EA (M + EA + D, n = 6), LMI com grupo de tratamento com shRNA e EA (M + EA + shRNA, n = 6), LMI com lentivírus contendo shRNA não direcionado e grupo de tratamento EA (M + EA + NC, n = 6), LM com grupo de tratamento com shRNA (M + shRNA, n = 6). O tamanho atual da amostra foi determinado com base em nossa experiência prévia com modelos e intervenções semelhantes, que têm mostrado consistentemente efeitos significativos com esse número. Além disso, apesar do tamanho da amostra, observamos diferenças estatisticamente robustas e significativas nos principais desfechos, o que fortalece a confiança nos achados relatados.
Modelo de rato SCI
Um clipe de aneurisma Yasargil (titânio, força padrão de fechamento de 70 g) foi usado para estabelecer um modelo de LM em rato usando uma técnica do tipo clamp (Figura 1A). Os ratos foram anestesiados com 2% de pentobarbital de sódio (30 mg/kg, intraperitoneal) e colocados em uma mesa de cirurgia. Foi feita uma incisão de 3 a 4 cm na pele dorsal, seguida por uma dissecação camada por camada do tecido subcutâneo e do músculo para expor os processos espinhosos torácicos T9-11 e os arcos vertebrais. Um clipe vascular foi usado para remover o processo espinhoso torácico T10 e o arco vertebral, expondo totalmente a medula espinhal. O clipe do aneurisma Yasargil foi posicionado verticalmente sobre todo o segmento T10 e liberado rapidamente após um tempo de permanência de 60 s. O modelo foi considerado bem-sucedido se dois ou mais dos seguintes sinais fossem observados: (1) tremor espasmódico do corpo, (2) reflexo de balançar a cauda e (3) marcas pretas visíveis de beliscão na medula espinhal. Após garantir uma hemostase adequada, a incisão foi desinfetada e suturada. No grupo de cirurgia simulada, o mesmo procedimento foi realizado, exceto que a medula espinhal não foi clampada. Após a operação, os ratos receberam soro fisiológico normal (3 mL, intraperitoneal) para reidratação e penicilina (100.000 unidades, intraperitonealmente) uma vez pela manhã e outra à noite por 3 dias consecutivos para prevenir infecção. A assistência manual na micção era fornecida até que a micção espontânea fosse restaurada (2 vezes ao dia).
Tubo intratecal de ratos e administração de medicamentos
Seguindo o método de Storkson et al.23, um cateter foi implantado no espaço subaracnoideo em ratos 1 semana antes da indução do modelo de LM. Após a anestesia, os ratos foram fixados na mesa de cirurgia e o espaço intervertebral L5-6 foi exposto. Uma agulha de 19G foi usada para penetrar verticalmente a dura-mãe e a membrana aracnoide. A agulha foi avançada aproximadamente 1-2 mm e, após romper a membrana aracnoide, sentiu-se uma sensação de espaço, seguida pelo fluxo claro do líquido cefalorraquidiano, indicando perfuração bem-sucedida. Um cateter PE-10 (polietileno, diâmetro interno 0,38 mm, diâmetro externo 1,09 mm) foi inserido no espaço subaracnoideo ao longo da agulha de perfuração. O cateter foi avançado para aproximadamente 3 cm de comprimento, com a ponta do cateter posicionada próxima ao corpo vertebral L3. Durante a inserção, foram observados movimentos de cauda e contrações nos membros posteriores nos ratos, e líquido cefalorraquidiano fluiu pelo cateter, confirmando a posição do cateter dentro do espaço subaracnoideo.
Tanto o NRG-1β quanto o PD158780 foram dissolvidos em dimetil sulfóxido (DMSO) e posteriormente diluídos com líquido cefalorraquidiano artificial (ACSF), garantindo que a concentração final de DMSO permanecesse abaixo de 0,5%. As concentrações finais de trabalho foram 20 nM para NRG-1β e 20 μM para PD15878024. No segundo dia após a LME, ratos do grupo M + NRG-1β receberam injeções intratecais de 20 μL de NRG-1β a cada dois dias. Ratos do grupo M + EA + DP receberam 20 μL de PD158780intratecalmente 25, 2 horas antes do tratamento com EA.
Tratamento de EA
Noterceiro dia após a cirurgia, os ratos foram fixados na mesa de tratamento para a terapia de eletroacupuntura (EA) nos pontos de acupuntura GV14 e GV4 (Figura 1B). Duas agulhas de acupuntura (0,25 mm x 13 mm) foram inseridas nesses pontos até uma profundidade de 3-4 mm. A terapia com EA foi administrada usando um dispositivo de eletroacupuntura com padrão de ondas densas e esparsas (onda esparsa a 2 Hz e onda densa a 10 Hz, com razão de frequência de 1:5)26. A intensidade de saída era ajustada para 5 (aproximadamente 0,5 mA) por 30 minutos, dia sim, dia não.
Avaliação comportamental
A função locomotora foi avaliada usando a escala Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) 27, que avalia o movimento dos membros, marcha, coordenação e posicionamento das patas nos seguintes momentos: 0, 3, 7, 14, 21 e 28 dias após a cirurgia ( Figura 2D). A escala BBB varia de 0 (representando paralisia completa) a 21 (indicando marcha normal). Todas as avaliações foram realizadas de forma independente por dois pesquisadores que estavam cegos para as tarefas experimentais em grupo.
Coleta de amostras
Após a conclusão do experimento, ratos anestesiados foram fixados em uma plataforma de dissecação para coleta de tecido. A cavidade abdominal foi aberta para expor totalmente o diafragma, que foi cuidadosamente inciso com tesoura de íris para evitar lesão vascular. A caixa torácica foi então aberta ao longo de ambas as margens costais para expor o coração, após o que uma agulha foi inserida no ventrículo esquerdo no ápice e aproximadamente 300-400 mL de PBS pré-resfriado foram rapidamente perfundidos para limpar o sangue sistêmico até que o líquido claro fluísse do átrio direito. Para a análise de proteínas moleculares, a perfusão foi interrompida nesse estágio e a coluna vertebral foi dissecada. Após remover costelas e músculos adjacentes para expor as vértebras, o segmento T10 foi localizado, e um segmento da medula espinhal aproximadamente 1 cm rostral e caudal até T10 foi coletado usando tesoura de íris, depois congelado rapidamente em nitrogênio líquido e armazenado a -80 °C. Para exame morfológico, a perfusão foi trocada para paraformaldeído a 4% após PBS, com fixação bem-sucedida indicada pela contração muscular e rigidez do tronco. O mesmo segmento espinhal foi então cuidadosamente dissecado para preservar a arquitetura do tecido e postfixado em paraformaldeído a 4% a 4 °C por 48 horas.
Coloração de hematoxilina e eosina
As seções de parafina da medula espinhal foram colocadas em um forno a 60 °C para pré-aquecimento por 30 minutos. Desceramento: Xileno I por 15 minutos, seguido de Xileno II por 15 minutos. Reidratação: Tratado com 100% etanol por 2 minutos, depois 95% etanol por 2 minutos, depois 80% de etanol por 2 minutos, seguido de 70% etanol por 2 minutos, E finalmente destilei água por 5 minutos. A coloração por hematoxilina foi feita por 7 minutos, seguida de enxágue com água destilada para remover a solução residual de mancha. A diferenciação em álcool ácido clorídrico a 1% foi realizada por 3 segundos, seguida de enxaguamento com água destilada para remover a solução residual de mancha. Fiz azulamento com água de 5% de amoníaco por 2 minutos, seguido de lavagem da solução residual de azulamento. Foi feita a coloração com eosina por 30 segundos, seguida de enxágue com água destilada para remover a solução residual de mancha. A desidratação das seções foi feita com 70% de etanol por 10 segundos, depois 80% de etanol por 10 segundos, e finalmente com 100% de etanol por 30 segundos. A limpeza foi feita com tratamento com xileno por 5 minutos. Após a montagem, os slides eram secados ao ar e as imagens eram capturadas após a secagem.
Coloração azul rápida Luxol
As seções foram desenceradas 2 vezes com xileno por 10 minutos cada, depois coradas com solução de coloração de mielina LFB e incubadas durante a noite a 37 °C. No dia seguinte, a solução de coloração em excesso foi removida usando etanol 90%. As seções foram diferenciadas em solução de diferenciação de Luxol por 10 s (C0631S), seguidas por imersão em etanol a 75% por 30 s até que a substância cinzenta parecesse clara. Por fim, as seções foram contra-tingidas com solução de coloração de eosina por 1 minuto.
Western blot
As amostras de proteína foram fervidas em água por 5 minutos. Um total de 5 μL de marcador proteico foi inicialmente carregado no gel de eletroforese, seguido pelo carregamento sequencial das amostras de proteína testada. A eletroforese era iniciada a 80 V até que as bandas marcadoras fossem claramente separadas, após o que a voltagem era aumentada para 130 V e mantida até a conclusão da eletroforese. Membranas PVDF pré-cortadas foram ativadas em metanol por 1 minuto, depois colocadas sobre papel de filtro e sobrepostas com o gel preparado. A transferência de proteínas foi realizada com uma corrente constante de 300 mA, com o tempo de transferência ajustado de acordo com o peso molecular (± 10 min). Após a transferência, a membrana PVDF foi colocada em uma caixa de incubação, enxaguada com tampão TBST por 5 minutos e depois bloqueada com leite desnatado a 5% em temperatura ambiente em um shaker por 2 horas. A membrana foi posteriormente lavada 3 vezes com tampão TBST por 5 minutos cada antes da incubação com anticorpos primários, incluindo GAPDH (1:2000), Tubulina (1:2000), NRG1 (1:1000), ErbB4 (1:1000) e MBP (1:1000), durante a noite a 4 °C com suave agitação. No dia seguinte, a membrana foi lavada 3 vezes com tampão TBST por 5 minutos cada, depois incubada com anticorpo secundário, anti-coelho de cabra (1:4000), em temperatura ambiente em um shaker por 2 horas. Após lavagem com TBST, as bandas proteicas foram visualizadas usando quimioluminescência. Importe a imagem do WB para o software ImageJ e realize a subtração de fundo usando um raio de bola rolante de 50 pixels. Para faixas inclinadas, use a ferramenta Linha Segmentada para endireitar as faixas. Use a ferramenta Retângulo para selecionar as bandas-alvo e gerar um perfil de densidade selecionando Plotar Pistas para visualizar os valores em escala de cinza das bandas. Use a ferramenta Varinha Mágica para segmentar os picos e extrair os valores em tons de cinza. Após salvar os dados, use o software GraphPad Prism para criar gráficos de barras.
Imunofluorescência
As seções de parafina foram desenceradas duas vezes com xileno por 10 minutos cada e reidratadas por meio de uma série graduada de etanol. A coleta de antígeno foi realizada fervendo as seções em solução de ácido cítrico a 5% por 15 minutos, seguida de bloqueio com soro de cabra a 10% por 2 horas. As seções foram então incubadas durante a noite a 4 °C com os seguintes anticorpos primários: NRG-1 monoclonal de camundongo (1:200), ErbB4 monoclonal de coelho (1:300) e MBP monoclonal humano (1:300). Após três lavagens com soro salino tamponado com fosfato contendo 0,1% Triton X-100 (PBST) por 10 minutos cada, as seções foram incubadas por 1 hora no escuro com os seguintes anticorpos secundários: IgG anti-camundongo marcado com FITC (1:500), IgG anti-coelho marcado com FITC (1:500) e IgG anti-humano de cabra marcado com FITC (1:500). As seções foram lavadas 3 vezes com PBST por 10 minutos cada, depois fixadas e montadas com reagente antifade para preservar os sinais fluorescentes. Os slides eram armazenados a 4 °C no escuro. Após localizar as células-alvo sob uma lente objetiva 10x usando um microscópio de fluorescência, mude para uma lente de 40x para capturar a imagem de fluorescência.
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real (RT-PCR)
Os primers para ErbB4 e o gene de referência GAPDH foram desenvolvidos usando o site do NCBI. As sequências dos espoletas eram as seguintes: ErbB4 espoleta frontal: ACAGCCCTCCTCCTGCCTAC; Primer reverso ErbB4 : ATCTCAGCCGTTGCCCCT; GAPDH para avançar: CCCAGCTTAGGTTCATCATCAGGT; Primer reverso GAPDH : TACGCCAAATCCGTTCACA. Tecido da medula espinhal do tamanho de uma soja foi colocado em um tubo centrífugo de 1,5 mL, e 600 μL de reagente total de extração de RNA foram adicionados. O tecido foi completamente homogeneizado e incubado no gelo por 5 minutos, seguido por centrifugação a 12.000 x g por 5 minutos a 4 °C. O sobrenadante foi transferido para um novo tubo de 1,5 mL, e 400 μL de clorofórmio foram adicionados. A mistura foi cuidadosamente misturada e centrifugada a 12.000 x g por 5 minutos a 4 °C. O sobrenadante foi transferido novamente para um novo tubo, e 400 μL de isopropanol foram adicionados. A solução foi incubada em temperatura ambiente por 10 minutos, seguida por centrifugação a 12.000 x g por 10 minutos. O sobrenadante foi descartado, e o pellet de RNA foi lavado com 400 μL de etanol a 75%. Após a centrifugação a 7.500 x g por 5 minutos a 4 °C, o sobrenadante era descartado e o tubo era invertido para secar ao ar sobre uma superfície limpa. O pellet de RNA foi dissolvido em 60 μL de água livre de RNA, misturado completamente, e a concentração de RNA foi medida. A pureza e concentração do RNA foram registradas medindo a absorção em 260 nm e 280 nm, garantindo que a razão 260/280 fosse em torno de 2,0. Para a síntese de cDNA, a Reação 1 (contendo GDNA Eraser, etc.) e a Reação 2 (contendo transcriptase reversa, etc.) foram cuidadosamente misturadas, e a mistura foi incubada a 95 °C por 15 minutos. O sistema de reação por PCR de fluorescência foi preparado de acordo com as instruções do kit de síntese de cDNA. Uma amostra de 2 μL foi adicionada a 23 μL da mistura de reação PCR, e a amplificação foi realizada de acordo com o protocolo do kit de PCR quantitativa de fluorescência. A temperatura de recozimento foi ajustada para 60 °C, e as condições de amplificação foram as seguintes: Pré-desnaturação: 95 °C por 30 s, 1 ciclo; Reação de PCR: 95 °C por 3 s, 60 °C por 30 s, 40 ciclos; A análise da curva de dissociação foi realizada da seguinte forma: 95 °C por 5 s, 60 °C por 30 s, seguido por um aumento gradual de 60 °C para 95 °C com aquisição contínua de sinais de fluorescência. Os valores de Ct foram medidos e calculados usando o software Bio-Rad, e os níveis relativos de mRNA foram determinados usando o método 2-ΔΔCt .
Diretrizes de segurança e manuseio
Fixação com paraformaldeído: Use paraformaldeído exclusivamente em uma exaustão bem ventilada. Sempre use equipamentos de proteção individual (EPI) adequados, incluindo máscara, luvas, jaleco e óculos de segurança. Armazene a solução de paraformaldeído em um recipiente bem fechado, longe da luz solar direta e das fontes de calor. Descarte o paraformaldeído residual de acordo com as diretrizes de segurança laboratorial da Universidade Médica de Kunming, colocando-o em um recipiente de resíduos perigosos.
Solução DMSO: O DMSO pode ser absorvido pela pele e entrar no corpo. Use EPI adequado, incluindo luvas e óculos de proteção, durante o manuseio. Armazene o DMSO em um recipiente selado à temperatura ambiente, longe de agentes oxidantes fortes. Descarte o DMSO de resíduos de acordo com as diretrizes de segurança laboratorial da Universidade Médica de Kunming, colocando-o em um recipiente de resíduos perigosos.
Anestesia pentobarbital: Pentobarbital é uma substância controlada e deve ser manuseada apenas por pessoal autorizado. Evite exposições acidentais durante o manuseio e garanta a ventilação adequada durante o uso. Use equipamentos de proteção adequados. Armazene o pentobarbital em um armário trancado em temperatura ambiente, sob supervisão de pessoal autorizado. Descarte resíduos de pentobarbital em conformidade com as diretrizes da Universidade Médica de Kunming para substâncias controladas, garantindo a autorização adequada de uso e procedimentos de descarte de resíduos.
Descarte geral de lixo: Todos os produtos químicos e reagentes perigosos devem ser descartados de acordo com as diretrizes de gestão laboratorial da Universidade Médica de Kunming. Certifique-se de que todos os resíduos estejam devidamente rotulados e colocados em recipientes adequados para descarte seguro.
Análise estatística
Todos os experimentos foram realizados em triplicado ou mais. Os valores de densidade de banda das proteínas alvo foram normalizados para os do grupo controle para facilitar comparações entre os grupos. Os dados são apresentados como mediana (intervalo interquartil) ou média ± desvio padrão, com n representando o número de ratos. Para dados normalmente distribuídos, diferenças significativas entre os grupos foram avaliadas usando análise unidirecional da variância (ANOVA). Para dados não distribuídos normalmente, o teste Kruskal-Wallis H foi aplicado para comparar grupos. A significância estatística foi definida em p < 0,05.
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A coloração H&E e a pontuação BBB demonstram os efeitos protetores da EA em ratos com lesão medular
A coloração H&E foi usada para examinar a morfologia e a estrutura das células do chifre posterior da medula espinhal (Figura 2D). Os resultados do H&E revelaram que, no grupo S, as células do chifre posterior estavam organizadas de forma ordenada, com contornos celulares bem definidos e núcleos centralmente localiz...
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Este estudo demonstra que o tratamento com EA alivia a cavitação e desmielinização da medula espinhal após LME, promovendo a remielinização por meio da regulação positiva da expressão da proteína MBP e, consequentemente, melhora a função motora dos membros posteriores em ratos. Além disso, identificamos a via de sinalização NRG-1/ErbB4 como um mediador crítico da remielinização neuronal e um potencial mecanismo terapêutico pelo qual a EA promove a remielinização e a recuperação da função...
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Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Agradecemos aos autores por suas contribuições a este estudo. Este estudo foi financiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (NSFC 81960817, 82260387) e pelo Programa Especial de Pesquisa Básica do Plano de Ciência e Tecnologia do Departamento Provincial de Ciência e Tecnologia de Yunnan (202301AS070020). Projeto de Pesquisa e Desenvolvimento Científico da Faculdade de Medicina do Norte de Sichuan (CBY22-QNA20)
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Kit de Detecção de Proteínas BCA | Beyotime Biotecnologia | P0012S | Análise quantitativa de proteínas |
| Dispositivo de eletroacupuntura | Instrumento de Eletroacupuntura Huatuo, SDZ-V, Suzhou | — | Equipamentos terapêuticos |
| IgG anti-humano de cabra rotulada com FITC | Beyotime | A0556 | Anticorpo secundário fluorescente |
| IgG anti-camundongo rotulado com FITC | Beyotime | A0568 | Anticorpo secundário fluorescente |
| IgG anti-coelho de cabra rotulado com FITC | Beyotime | A0562 | Anticorpo secundário fluorescente |
| Microscópio de fluorescência | Olympus | — | — |
| MBP monoclonal humano | Abcam | ab209328 | Anticorpo específico |
| Solução de coloração de mielina com LFB | Solarbio | G3240 | Mancha da bainha de mielina |
| Millipore ECL | Millipore | WBKLS0100 | Reagentes de detecção |
| NRG-1 monoclonal de camundongo | Santa Cruz | SC-57384 | Anticorpo específico |
| Nanodrop ND-1000 | LabTech | — | |
| Beta do NRG1-1 | Novoprotein Technology Co | C753 | NRG1-1 beta humano recombinante |
| PD158780 | Tecnologia GlpBio | GC15925 | O inibidor da tirosina quinase do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) |
| Conduíte PE-10 | Becton, Dickinson e Companhia | 427401 | Injeção intratecal |
| Penicilina sódica para injeção | Harbin Zhongjing Biotechnology Co | 80451182 | Terapia antiinfecciosa pós-operatória |
| ErbB4 monoclonal de coelho | Abcam | ab109273 | Anticorpo específico |
| RNAiso Plus Kit | Takara | 9109 | Reagentes RT-PCR |
| Kit de Reagentes RT | Takara | RR037A | Reagentes RT-PCR |
| Anticorpo secundário | Beyotime Biotecnologia | — | Anticorpo específico |
| Pentobarbital sódico | Sigma-Aldrich | 69020100 | Anestesia animal |
| Clipe de aneurisma de Yasargil | Rebstock Instruments GmbH | — | Construção de um modelo de lesão da medula espinhal de rato |
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