Artigo de investigação

ML385 atenua a progressão maligna de células de adenocarcinoma de pulmão induzidas por sílica através da via do eixo de autofagia ROS/NRF2

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DOI:

10.3791/69382

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31 de outubro de 2025

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1School of Medicine, Anhui University of Science and Technology, 2Department of Medical Laboratory, Huaian Hospital of Huaian City, 3Department of Pathology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 4Department of Medical Laboratory, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 5Department of Pediatrics, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 6Department of Anesthesiology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 7Key Laboratory of Industrial Dust Deep Reduction and Occupational Health and Safety of Anhui Higher Education Institutes, 8Department of Blood Transfusion, Shanghai Pudong New Area People's Hospital

Neste artigo

Resumo

Este estudo emprega modelos animais e celulares para investigar se o inibidor de NRF2 ML385 atenua a progressão maligna do adenocarcinoma de pulmão induzida por sílica através da via do eixo ROS/NRF2-autofagia.

Resumo

A exposição à sílica está associada a um risco aumentado de adenocarcinoma de pulmão, mas seu mecanismo molecular permanece obscuro. Este estudo tem como objetivo estabelecer um protocolo experimental repetível para explorar como o inibidor do fator nuclear eritróide 2 relacionado ao fator 2 (NRF2) ML385 inibe a progressão maligna do adenocarcinoma de pulmão induzida por sílica, regulando a via do eixo ROS/NRF2-autofagia. Primeiramente, um modelo de silicose foi estabelecido por perfusão intranasal de suspensão de sílica em camundongos C57BL/6. O grau de fibrose pulmonar foi avaliado pela coloração de Masson, a infiltração de células imunes foi analisada por imunofluorescência e as expressões de NRF2, quinase dependente de ciclina 1 (CDK1) e canal aniônico dependente de voltagem 1 (VDAC1) no tecido pulmonar foram detectadas por imuno-histoquímica. Posteriormente, em experimentos in vitro , a linhagem celular de macrófagos RAW264.7 foi tratada com sílica. O fluxo autofágico e os níveis de estresse oxidativo foram avaliados por co-localização LC3-lisossomo e sondas ROS, e a intervenção foi realizada com o inibidor de NRF2 ML385. Finalmente, os efeitos do ML38 na migração, invasão e apoptose de células de adenocarcinoma de pulmão foram analisados por ensaio de risco, células passando por poros de um ensaio de tamanho específico e citometria de fluxo. Os resultados mostraram que a sílica pode induzir fibrose pulmonar, infiltração de células imunes e regulação positiva de NRF2, CDK1 e VDAC1 em camundongos (p < 0,001) e inibir o fluxo autofágico de macrófagos e reduzir os níveis de ROS. O ML385 pode reverter esses efeitos (p < 0,05). Este protocolo fornece um processo experimental completo, desde a construção do modelo in vivo até a pesquisa do mecanismo in vitro , oferecendo um caminho técnico operacional para estudar o mecanismo molecular do adenocarcinoma de pulmão relacionado à sílica e estratégias terapêuticas direcionadas ao NRF2.

Introdução

O adenocarcinoma de pulmão é a principal causa de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo, com uma estimativa de 2 milhões de novos casos e 1,76 milhão de mortes a cada ano1. Nos últimos anos, aumentou a incidência de adenocarcinoma de pulmão entre pessoas que nunca fumaram, o que pode estar relacionado a fatores ambientais, como a poluição do ar2. A sílica é um poluente ambiental comum e foi identificada como um potencial fator patogênico para adenocarcinoma de pulmão humano3. A sílica pode causar inflamação crônica persistente, levando à infiltração de macrófagos, linfócitos e neutrófilos, e à liberação de espécies reativas de oxigênio e fatores inflamatórios4. Esse microambiente inflamatório de longa duração promove a ocorrência de adenocarcinoma de pulmão 5,6. Embora a associação entre exposição à sílica e adenocarcinoma de pulmão tenha sido confirmada, seu mecanismo molecular específico não foi totalmente elucidado.

O fator de transcrição NRF2, codificado pelo gene NFE2L2, desempenha um papel crucial como regulador mestre na manutenção da homeostase redox celular em resposta ao estresse oxidativo 7,8. Em circunstâncias normais, o NRF2 é marcado e degradado pelo complexo ubiquitina ligase KEAP1-CUL3. Sob a estimulação do estresse oxidativo ou de substâncias eletrofílicas, a atividade do KEAP1 é inibida, permitindo que o NRF2 se acumule de forma estável e entre no núcleo, exercendo assim o papel de defesa e regulador do núcleo9. No entanto, a ativação excessiva de NRF2 no microambiente tumoral pode aumentar a glicólise e a sobrevivência das células tumorais, interrompendo o acúmulo de ROS e aumentando a resistência apoptótica10,11. Estudos comprovaram que a exposição à sílica pode resultar em ativação anormal da via de sinalização NRF2 12,13. Portanto, o direcionamento do NRF2 pode ser uma estratégia eficaz para intervir na progressão maligna do adenocarcinoma de pulmão induzido pela sílica14.

Este estudo tem como objetivo esclarecer se o inibidor de NRF2 ML385 inibe a progressão maligna do adenocarcinoma de pulmão induzida por sílica, regulando a via do eixo ROS/NRF2-autofagia. Estabelecemos um modelo de camundongo induzido por sílica para reproduzir as principais características da doença e usamos métodos experimentais in vitro para estudar a interação entre macrófagos e células tumorais. Descobrimos que a sílica induziu a expressão de moléculas inflamatórias e imunes e promoveu ainda mais a formação de tumores através da via do eixo ROS/NRF2-autofagia. Quando o inibidor de NRF2 (ML385) foi usado, o efeito promotor da sílica na formação de tumores diminuiu, sugerindo que o inibidor de NRF2 pode desempenhar um papel no tratamento de tumores pulmonares induzidos por sílica.

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Protocolo

Todos os blocos de doadores foram obtidos de amostras patológicas de arquivo coletadas entre 2016 e 2018 no Hospital Popular Huai'an NO.1 Afiliado da Universidade Médica de Nanjing. As amostras foram desidentificadas antes do uso e processadas de acordo com os protocolos aprovados. O comitê de ética do Hospital Popular Afiliado Huai'an No.1 da Universidade Médica de Nanjing, KY-2024-250-01. A criação, descarte e aplicação de camundongos experimentais seguem rigorosamente os Regulamentos sobre a Administração de Animais de Laboratório e as diretrizes internacionais.

Construção de um modelo de camundongo induzido por sílica
Preparação de camundongos e suspensão de sílica: Criar camundongos C57BL/6 machos, de 6 a 8 semanas de idade, em uma sala de animais com temperatura ambiente de 20-25 °C e ciclo de 12 h de luz / 12 h de escuridão. Para preparar a suspensão de pó de silício, 300 mg de pó de pó de silício foram pesados com precisão e suspensos em 10 mL de solução salina estéril 1x tamponada com fosfato. Posteriormente, a mistura foi vigorosamente vórtice e oscilada por 5 min e, em seguida, tratada por ultrassom em uma máquina ultrassônica em banho-maria por 30 min para garantir a dispersão uniforme das partículas e evitar a agregação. A concentração final desta suspensão de reserva é de 30 mg/ml. Esterilize-o em autoclave a 121 °C durante 30 min. Antes de cada uso, é necessário vórtice e agitar novamente por 2-3 min para ressuspender quaisquer partículas sedimentadas.

Os camundongos inalaram suspensão de sílica pelo nariz. A micropipeta foi usada para introduzir lenta e gota a gota a solução na cavidade nasal dos camundongos. Os camundongos foram divididos em 6 grupos com 20 camundongos em cada grupo. O volume de inalação de cada grupo foi de 10 μL, 30 μL, 50 μL, 70 μL, 90 μL e 200 μL, com concentração de 30 mg/mL, uma vez ao dia durante 40 dias consecutivos. Ao perfundir, segure a pele atrás da orelha do mouse com o polegar e o indicador da mão esquerda e fixe o corpo e a cauda do mouse com os outros dedos. Certifique-se de que o camundongo esteja em decúbito dorsal com a cabeça ligeiramente inclinada para trás para permitir que a suspensão seja naturalmente inalada para o trato respiratório. Descobrimos que não houve evento de morte após o segundo dia de inalação de suspensão de sílica de 10 μL, 30 μL, 50 μL e 70 μL em camundongos, enquanto houve um evento de morte após o segundo dia de inalação de suspensão de sílica de 90 μL e 200 μL em camundongos. Portanto, o volume máximo de inalação de sílica em camundongos foi de 70 μL por dia.

Ao manusear sílica cristalina, deve ser realizado em cabine de biossegurança ou capela de exaustão, e máscaras N95, óculos à prova de poeira, luvas de nitrilo e roupas de proteção devem ser usadas durante todo o processo. Ao preparar a suspensão, os movimentos devem ser suaves e uma câmara de pesagem deve ser usada para evitar a geração de aerossóis. Todos os resíduos de contato com sílica devem ser coletados em recipientes lacrados com resistência à perfuração e descartados de acordo com os regulamentos para resíduos químicos perigosos. É estritamente proibido misturá-lo com lixo geral ou despejá-lo no esgoto. Resíduos biológicos, como meio de cultura de células, devem ser coletados em latas de lixo especiais contendo desinfetantes e esterilizados sob alta pressão. As carcaças e tecidos dos animais devem ser colocados em sacos de lixo biológico e esterilizados sob alta pressão para tratamento inofensivo.

Avalie o sucesso do modelo de camundongo induzido por sílica. Avaliar os animais em diferentes momentos após a inalação de sílica, nomeadamente no 3º, 14º e 40º dias. Os camundongos foram colocados em dispositivos profissionais de eutanásia animal e o dióxido de carbono foi introduzido a uma taxa de enchimento de 30% a 50% do volume / min. Eles foram continuamente expostos até pararem de respirar. Após a confirmação da morte, foram realizadas operações subsequentes. O tecido pulmonar foi removido. O tecido pulmonar foi fixado em solução de paraformaldeído a 4% em temperatura ambiente por 48 h. Após a fixação, o tecido foi desidratado com álcool gradiente, transparente com xileno e, em seguida, embebido em parafina. Os cortes contínuos foram feitos usando uma máquina seccionadora de parafina com espessura de 4-5 μm para posterior coloração histológica e análise imuno-histoquímica. O tecido pulmonar não requer tratamento de descalcificação. O exame patológico do tecido pulmonar foi realizado para avaliar a geração bem-sucedida do modelo. Os critérios de sucesso da construção do modelo de silicose foram os seguintes: inflamação pulmonar significativa, fibrose e ocorrência de nódulos de silicose.

Análise da infiltração de células imunes no modelo de camundongo induzido por sílica
Os tecidos pulmonares de camundongos no dia 14 após a inalação de sílica foram corados com marcadores fluorescentes contendo CD3e (proporção de diluição de 1:200), CD8a (taxa de diluição de 1:200), CD86 (proporção de diluição de 1:200), F4/80 (proporção de diluição de 1:200) e Nk1.1 (proporção de diluição de 1:200) para visualizar células imunes. Fixe seções de células ou tecidos e bloqueie com albumina de soro bovino (BSA) a 5% por 1 h para reduzir a ligação inespecífica. Use soro normal da mesma origem da espécie que o anticorpo bloqueador, dilua o soro com PBS na proporção de 1:10 e adicione 100 μL de soro diluído na amostra. Em seguida, bloqueie em temperatura ambiente por 30 min para permitir que o soro bloqueie os anticorpos endógenos. Após a selagem, enxágue suavemente 2x com PBS. Os anticorpos primários contendo CD3e (razão de diluição de 1:200), CD8a (razão de diluição de 1:200), CD86 (razão de diluição de 1:200), F4/80 (razão de diluição de 1:200) e Nk1.1 (razão de diluição de 1:200) foram incubados durante a noite a 4 °C ou em temperatura ambiente por 1-2 h. Após a lavagem com PBS, o anticorpo secundário fluorescente foi adicionado e incubado no escuro por 1 h.

Coloração de Masson e análise imuno-histoquímica
Os cortes de parafina foram desparafinados com xileno e hidratados com álcool gradiente e, em seguida, a recuperação do antígeno foi realizada em tampão citrato de sódio com pH 6,0 por remediação térmica de alta pressão. Para remediação térmica de alta pressão, coloque as fatias de tecido embebidas em tampão de reparo em um forno de micro-ondas em fogo médio por 8-12 min. A atividade da peroxidase endógena foi bloqueada com solução de peróxido de hidrogênio a 3% por 20 min e, em seguida, o local de ligação inespecífico foi bloqueado com BSA a 5% em temperatura ambiente por 30 min. Adicione os anticorpos primários NRF2 (1:200), CDK1 (1:400) e VDAC1 (1:500) e incube durante a noite a 4 °C. Após lavar 3x com PBS, adicione anticorpo secundário anti-coelho de cabra marcado com HRP (1:500) e incube em temperatura ambiente por 1 h. Os cortes de parafina foram submetidos à coloração DAB, contracoloração de hematoxilina, transparência de desidratação e selamento em gel neutro para obter os resultados de imuno-histoquímica molecular correspondentes. Quando o DAB é usado para o desenvolvimento da cor, o desenvolvimento moderado da cor deve ser amarelo acastanhado a marrom acastanhado e o fundo deve ser claro. Tanto o desenvolvimento excessivo (marrom escuro) quanto o insuficiente (amarelo claro) requerem otimização do tempo de desenvolvimento da cor.

O grau de fibrose pulmonar foi analisado semiquantitativamente pelo método de pontuação de Ashcroft15: cortes corados por Masson foram observados em microscópio de aumento de 100x e o tecido pulmonar foi dividido aleatoriamente em 8 regiões. Cada região foi pontuada de acordo com o grau de fibrose (0-8 pontos), sendo a pontuação final a média de todas as regiões: 0 pontos (tecido pulmonar normal), 1-2 pontos (fibrose leve), 3-4 pontos (fibrose moderada), 5-8 pontos (fibrose grave).

Os resultados imuno-histoquímicos foram analisados quantitativamente por meio do software Image. Cinco campos de alta ampliação foram selecionados aleatoriamente, e o valor médio da densidade óptica (MOD) de cada campo foi medido como um indicador do nível de expressão da proteína.

Examinando o impacto da sílica e ML385 na autofagia e ROS em células RAW264.7
As células RAW264.7 e A549 (fornecidas pela Universidade de Ciência e Tecnologia de Anhui) foram cultivadas usando meio DMEM com alto teor de glicose suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS) e 1% de solução de anticorpo biespecífico de penicilina-estreptomicina. As células 1 x 107 foram cultivadas uniformemente em uma incubadora de temperatura constante a 37 °C e 5% de CO2. 5 μL de suspensão de sílica de 30 mg / mL foram adicionados a 1 x 105 células / mL de células RAW264.7. Após incubação por 24 h, as células foram enxaguadas com PBS 3x, e a autofagia e o estresse oxidativo foram detectados por sondas ROS, LC3 e lisossomos. Ao mesmo tempo, o ML38516, um inibidor do NRF2, foi utilizado para inibir a expressão do NRF2 (concentração final de ML385: 5 mM/L). A autofagia e o estresse oxidativo foram detectados de acordo com as etapas experimentais acima. O estresse oxidativo e o fluxo de autofagia dos dois grupos foram analisados estatisticamente.

Análise imuno-histoquímica das expressões de VDAC1, CDK1, p62 e NRF2 em tecido de adenocarcinoma de pulmão
As expressões de VDAC1, CDK1, p62 e NRF2 foram verificadas em 30 pacientes. Tecidos com adenocarcinoma de pulmão e tecidos saudáveis adjacentes foram obtidos do Hospital Popular Huai'an NO.1 da Universidade Médica de Nanjing e foram analisados por imuno-histoquímica (IHC). Os resultados de IHQ e fibrose pulmonar foram analisados estatisticamente. Colete dados do paciente de acordo com as informações do paciente no sistema hospitalar. As etapas experimentais específicas são as seguintes: os cortes de parafina foram desparafinados com xileno e hidratados com álcool gradiente e, em seguida, a remediação do antígeno foi realizada em tampão citrato de sódio com pH 6,0 por remediação térmica de alta pressão. A atividade da peroxidase endógena foi bloqueada com solução de peróxido de hidrogênio a 3% por 20 min e, em seguida, o local de ligação inespecífico foi bloqueado com BSA a 5% em temperatura ambiente por 30 min. Adicione os anticorpos primários NRF2 (1:200), CDK1 (1:400), p62 (1:500) e VDAC1 (1:500) e incube durante a noite a 4 °C. Após lavar 3x com PBS, adicione anticorpo secundário anti-coelho de cabra marcado com HRP (1:500) e incube em temperatura ambiente por 1 h. Desenvolvimento de cor DAB, contracoloração de hematoxilina, transparente desidratado, vedação de goma neutra. Quando o DAB é usado para o desenvolvimento da cor, o desenvolvimento moderado da cor deve ser amarelo acastanhado a marrom acastanhado e o fundo deve ser claro. Tanto o desenvolvimento excessivo (marrom escuro) quanto o insuficiente (amarelo claro) requerem otimização do tempo de desenvolvimento da cor.

Análise de migração e invasão celular
Foi estudado o efeito do ML385 e do sobrenadante da co-incubação de sílica com células RAW264.7 na migração e invasão celular após serem incubadas com a linhagem celular de adenocarcinoma de pulmão A549. O sobrenadante de células RAW264.7 co-cultivadas com sílica por 24 h foi adicionado às células A549. As células foram divididas em grupo sílica, grupo sílica+ML385 e grupo PBS. O grupo sílica: 5 μL de suspensão de sílica de 30 mg/mL foram adicionados a 1 x 105 células/mL de células RAW264.7. Após incubação por 24 h, remova o sobrenadante celular para uso posterior. O grupo sílica + ML385: 5 μL de suspensão de sílica de 30 mg / mL e uma concentração final de 5 mM / L ML385 foram adicionados a 1 x 105 células / mL de células RAW264.7. Após incubação por 24 h, remova o sobrenadante celular para uso posterior. Grupo PBS: 5 μL de PBS foram adicionados a 1 x 105 células/mL de células RAW264.7. Após incubação por 24 h, remova o sobrenadante celular para uso posterior. Durante o ensaio de risco, as células A549 foram semeadas pela primeira vez em placas de 12 poços a uma densidade de 5 x10,5 por poço. Depois que as células cresceram para 95% -100% de fusão, arranhões foram feitos nas células de monocamada usando a ponta de uma pipeta estéril de 200 μL. As células esfoliadas foram suavemente lavadas com PBS. Posteriormente, as condições de cultura foram alteradas para incluir 1% de meio básico de FBS e os sobrenadantes de cada grupo de tratamento para manter a viabilidade celular durante o período experimental de 7 dias. Imagens da mesma posição foram coletadas em microscópio invertido às 0 h (Dia 0) e no 7º Dia (Dia 7) após o arranhão, respectivamente. Finalmente, a área de arranhões foi analisada quantitativamente e a taxa de fechamento de arranhões foi calculada usando o software ImageJ para avaliar o efeito do sobrenadante de diferentes grupos de tratamento na capacidade de migração das células A549.

No ensaio de invasão de poros de tamanho específico, foi utilizada uma câmara de membrana de policarbonato de 8 μm, com a membrana da câmara superior pré-revestida com gel simulando o ambiente extracelular diluído na proporção de 1:8 para construir uma barreira de membrana basal. As células A549 foram ressuspensas em uma suspensão feita pela mistura de meio livre de soro com os sobrenadantes de cada grupo de tratamento na proporção de 1:1 e, em seguida, inoculadas na câmara superior (2 x 104 células por câmara). Na câmara inferior, uma solução feita pela mistura de um meio contendo 20% de FBS com os sobrenadantes dos grupos de tratamento correspondentes (grupo Sílica + ML385, grupo Sílica e grupo PBS) na mesma proporção foi adicionada como atrativo químico. Os sobrenadantes dos grupos de tratamento correspondentes foram coletados por sucção através de uma pipeta em RAW264.7 Fagocitose celular de sílica. Após as células terem sido incubadas continuamente a 37 °C e CO2 a 5% por 7 dias, as células não invasivas da câmara superior foram removidas com cotonetes, e as células que penetraram na membrana e atingiram a câmara inferior foram fixadas com paraformaldeído a 4% e coradas com cristal violeta a 0,1%. Finalmente, o número de células invasivas foi selecionado aleatoriamente a partir de 5 campos de visão por um microscópio óptico.

Análise do impacto da sílica e ML385 na apoptose de células A549 usando citometria de fluxo
Preparação e agrupamento celular: Foram coletadas células A549 tratadas com os sobrenadantes de cada grupo de tratamento (grupo PBS, grupo sílica, grupo sílica + grupo ML385). As células foram lavadas suavemente 2x com PBS pré-resfriado, depois ressuspensas em 1x tampão de ligação, e a densidade celular foi ajustada para 1 x 106 células por tubo/100 μL. Em seguida, 5 μL de anexina V-FITC e 5 μL de solução de coloração PI foram adicionados à suspensão celular, suavemente vórtices para misturar e incubados em temperatura ambiente no escuro por 15 min. Após a incubação, 400 μL de tampão de ligação 1x foram adicionados a cada tubo e imediatamente testados na máquina. A detecção foi realizada usando um citômetro de fluxo. Excitado por um laser de 488 nm, o sinal de fluorescência da Anexina V-FITC foi coletado através do canal FITC, e o sinal de fluorescência do PI foi coletado através do canal PE. Antes do experimento, amostras de coloração única foram usadas para ajuste de compensação de fluorescência para eliminar a sobreposição espectral. Ao realizar a análise de dados, primeiro delineie a população de células-alvo no gráfico de dispersão FSC-A/SSC-A e elimine os fragmentos. Posteriormente, as aderências celulares foram excluídas usando o gráfico de dispersão FSC-H/FSC-A; Finalmente, um portão foi criado para distinguir entre células vivas, células apoptóticas precoces, células apoptóticas / necróticas tardias e células mecanicamente danificadas. Os dados foram obtidos e analisados por meio do software FlowJo V10.

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Resultados

Modelo de rato de sílica
Na Figura 1, os camundongos receberam sílica por via intranasal na dosagem de 30 mg/mL e 70 μL por 40 dias consecutivos, o que garantiu que nenhum evento de morte ocorresse nos camundongos e que o modelo de camundongo de sílica pudesse ser estabelecido com sucesso. Enquanto isso, gavagem de camundongos com PBS foram usados como controles negativos. O objetivo era eliminar a influência da operação e do próprio solvente e garantir que o fenótipo fos...

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Discussão

O adenocarcinoma de pulmão é uma das principais causas de mortes relacionadas ao câncer em todo o mundo, e suas taxas de incidência e mortalidade estão aumentando ano aano17. A sílica é classificada como carcinógena humana de classe 1 pela Agência Internacional de Pesquisa sobre o Câncer, e o risco de adenocarcinoma de pulmão aumenta com a exposição ocupacional cumulativa 18,19,20,21.

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

Obrigado aos membros da equipe por seu apoio e contribuição para este estudo. Este estudo foi apoiado pelo Laboratório Chave de Redução Profunda de Poeira Industrial e Saúde e Segurança Ocupacional dos Institutos de Ensino Superior de Anhui (NO. AYZJSGXLK202202006), Fundo de Introdução de Talentos do Hospital Popular da Nova Área de Xangai Pudong (NO. PRYYH202501).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
BeyoGold TranswellBeyotime Biotechnology FTW067-48lnsTranswell
CD3eBD em Biociências561827FITC Hamster Anti-Mouse CD3e(145-2C11)
CD86BD em Biociências105013CD86
CD8aBD em Biociências100713CD8a
CDK1Abcamab133327Anti-CDK1
Kit de detecção de apoptose celularBeyotime Biotechnology C1062LDetecção de apoptose
DAPIBeyotime Biotechnology P0131-25mlDAPI
Máquina de embeddingP.S.J MEDICALBM450AMáquina de embedding
F4/80BD em Biociências123109F4/80
Desidratador de tecidos totalmente automáticoLeica BiosystemsASP3005Desidratador de tecidos totalmente automático
Lâminas de microscópio de vidroCitotest250124A1Lâminas de microscópio de vidro
H& Corante EBeyotime Biotechnology C0105MH& Corante E
IHC KitBiotecnologia Absinabs996-5mlIHC Kit
Sonda LC3Beyotime Biotechnology C3018MSonda LC3
Lâminas de Microtomo de Perfil BaixoThermo Fisher3052835Lâminas de Microtomo de Perfil Baixo
Sonda do lisossomoBeyotime Biotechnology C1046Sonda do lisossomo
MarcadorDeliSK109Marcador
Corante de masãoBeyotime Biotechnology C0189MCorante de masão
Matrix-GelBeyotime Biotechnology C0371-5mlAdesivo matricial
MicrótomoLeica BiosystemsHistoCore BIOCUTMicrótomo
ML385Abcamab287109Inibidor de NRF2
NK1.1BD em Biociências561117NK1.1
NRF2Abcamab1809YAnti-NRF2
p62Abcamab20735Anti-p62
ParafinaSolarbioYA0012Parafina
Espécies reativas de oxigênio Kit de ensaioBeyotime Biotechnology S0033MSonda ROS
SílicaSigma AldrichS5631Sílica cristalina
VDAC1Abcamab34726Anti-VDAC1

Referências

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