Uma plataforma de ponto de atendimento para detecção simultânea de PCR triplex de infecções por chikungunya, dengue e vírus Zika

Resumo

Este artigo recomenda um sistema integrado totalmente automatizado que emprega tecnologia tripla de PCR para diagnosticar simultaneamente as co-infecções do vírus Chikungunya, Dengue e Zika usando uma única amostra, otimizando assim a eficiência dos testes em laboratórios clínicos e de atenção primária.

Resumo

A febre Chikungunya (CHIKF), uma doença viral aguda transmitida por mosquitos e descoberta pela primeira vez na Tanzânia em 1952, tem apresentado disseminação intermitente na China, com aumento dos surtos locais. Em julho de 2025, a província de Guangdong, atualmente o centro do surto, havia registrado 4.824 casos locais, incluindo quase 3.000 novas infecções em apenas uma semana. Esse aumento rápido cria uma necessidade urgente por tecnologias avançadas de diagnóstico. Essas ferramentas são fundamentais para apoiar os esforços de contenção na linha de frente. Propomos uma solução para a rápida detecção simultânea de infecções por dengue (DENV), chikungunya (CHIKV) e vírus Zika (ZIKV), a fim de aprimorar as capacidades precoces de prevenção e controle da epidemia. Essa abordagem envolve o desenvolvimento de protocolos de teste personalizados para postos de controle de fronteira e instalações de saúde primária.

Métodos diagnósticos tradicionais para CHIKV e DENV frequentemente carecem de sensibilidade/especificidade em casos de coinfecção. Como CHIKV, DENV e ZIKV compartilham padrões e sintomas de transmissão semelhantes, o monitoramento simultâneo é crucial. Este protocolo apresenta um método triplex qPCR usando sondas TaqMan para detectar esses arbovírus em um único tubo em até 90 minutos. Comparado à cultura viral e testes sorológicos, esse método melhora a eficiência ao identificar infecções ativas e coinfecções com alta especificidade, ao mesmo tempo em que simplifica o fluxo de trabalho e elimina requisitos especializados de equipamentos.

A validação com amostras clínicas e de Avaliação de Qualidade Externa (EQA) confirmou 100% de concordância com ensaios singleplex de padrão ouro. Esse método serve como uma ferramenta eficaz para monitorar doenças febris em regiões endêmicas, especialmente em ambientes com recursos limitados, onde a contenção rápida de surtos é crítica.

Introdução

A febre Chikungunya (CHIKF) é uma doença arboviral cada vez mais prevalente, transmitida principalmente pelos mosquitos vetores Aedes aegypti e Aedes albopictus. Caracterizada por surtos recorrentes em regiões tropicais, essa doença se manifesta clinicamente como uma doença febril aguda, frequentemente acompanhada de dores articulares intensas e artrite^{persistente 1}. Em 26 de julho, o total acumulado de casos de chikungunya confirmados em laboratório na cidade de Foshan havia alcançado 4.824, com impressionantes 87,2% desses casos ocorrendo no distrito de Shunde. Essa concentração geográfica pronunciada impõe u....

Protocolo

Este estudo segue as diretrizes éticas estabelecidas pelo Comitê de Ética do Hospital Popular Provincial de Guangdong, Universidade Médica do Sul, Guangzhou, China (aprovação nº: KY2025-510-01). Informações detalhadas sobre os materiais utilizados nesta pesquisa (reagentes, produtos químicos, equipamentos e software) podem ser encontradas na Tabela de Materiais.

1. Seleção de participantes

1. Escolha participantes na faixa etária de 18 a 60 anos.
2. Escolha participantes que apresentam doença febril aguda (testosterona axilar ≥ 38 °C) dentro de 12 dias após o início dos sint....

Resultados

Para validar a estabilidade e precisão do sistema de detecção tripla de PCR, selecionamos cinco amostras clinicamente representativas do nosso laboratório interno e dez amostras externas cegas de EQA para verificação. Essas cinco amostras clínicas representativas incluem casos negativos e positivos (S1-S5), incluindo amostras positivas para CHIKV e DENV, selecionadas para demonstrar a aplicabilidade clínica do ensaio e apoiar a validação interna do desempenho dos testes (Tabela 1). O painel de amostras c.......

Discussão

CHIKV é um vírus de RNA de fita simples e de sentido positivo, classificado dentro do gênero alfavírus da família^{Togaviridae 7}. O aquecimento global acelerado, o comércio internacional intensificado e a expansão das redes turísticas aumentaram coletivamente o risco de exposição humana a ameaças^{arbovirais 8}. Na última década, a rápida evolução do diagnóstico molecular transformou fundamentalmente o cenário do manejo de doenças infecciosas. E.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Extrator automatizado de ácidos nucleicos	DAAN	Smart 32	Para extração de DNA
BECKMAN X-12	BECKMAN	ALA04H01	For  centrifugação sérica
BSC-1500IIA2-X	BIOBASE	SEDA 20143222263	Gabinete de biossegurança
Centrífuga elétrica	WEALTEC		Centrifuge o líquido residual da parede do tubo
Analisador médico de PCR totalmente automático	Bioustar‌	UP0102	Amplificação quantitativa por PCR fluorescente
Kit de detecção de ácidos nucleicos para o vírus chikungunya (método de sonda fluorescente por PCR)	DAAN	20250804	Detecção de  Genes do vírus chikungunya
Kit de detecção de ácidos nucleicos para o vírus da dengue (método de sonda PCR-fluorescente)	DAAN	202504003	Detecção de  Genes do vírus da dengue
Kit de detecção de ácidos nucleicos para vírus da Dengue, vírus Zika e vírus chikungunya (método de sonda fluorescente por PCR)	Bioustar‌	20250724	Detecção de  Vírus da dengue, vírus Zika e vírus chikungunya genes
Kit de detecção de ácidos nucleicos para o vírus Zika (método de sonda fluorescente por PCR)	DAAN	202508041	Detecção do vírus Zika   Genes
Kit de extração de ácidos nucleicos	DAAN		Extrair ácido nucleico
SLAN Sistema de análise médica PCR totalmente automático	HONGSHI		Análise de Dados
Máquina de PCR em tempo real SLAN-96S	HONGSHI	SLAN-96S	Amplificação quantitativa por PCR fluorescente
Freezers de ultrabaixa temperatura (DW-YL450)	MELING	SEDA 20172220091	-20 & deg; C para armazenar reagentes
Vortex-5	Kylin-bell		Para reagente de mistura