Esse protocolo demonstra um método para criar feridas circulares de pele de espessura total em ratos e melhorar sua cicatrização usando um coilpatch de cobre flexível que fornece um campo eletromagnético pulsado.
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Artigo de método
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Esse protocolo demonstra um método para criar feridas circulares de pele de espessura total em ratos e melhorar sua cicatrização usando um coilpatch de cobre flexível que fornece um campo eletromagnético pulsado.
Feridas crônicas e grandes na pele apresentam desafios clínicos significativos devido à cicatrização tardia e alto risco de infecção. A terapia por campo eletromagnético pulsado (PEMF) é uma abordagem não invasiva que pode promover a reparação tecidual. Este estudo descreve um protocolo modelo reprodutível de enrolamento de rato usando um patch flexível de bobina de cobre impresso conectado a um controlador personalizado de PCB para fornecer estimulação PEMF localizada em feridas dorsais de espessura total. A ferida contralateral serviu como controle não tratado. A progressão da cicatrização foi avaliada por meio de fotografias regulares e medições da área da ferida. O protocolo oferece um sistema prático e adaptável para avaliar e otimizar terapias baseadas em PEMF in vivo em diversas condições, com foco na aplicação localizada e ajuste de parâmetros para medicina regenerativa. A seleção dos parâmetros baseou-se em uma tela ortogonal CCK-8 de proliferação de fibroblastos que testou 0,25-1,3 mT, 10-40 Hz e 30-90 min/dia; a análise de efeito principal identificou 1,3 mT, 30 Hz e 60 min/dia como os níveis ideais, adotados para testes in vivo .
Feridas cutâneas crônicas (como úlceras diabéticas) são uma preocupação crescente de saúde, frequentemente levando a cicatrização prejudicada, infecção ouamputação 1. Tratamentos tradicionais podem ser prolongados e caros, o que gera interesse em terapias complementares que possam acelerar a reparação dos tecidos2. A terapia de campos eletromagnéticos é uma dessas abordagens, que é não invasiva e demonstrou efeitos pró-cura tanto em contextos pré-clínicos quanto clínicos 2,3,4,5.
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Todos os procedimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Jiangnan (JN. Nº2025-0630S0360-915[408]). Implementamos o protocolo usando ratos machos SD (6-8 semanas de idade, aproximadamente 200-250 g). Antes da experimentação, os ratos eram alojados individualmente com acesso livre a comida e água, mantidos em um ciclo de 12 horas de luz/escuro, de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório.
1. Criação de feridas excisionais de espessura total
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Neste modelo de ferida de rato de espessura total, a terapia diária com PEMF via um patch flexível resultou em fechamento significativamente mais rápido da bobina em comparação com os controles. Para avaliar rigorosamente o efeito, os ratos foram alocados em três grupos com base no desenho experimental descrito na seção do Protocolo: um grupo controle dentro do sujeito (onde cada rato tinha uma ferida tratada com PEMF e uma ferida contralateral não tratada, dados agrupados para análise),.......
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Passos críticos incluem a criação de feridas simétricas de espessura total, garantir que o remendo da bobina fique plano sobre uma barreira estéril sem folgas e manter uma exposição diária consistente; Desvios podem reduzir a entrega no campo e aumentar a variabilidade nos resultados da cicatrização.
Este trabalho apresenta várias limitações que devem ser consideradas ao interpretar os achados e avaliar o potencial translacional. Primeiro, o protocolo foi demo.......
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Os autores declaram que não possuem conflitos de interesse ou interesses financeiros nos produtos ou dispositivos utilizados neste estudo. O dispositivo PEMF personalizado descrito é para fins de pesquisa e não é comercialmente afiliado.
Agradecemos ao Dr. Zhang pelas discussões perspicazes e ao Dr. Fu pela ajuda com o cuidado animal e a histologia. Esse trabalho foi apoiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento (2022YFC3006200) da China. Os autores também reconhecem a equipe da instalação veterinária da Wuxi School of Medicine, Universidade de Jiangnan, pelo apoio durante os experimentos in vivo .
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Placas de cultura celular de 96 poços | BaiDi | H908002 | Para o ensaio CCK-8 |
| LÂMINAS DE MICROSCÓPIO DE ADESÃO | CITOTESTO | P/N.80312-3161 | Equipamentos para H& Coloração E/Masson |
| Analgésico (Injeção de Cloridrato de Lidocaína) | HUAMU | 70011657 | Analgésico opioide, 4 mg/kg (para controle da dor) |
| Máquina de anestesia | Ciências da Vida RWD (Shenzhen, CN) | R520-ISO | Vaporizador de isoflurano com suprimento de oxigênio |
| Máquina automatizada de coloração imunohistoquímica | Leica | 21.2201 | coloração imunohistoquímica automatizada |
| Punção de biópsia (20 mm) | Integra Miltex | #33-37 | Punção circular de pele, 2 cm de diâmetro |
| Câmera, digital | Huawei Mate 70 Pro | N/A | ≥ 12 MP para imagem de feridas |
| Anticorpo CD31 | Abcam | ab182981 | Marcador endotelial para IHC (Figura 4B) |
| Anticorpo CD34 | Abcam | ab81289 | Marcador endotelial para IHC (Figura 4B) |
| Kit de Contagem de Células-8 (CCK-8) | Biosharp | BS350B | Usado para triagem in vitro dos parâmetros PEMF (OD450) |
| Prato de cultura celular (10 cm) | BaiDi | H802004 | Recipiente de cultura de tecidos de 10 cm (100 mm) para cultura de fibroblastos |
| Meio de cultivo celular (por exemplo, DMEM + FBS) | BaiDi | L100-500 | Para cultura de fibroblastos na triagem CCK-8 |
| Incubadora de CO2 | Termodinâmica | BB150-2TCS-L | Para cultura de fibroblastos |
| Bobina, cobre flexível | Fabricado sob medida (internamente) | N/A | Bobina impressa em espiral (5 cm de diâmetro, poliimida) |
| Placa controladora (gerador PEMF) | Construção personalizada (design interno) | N/A | PCB customizada, aciona a bobina a 30 Hz, ~1,3 mT |
| Aparador elétrico de cabelo | Wahl ou Oster (tosa de pets) | Modelo 9160 | Máquina de tosa animal para raspar pelos |
| Colar elisabetano (roedor) | MukeBio | MK-EC-01 | Prevenir interferência de feridas |
| Estação de Incorporação | Epredia HistoStar | A81000002 | Processamento para histologia (se realizado) |
| Máscara facial | vedeng | V531596 | Mantenha a anestesia |
| Fibroblastos (linhagem celular L929) | Procell | CL-0137 | Células usadas para a triagem de proliferação de CCK-8 |
| Software de simulação por elementos finitos (por exemplo, COMSOL Multiphysics) | COMSOL | CM010004 | Simulação de campo magnético (Figura 5B-C) |
| Tala flexível de alumínio | deargo | 1592 | Suporte para evitar o deslocamento da bobina |
| Pinças | Majestic | 01625 | Para manuseio da pele e curativos durante a cirurgia |
| Hematoxilina & Eosina (H&; E) Unidade automática de tingimento e vedação | DRS-Prisma-P+FILM | 61770249 | Consumível para coloração histológica rotineira |
| Software de análise de imagens | Institutos Nacionais de Saúde | Versão 1.54 | Para medição da área da ferida (por exemplo, ImageJ) |
| Software de análise de imagens | Institutos Nacionais de Saúde | Versão 1.54 | Para medição da área da ferida (por exemplo, ImageJ) |
| Câmara de indução | Ciências da Vida RWD (Shenzhen, CN) | 802-00132-00 | Indução da anestesia por isoflurano |
| Câmera de imagem térmica infravermelha | HIKMICRO | H11 | Monitore a temperatura da superfície da bobina (Figura 5A) |
| Desinfetante de Povidona de Iodo 10% | HYNAUT | N/A | Antisséptico de pele (iodóforo) |
| Isoflurano | Ciências da Vida RWD (Shenzhen, CN) | 20037015 | Anestésico inalável (grau USP) |
| Injeção de Lidocaína 10% | SANMA | N/A | Para analgesia pós-operatória |
| Kit de coloração tricroma da Masson | BASO | C250202 | Consumível para visualização de colágeno/ECM |
| Marcador e Régua Médica de Pele | Tondaus | N/A | Incluir escala em fotografias de feridas |
| Leitor de microplacas | Termodinâmica | A51119500C | Para medição OD450 no ensaio CCK-8 |
| Microtome | Epredia HM 340E | 23900670 | Cesariana para histologia/IHC (se realizada) |
| Fixador tecidual de poliformaldeído | compartilhar-bio | SB-C009 | Fixação de amostras de tecido animal |
| Gaiola de abrigo para ratos | FengQiao | CP-JM | Gaiola padrão para alojamento individual de ratos. |
| Rats, Sprague Dawley (masculino, 6– 8 semanas) | WeiJingyu SUZHOU | SCXK2024-0004 | 200– 250 g; alojados individualmente; Uso aprovado pela IACUC |
| Bisturi | Jinhuan | 35W0602 | Para criação de feridas excisionais |
| Revestimento semipermeável de filme | ZD | Q20189 | Barreira alternativa de feridas |
| Software de análise estatística (por exemplo, GraphPad Prism ou R) | Software Mackeiv | 10.6.9(890) | ANOVA bidirecional e comparações múltiplas post hoc |
| Gaze estéril | ZD | 3141626 | Curativo/barreira protetora de feridas |
| Cortinas cirúrgicas estéreis | ZD | V271617 | Cobrir o campo cirúrgico após o preparo da pele |
| Tesoura cirúrgica | Majestic | 01627 | Para criação de feridas excisionais |
| Seringas e agulhas | MINANK | 20193141643 | Para administração de analgésicos subcutâneos |
| Scanner de lâmina inteira | 3DHISTECH | N/A | Escaneamento digital de slides |
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