Artigo de método

Ensaio de Assassinato em Série Usando Medição de Viabilidade de Células Tumorais Baseada em Impedância Longitudinal - Um Método Útil para Avaliar o Desempenho das Células T

DOI:

10.3791/69623

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30 de dezembro de 2025

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1Division of Clinical Pharmacology, LMU University Hospital, 2Department of General, Visceral and Transplantation Surgery, LMU University Hospital, 3German Cancer Consortium (DKTK), Partner Site Munich, a partnership between the DKFZ and the University Hospital of the LMU, 4German Center for Lung Research (DZL), 5Einheit für Klinische Pharmakologie (EKLiP), Helmholtz Zentrum München - German Research Center for Environmental Health Neuherberg

Neste artigo

Resumo

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Este protocolo apresenta um ensaio em tempo real baseado em impedância para quantificar a capacidade e persistência de morte serial das células CAR T sob estimulação crônica de antígenos, incorporando um método de lavagem de placas para reutilização econômica das placas de ensaio.

Resumo

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A terapia celular com receptor de antígeno quimérico (CAR) revolucionou o tratamento de malignidades hematológicas específicas. No entanto, uma parcela significativa dos pacientes apresenta recaídas devido à perda de antígenos, regulação para baixo do antígeno ou exaustão das células T. Esses desafios destacam a necessidade de ensaios funcionais que possam avaliar a capacidade de matar e a persistência das células CAR T sob estimulação crônica de antígenos. Ensaios de assassinato em série, que medem a capacidade das células T CAR de eliminar repetidamente alvos tumorais, oferecem insights valiosos sobre a durabilidade e potência das respostas das células T CAR.

Aqui, apresentamos um ensaio baseado em impedância usando o sistema de Análise de Células em Tempo Real (RTCA) para quantificar a morte em série mediada por células CAR T in vitro. As células tumorais são repetidamente semeadas e permitidas aderir às placas E específicas do ensaio antes da adição das células CAR T em razões definidas entre efetor e alvo (E:T). A plataforma monitora continuamente a viabilidade das células tumorais sem marcadores, capturando citotoxicidade dinâmica com alta resolução temporal. As leituras do núcleo incluem cinética do Índice Celular (CI), taxa de eliminação de células tumorais e eliminação do tempo até o alvo. O declínio progressivo na capacidade de matar observado em repetidos engajamentos tumor-alvo serve como marcador da disfunção adquirida das células T CAR, frequentemente chamada de exaustão das células T. Juntas, essas métricas permitem uma avaliação precisa da função das células T CAR em várias razões E:T e possibilitam a comparação direta entre diferentes construções ou co-tratamentos das células CAR T ao longo do tempo.

Para aumentar a eficiência de custos, desenvolvemos um procedimento de lavagem de placas que permite a reutilização das placas E-plate do ensaio sem comprometer o desempenho ou a integridade dos dados. O fluxo de trabalho otimizado reduz o custo do ensaio enquanto preserva a robustez analítica. Essa abordagem permite uma avaliação pré-clínica acessível e escalável da função das células CAR T, facilitando melhorias no design da terapia celular.

Introdução

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A terapia com receptor de antígeno quimérico (CAR) com células T revolucionou a imunoterapia contra o câncer com notável sucesso clínico em múltiplas malignidades hematológicas, como leucemia linfoide crônica, leucemia linfoblástica aguda, linfoma de células B grandes e mieloma múltiplo 1,2,3,4,5. Desde as primeiras aprovações regulatórias, o número de produtos de células CAR T e pacientes tratados aumentou de formaconstante, 6. Dependendo do produto específico e da indicação clínica, as doses típicas de infusão variam de aproximadamente 2 × 106a 5 × 108células CAR+ T porpaciente 7. Doses altas de infusão são necessárias para alcançar uma eliminação eficaz do tumor e controle a longo prazo da doença, mas estão associadas a desafios clínicos e práticos. Números celulares elevados podem aumentar o risco de efeitos colaterais graves como síndrome de liberação de citocinas (CRS) e síndrome de neurotoxicidade associada a células efetorais imunes (ICANS), ambas dependentes dadose 8. Além disso, fabricar um número suficiente de células T CAR funcionais é desafiador para pacientes fortemente pré-tratados ou linfodepletos, e o processo pode ser logisticamente exigente e caro para centrosde tratamento 9.

Apesar desses desafios, as terapias com células CAR T direcionadas ao CD19 alcançam taxas de remissão completa de 70% a 90% em pacientes com malignidades recaídas ou refratárias de células B, demonstrando um impacto clínico transformador 10,11,12. No entanto, a terapia com células CAR T enfrenta desafios relevantes que limitam sua eficácia a longo prazo. Os principais obstáculos incluem perda ou redução de antígeno, persistência insuficiente das células CAR T e exaustãofuncional 9. O cansaço das células T CAR – caracterizado por diminuição da capacidade proliferativa, diminuição da atividade antitumoral e baixa persistência – representa uma causa vital de não resposta e recaída13. Células CAR T exaustas apresentam função efetora reduzida, expressão persistente de receptores inibitórios e produção defeituosa de citocinas devido à exposição crônica de antígenos e microambientes tumoraisimunossupressores 14. Estudos clínicos demonstraram que a perda da persistência funcional das células CAR T está associada a um risco aumentado de recaída 11,15,16,17. Como a atividade in vivo prolongada parece ser um dos principais preditores de sucesso terapêutico, compreender a durabilidade e a capacidade sustentada de matar dos produtos de células CAR T é um objetivo importante tanto na pesquisa pré-clínica quanto na translacional. De particular interesse é a capacidade das células T CAR de reconhecer e lisar repetidamente células tumorais por períodos prolongados – o chamado 'assassinato em série' – pois essa propriedade fornece uma medida funcional de persistência e resistência aocansaço 18.

Este artigo fornece um protocolo detalhado para realizar ensaios de assassinato em série utilizando a plataforma de impedância de Análise de Células em Tempo Real xCELLigence (RTCA), incluindo um procedimento opcional de lavagem que permite o reuso de placas de ensaio, também chamadas de placas E, melhorando assim a eficiência de custo sem comprometer o desempenho do ensaio. A justificativa para o desenvolvimento de tal protocolo surge das limitações nos ensaios convencionais de citotoxicidade, que normalmente oferecem apenas leituras estáticas de endpoints. Abordagens comuns, como liberação de cromo-51, ensaios de lactato desidrogenase (LDH) ou ensaios de viabilidade baseados em citometria de fluxo, exigem rótulos, envolvem fluxos de trabalho intensivos e são limitadas a pontos de tempodefinidos 18,19. Mais importante ainda, eles não conseguem capturar facilmente a cinética dinâmica de execução durante estimulação prolongada ou múltiplas rodadas de exposição ao antígeno, situação diretamente ligada à persistência das células CAR T e ao exaustãofuncional 18.

A plataforma xCELLigence RTCA preenche essas lacunas fornecendo monitoramento cinético, em tempo real, sem rótulos, da viabilidade da célula-alvo via impedânciaelétrica 20. Células-alvo tumorais aderentes são semeadas em placas E revestidas de microeletrodos de ouro, onde sua fixação e proliferação aumentam a impedância medida, reportada como Índice Celular (IC)21. Após a morte mediada por CAR T, as células-alvo são mortas e se destacam, levando a uma rápida queda naimpedância 20. Essa leitura em tempo real permite uma avaliação contínua da citotoxicidade por horas ou dias, sem a necessidade de rótulos ou reagentesadicionais 22. As células T CAR, por não aderir, não contribuem para o sinal de impedância, permitindo uma separação limpa das leituras do efetor e doalvo 23. Como os dados são registrados continuamente, os pesquisadores podem realizar protocolos de estimulação em múltiplas rodadas, onde as células CAR T são repetidamente transferidas e expostas a células-alvo tumorais frescas, permitindo a medição direta de como a capacidade de matar evolui ao longo dotempo 24. Isso imita os encontros repetidos de antígeno que as células CAR T experimentam in vivo e fornece uma leitura funcional de suas capacidades citotóxicas.

Este ensaio de assassinato serial baseado em impedância é ideal para pesquisadores que avaliam a função das células CAR T em ambientes pré-clínicos, incluindo otimização de construtos, comparações funcionais e testes de potência. Esse protocolo requer o sistema xCELLigence RTCA e o uso do E-Plate 96. Embora seja amplamente aplicável a modelos tumorais aderentes, não é diretamente adequado para culturas em suspensão sem estratégias de imobilização ou amarração. Como as medições de impedância refletem apenas a adesão e viabilidade da célula-alvo, análises complementares como citometria de fluxo ou ensaios de citocinas são recomendadas para caracterizar completamente a ativação, proliferação e dinâmica de exaustão das células T CAR. O protocolo inclui etapas designadas que permitem a colheita de células e supernadantes para essas leituras adicionais, possibilitando uma avaliação mais abrangente da funcionalidade das células CAR T.

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Protocolo

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NOTA: Este protocolo foi otimizado para o E-Plate 96 e requer o sistema xCELLigence RTCA. As células tumorais aderentes são semeadas durante a noite antes para alcançar a fase de crescimento logarítmico no momento da adição das células CAR T. Dependendo da linha celular tumoral e da densidade de semente, esse intervalo pode ser reduzido para 6 a 9 horas, permitindo a adição de efetores no mesmo dia. Se esse último fluxo de trabalho for realizado, o cronograma nominal diário descrito no protocolo é alterado, e os usuários devem adaptar o cronograma de acordo. Coculturas são mantidas por 48 horas antes que as células CAR T sejam transferidas para células tumorais recém-placadas, exigindo duas posições de placas no instrumento xCELLigence e alternância entre placagem e adição de efetor a cada dois dias. As células T CAR devem ser geradas de acordo com SOPs institucionais ou protocolos estabelecidos. Resumidamente, as células T do sangue periférico são isoladas sob padrões éticos aprovados, transduzidas sob condições adequadas de biossegurança e avaliadas quanto à eficiência e viabilidade da transdução por citometria de fluxo ou ensaios equivalentes de QC. Ensaios xCELLigence não devem ser realizados quando a eficiência da transdução CAR está abaixo de 20%, pois eficiências menores podem levar a um aumento da morte de fundo e inespecífica por células não transduzidas, o que pode distorcer as curvas de crescimento tumoral. Todo manuseio celular deve ser realizado em condições estéreis em um exaustor de fluxo laminar. A mídia pode ser usada conforme o padrão do laboratório ou conforme recomendado pelo fornecedor. Salvo especificação em contrário, as células são incubadas a 37 °C em uma atmosfera umidificada contendo 5% de CO₂. Embora otimizado para células CAR T, esse método também pode ser aplicado a outras células efetoras baseadas em suspensão e alvos aderentes.

1. Preparação e blanking (Dia 1)

  1. Preparação de placas
    1. Adicione 50 μL de meio tumoral ao fundo de cada poço da placa E 96.
      NOTA: Tenha cuidado para não arranhar o fundo do poço, pois isso pode danificar a placa.
    2. Coloque a placa E na incubadora, posicionando-a na mesma máquina para ser usada nas medições.
    3. Incube a E-Plate por 30 minutos a 37 °C para trazê-la à temperatura e ao pH adequados para o ensaio.
  2. Configuração do instrumento
    1. Enquanto isso, inicie o RTCA Software Pro (Versão 2.6.1) e selecione um caminho de arquivo para salvar o experimento.
    2. Insira o nome do experimento no campo "Operador RTCA" e salve.
    3. Selecione os poços a serem medidos.
    4. Atribua nomes de células na aba Células e tipos de tratamento na aba Tratamento .
  3. Cronograma de medições
    1. Configure a programação com os seguintes passos:
      Nome do Passo = Em branco ; Varreduras = 1 ; Intervalo = 1 ; Duração = 0:00
      Nome do Passo = Células Tumorais ; Varreduras = 250-300 ; Intervalo = 15 min; Duração = mínimo 24 h
      Nome do Passo = Tratamento ; Varreduras = até 2500 ; Intervalo = 5 min; Duração = mínimo 72 h
    2. Pressione Aplicar e certifique-se de que Auto não está selecionado para nenhuma etapa.
  4. Etapa de apagamento
    1. Após a incubação de 30 minutos da E-Plate a 37 °C, pressione o botão PLAY/RUN para iniciar o passo em branco.
    2. Espere até o software marcar o passo como CONCLUÍDO (aprox. 1-2 minutos).
    3. Destrave o berço e remova a placa E somente quando estiver pronto para prosseguir com a semeadura das células.

2. Rodada 1: Semeadura de células tumorais (Dia 1)

  1. Semear células tumorais
    1. Prepare uma suspensão de células tumorais em 50 μL de meio apropriado por poço.
    2. Remova a placa E da incubadora e seme as células em triplicados.
  2. Medição inicial
    1. Imediatamente retorne a placa E à máquina e tranque o berço.
    2. Espere de 5 a 10 minutos antes da primeira medição para equilibrar a temperatura e o pH da placa E, então clique no botão PLAY/RUN para iniciar a medição (Passo 2 do cronograma = Células Tumorais).
    3. Incube a placa E durante a noite para permitir a adesão celular. Monitore o Índice Celular (IC) não normalizado. Quando o IC entra na fase de crescimento logarítmico, prossiga para a próxima etapa. Essa fase depende da linhagem celular utilizada e pode ser influenciada pelo número de células semeadas. Células BxPC3 (ATCC CRL-1687) foram semeadas em 20.000 células por poço, com crescimento em fase logarítmica tipicamente alcançado após 6-18 horas.

3. Rodada 1: Tratamento com células CAR T (Dia 2)

  1. Preparação e semeadura de células T
    1. Prepare o número necessário de células T CAR em 100 μL/poço em meio de células T humanas sem citocinas de expansão (por exemplo, IL-2, IL-7, IL-15 etc.).
      NOTA: A eficiência da transdução do CAR é medida uma vez no início do experimento. A razão efetor-alvo desejada (E:T) é definida de acordo com o número de células T CAR⁺ em relação às células tumorais inicialmente placadas. Por exemplo, para uma razão E:T de 1:1 com 50% de células T CAR⁺ e 20.000 células tumorais BxPC3, 40.000 células T no total deveriam estar placadas. A razão E:T, portanto, refere-se à condição inicial no início do ensaio de assassinato em série; a menos que medições adicionais sejam realizadas, mudanças no E:T durante rodadas posteriores permanecem desconhecidas. Mudanças na proliferação ou sobrevivência das células T ao longo do tempo, e portanto na razão E:T, são consideradas parte da leitura de assassinato em série. Se as células T forem divididas entre rodadas, o E:T é recalculado proporcionalmente (por exemplo, uma divisão 1:1 após a rodada 3 reduz um E:T inicial 2:1 para 1:1 na rodada 4). Se a dinâmica E:T entre rodadas for de interesse, poços adicionais opcionais podem ser revestidos para medições intermediárias de CAR % ou função efetor. Remover as esferas de estimulação anti-CD3/CD28 das células T por separação magnética pode ajudar a reduzir a morte inespecífica. Também é recomendado o uso de células T na fase de crescimento logarítmico (tipicamente entre 5 e 20 dias após a estimulação) e expandir as células com citocinas pelo menos dois dias antes do ensaio, em vez do dia anterior.
    2. Ajuste a eficiência da transdução da CAR entre grupos experimentais até a menor porcentagem comum misturando com células T não transduzidas, com base na análise de eficiência da transdução.
      NOTA: Se todos os grupos tiverem eficiência de transdução igual, não é necessário ajuste. Se as porcentagens de CAR⁺ diferirem, o número de células T a placar é calculado de modo que cada grupo comece com o mesmo número efetivo de células CAR⁺ e células CAR. Isso é feito multiplicando o número desejado de células CAR⁺ (com base na razão E:T e na semeadura tumoral) por 100 e dividindo pelo percentual de CAR⁺ medido para cada grupo, depois adicionando células T não transduzidas, se necessário, para igualar o número total de células T. Por exemplo, se um grupo tem 50% de células T CAR⁺, 40.000 células T são placadas (20.000 CAR⁺ + 20.000 CAR-), enquanto um grupo com 60% de células T CAR⁺ placaria 33.333 células T para fornecer 20.000 células CAR⁺, adicionando 6.667 células T não transduzidas para igualar o número total de células T do primeiro grupo (total de 40.000).
    3. Opcionalmente, se o tratamento com citocinas ou compostos for investigado, adicione 20 μL de uma solução composta por meio de células T humanas e a citocina ou composto desejado a 11 vezes a concentração final pretendida. Esse volume é adicionado aos 200 μL padrão já presentes em cada poço (50 μL para apagamento, 50 μL para semeadura de células tumorais e até 100 μL para adição de células T). Segundo o fabricante, a E-Plate 96 suporta um volume máximo de 243 μL ± 5 μL por poço, tornando um volume total de 220 μL aceitável para tais tratamentos opcionais.
  2. Semeadura e medição de células T
    1. Remova a placa E destravando o suporte somente quando estiver pronto para adicionar células T.
    2. A semente preparou células T diretamente sobre as células tumorais.
    3. Trave o suporte dentro do dispositivo de medição e aborte a Etapa 2 no software RTCA.
      NOTA: Se a etapa 2 não for abortada, o sistema continuará a medir a etapa anterior e só parará quando essa etapa for concluída, o que resultará na perda de pontos de dados.
    4. Espere o Passo 2 ser marcado como CONCLUÍDO.
    5. Clique no botão PLAY/RUN para iniciar a etapa 3 (Tratamento) e confirme o prompt clicando em OK.
      NOTA: Permitir um período de equilíbrio de 15-30 minutos após o manuseio (por exemplo, após semear ou transferir células) antes de iniciar a próxima etapa de medição (antes da etapa 3.2.5) ajuda a minimizar a deflexão inicial causada por flutuações de temperatura ou pH nas curvas de crescimento.

4. Rodada 2: Semeadura de células tumorais (Dia 3)

  1. Prepare uma nova placa E xCELLigence de 96 poços, conforme descrito nos passos 1.1 e 1.4.
  2. Células tumorais frescas de semente conforme descrito na etapa 2.
  3. Incube a placa E durante a noite para permitir a adesão celular.

5. Rodada 2: Transferência de célula T CAR para a segunda placa E (Dia 4)

  1. Transfira o conteúdo de cada poço para um poço correspondente de uma placa de 96 poços no fundo em U usando uma pipeta multicanal. Tenha cuidado para não tocar nos eletrodos na parte inferior da placa E.
  2. Centrifuge em temperatura ambiente, 400 × g por 5 minutos.
  3. Aspire cuidadosamente o sobrenadante e o retenha para o ensaio imunossorvente ligado a enzimas (ELISA), se necessário.
  4. Resuspenda o pellet celular em 100 μL de meio fresco sem citocinas de expansão.
    NOTA (opcional): Células T agora podem ser divididas (por exemplo, 50 μL = 1:2) e usadas para análises adicionais, como citometria de fluxo. A divisão das células T ajusta para sua proliferação durante o ensaio de morte por xCELLigence. Isso ajuda a reduzir o número necessário de ciclos até que o cansaço se torne aparente. É recomendado testar as proporções de divisão entre 2 e 4.
  5. Adicione 100 μL/células T poço à placa E tumoral da segunda rodada (50 μL se dividido 1:2), garantindo que o meio e, se aplicável, citocina/composto estejam totalmente reabastecidos.

   

6. Continuação do ensaio de assassinato em série (Dias 5 - 10 e além)

  1. Repita os Passos 4 e 5 para rodadas adicionais de matar conforme necessário, com intervalos de 48 horas.
  2. Monitore a atividade de eliminação e a persistência das células T em cada estágio usando leituras de xCELLigence e ensaios suplementares, como ELISA ou citometria de fluxo.

7. Coleta de dados e manuseio com placas E-plate

  1. Após a duração desejada da medição, pressione STOP no software.
  2. Exporte dados normalizados até o ponto de tempo da adição efetor-célula e não sejam mediados para permitir uma média precisa ± gráficos SEM no software de análise (R, GraphPad Prism, etc.). Exporte o conjunto de dados médio, se desejar.
  3. Destrave e remova a placa E. Libere o experimento no software.
  4. Limpe ou armazene a placa E na incubadora para análises adicionais (por exemplo, sobrenadante para ELISA ou colheita celular para citometria de fluxo).

8. Opcional: lavagem com pratos eletrônicos para reutilização

NOTA: Esta etapa opcional permite o reuso das placas E xCELLigence para reduzir custos experimentais. O reuso só é recomendado se as propriedades elétricas da placa E permanecerem estáveis durante os experimentos e até que os poços individuais estejam dentro da faixa de linha base aceitável. Siga todos os procedimentos de segurança, especialmente ao manusear hidróxido de sódio (NaOH). Inspecione visualmente as placas E após a lavagem para detectar possíveis falhas nos eletrodos.

  1. Descarte todo o conteúdo da placa E sem tocar na parte inferior da placa E.
  2. Lave cada poço três vezes com água desionizada de 200 μL.
  3. Adicione 200 μL de 0,1 M NaOH a cada poço.
    ATENÇÃO: NaOH é corrosivo. Garanta que as diretrizes locais de segurança sejam seguidas. Use luvas, casaco e óculos de proteção. Manuseie 1 M NaOH em um armário de segurança. Descarte os resíduos de NaOH na pia com água correndo para garantir a diluição adequada. Nunca misture ácidos e bases concentrados. Não adicione água ao ácido; Apenas ácido para água.
  4. Incube a placa E em temperatura ambiente por 5 minutos.
  5. Lave cada poço pelo menos três vezes com água desionizada, garantindo que todo o NaOH residual seja removido.
  6. Seque a placa E batendo suavemente em um lenço, seguida de secagem ao ar.
  7. Esterilize a placa E sob luz UV dentro de um gabinete de biossegurança por pelo menos 1 hora ou um dispositivo de irradiação UV.
    NOTA: Posicione a placa E de modo que os poços fiquem voltados diretamente para cima. A luz UV não penetra no fundo plástico dos poços.

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Resultados

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A execução bem-sucedida do protocolo gera leituras reprodutíveis baseadas em impedância que refletem a viabilidade das células tumorais e a citotoxicidade das células CAR T ao longo do tempo. O crescimento celular e a citotoxicidade foram avaliados usando o sistema RTCA comercial. Os dados foram expressos como índice celular normalizado (NCI), calculado dividindo o IC em cada ponto temporal pelo IC em um tempo de normalização selecionado. O tempo de normalização é definido imediatamente antes da adição das células efetor...

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Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Este protocolo descreve um método para avaliar a citotoxicidade mediada por células CAR T em múltiplas rodadas de exposição ao antígeno, utilizando a plataforma xCELLigence RTCA. Ao permitir a medição longitudinal da viabilidade das células tumorais via impedância, essa abordagem captura respostas citotóxicas repetitivas – chamadas de assassinato em série – em um formato contínuo e sem rótulos. O protocolo foi desenvolvido para monitorar como a função dos efetores das células T muda ao l...

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Divulgações

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A SK recebeu honrarias da Plectonic, TCR2 Inc., Miltenyi, Galápagos, Cymab, Novartis, Regeneron, BMS e GSK. SK é inventor de várias patentes no campo da imunooncologia. A SK recebeu taxas de licença da TCR2 Inc e da Carina Biotech. A SK recebeu apoio de pesquisa da TCR2 Inc., Tabby Therapeutics, Catalym GmbH, Plectonic GmbH e Arcus Bioscience para trabalhos não relacionados ao manuscrito. Todos os outros autores declaram não haver interesses concorrentes.

Agradecimentos

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TT, SM e NTTN receberam bolsas da Else-Kröner Fresenius Stiftung (IOLIN). A NTTN recebeu subsídios adicionais da Friedrich-Baur-Stiftung e da German Cancer Aid (AvantCAR.de). O MPT conta com o apoio da Fundação Monika Kutzner e do Conselho Europeu de Pesquisa (MSCA Fellowship 101106951). A SK é apoiada pelo programa internacional de doutorado 'i-Target: imunotargeting do câncer' (financiado pela Rede de Elite da Baviera), pelo Centro de Pesquisa do Câncer da Baviera (BZKF) (TANGO to S.K.), pela Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, número da bolsa: KO5055-2-1 e KO5055/3-1), pela Melanoma Research Alliance (bolsa número 409510), pela Rede de Treinamento Marie Sklodowska-Curie para Otimização da Terapia Adotiva com Células T do Câncer (financiada pelo programa Horizon 2020 da União Europeia; bolsa 955575). Rede de Treinamento Marie Sklodowska-Curie para rastreamento e controle de células imunes terapêuticas em câncer (financiada pelo Programa Horizon da UE, bolsa 101168810), Else Kröner-Fresenius-Stiftung (IOLIN), Ajuda Alemã ao Câncer (AvantCAR.de), Wilhelm-Sander-Stiftung, Ernst Jung Stiftung, Estratégia Institucional LMUexcellent da LMU Munique (no âmbito da Iniciativa Alemã de Excelência), a Go-Bio-Initiative, o prêmio m4 do Ministério da Baviera para Assuntos Econômicos, Bundesministerium für Bildung und Forschung, o Programa EUROSTAR, Conselho Europeu de Pesquisa (Starting Grant 756017, PoC Grant 101100460 e CoG 101124203), pela SFB-TRR 338/1 2021-452881907, Fundação Fritz-Bender, Deutsche José Carreras Leukämie Stiftung, Fundação Hector, Fundação Bávara de Pesquisa (BAYCELLATOR), Fundação Monika-Kutzner, Fundação Bruno e Helene Jöster (360° CAR), Fundação Dr. Rurainski e Fundação Brigitte e Dr. Konstanze Wegener

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
BxPC3ATCCCRL-1687
E-Plate 96Agilent 300600910
RTCA software Pro (Básico) Agilent N/AVersão 2.6.1
xCELLigence RTCA MP - (Múltiplas Placas)Agilent N/A

Referências

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