Gavage Oral em Filhotes de Camundongos Neonatais e Avaliação Funcional da Integridade da Barreira Intestinal Usando Câmaras de Uso

Louis Berthet; Camille Tardiveau; Maryline Roy; Emilie Viennois

doi:10.3791/69751

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Artigo de método

Gavage Oral em Filhotes de Camundongos Neonatais e Avaliação Funcional da Integridade da Barreira Intestinal Usando Câmaras de Uso

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DOI:

10.3791/69751

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9 de janeiro de 2026

Louis Berthet¹ , Camille Tardiveau¹ , Maryline Roy¹ , Emilie Viennois¹^,²

¹INSERM U1149, Center of Research on Inflammation, Université Paris Cité, ²CHRU Nancy, IHU Infiny

Neste artigo

Resumo

Este artigo descreve: (1) entrega oral por gavage de moléculas de teste para camundongos neonatais já no DOL 6; e (2) avaliação ex vivo da função da barreira epitelial do cólon em biópsias desde filhotes DOL 10 até desmame (DOL 20), avaliando a permeabilidade paracelular e transcelular com câmaras de Ussing.

Resumo

Evidências crescentes ressaltam a importância dos primeiros 1.000 dias de vida na formação do eixo intestino-microbioma. Essa janela de vida inicial é fundamental para o estabelecimento de trajetórias fisiológicas de longo prazo e adaptações imunológicas, potencialmente influenciando a suscetibilidade a doenças ligadas à disbiose e à disfunção da barreira. Uma compreensão mais profunda dos mecanismos subjacentes exige uma avaliação abrangente dos principais parâmetros fisiológicos, incluindo a permeabilidade paracelular e transcelular do intestino neonatal. Avaliar esses parâmetros é essencial para elucidar como exposições precoces a moléculas exógenas podem influenciar a integridade intestinal e os resultados de saúde a longo prazo. Portanto, a primeira parte deste artigo descreve a administração oral de moléculas de interesse em filhotes de camundongos já no dia da vida, minimizando o estresse, o risco de lesão e o canibalismo. Agulhas de alimentação lubrificadas e de ponta arredondada de 24 g são usadas para gavage filhotes de camundongos com no mínimo 2,5 g. A segunda parte descreve a avaliação ex vivo da permeabilidade paracelular e transcelular usando ensaios em câmara de Ussing em amostras de cólon de filhotes entre DOL-10 e desmame. Deslizadores sem pinos adaptados para pequenas biópsias são usados em combinação com câmaras de Ussing para montar amostras de cólon neonatal. A sonda paracelular FITC-Dextran 4 kDa e o marcador transcelular peroxidase de raiz-forte 44 kDa Tipo VI são adicionados ao compartimento apical do sistema no início do ensaio. Amostras são coletadas no compartimento basolateral em 0 min, 30 min, 60 min, 90 min e 120 min para quantificar a passagem da sonda. A passagem de ambos os marcadores é quantificada diretamente (FITC) e indiretamente (HRP) por um leitor de placas, calculada usando curvas padrão e expressa como fluxo.

Introdução

A integridade da barreira intestinal desempenha um papel fundamental na manutenção da saúde geral, coordenando a resposta imune mucosa e regulando a permeabilidade seletiva do epitélio intestinal. Esse sistema de barreira controla a passagem de nutrientes enquanto impede a translocação de patógenos, antígenos e toxinas para a circulação^{sistêmica 1}. A ruptura crônica dessa interface, associada ao aumento da permeabilidade intestinal, comumente chamada de "intestino permeável", é agora identificada não apenas como consequência, mas também como um fator que impulsiona estados inflamatórios crônicos e uma série de ....