Artigo de investigação

Eletroacupuntura Orquestra a Remodelação da Flora Intestinal: Um Avanço para o Alívio da Vasculopatia Induzida por Alto Nível de Sal

DOI:

10.3791/69783

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13 de janeiro de 2026

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1Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este estudo investigou o efeito da eletroacupuntura (EA) na disfunção vascular induzida por alto teor de sal. A EA reverteu danos vasculares e disbiose intestinal, possivelmente modulando microrganismos intestinais específicos.

Resumo

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Este estudo tem como objetivo investigar o potencial terapêutico e os mecanismos da eletroacupuntura (EA) no alívio da disfunção vascular causada por dietas ricas em sal, com foco na modulação da microbiota intestinal. Dividimos aleatoriamente 21 ratos em grupos Controle Normal, Modelo de Alto Sal e Intervenção EA (n = 7 por grupo). O modelo de "síndrome de estase sanguínea com alto sal" em ratos Wistar foi induzido por perfusão intragástrica de 12% de NaCl. Os tratamentos foram realizados entre 17h00 e 19h00, horário de Pequim: ratos foram imobilizados com um pano macio, seguidos por estimulação EA de 20 minutos em BL23 e KI3. Após o experimento, foram coletados sangue de rato, vasos sanguíneos e amostras fecais. Os efeitos vasculares foram avaliados por meio de teste de função coagulante, análise hemoralógica e avaliação histopatológica arterial. O sequenciamento de rDNA 16S foi usado para analisar as mudanças de composição e abundância da microbiota intestinal. Os achados revelaram que a ingestão crônica de sal prejudicava a viscosidade do sangue, danificava a integridade endotelial vascular e causava disbiose microbiana intestinal. Notavelmente, o tratamento com EA reverteu efetivamente essas mudanças patológicas. A análise de correlação identificou ainda microbiotas intestinais específicos (por exemplo, Lachnospiraceae e Ruminococcaceae) que se correlacionavam fortemente com parâmetros alterados da viscosidade sanguínea (P < 0,05). Portanto, o presente estudo conclui que a vasculopatia induzida por dieta rica em sal pode ser revertida pelo tratamento com EA, o que pode ser atribuído à capacidade do EA de regular a microbiota intestinal envolvida no metabolismo dos ácidos biliares e na síntese de ácidos graxos de cadeia curta.

Introdução

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O sal alimentar desempenha um papel crucial na manutenção do equilíbrio de fluidos e na homeostase celular, mas o consumo excessivo representa um fator de risco bem estabelecido para doenças cardiovascularese cerebrovasculares 1. A Organização Mundial da Saúde recomenda limitar a ingestão diária de sódio a menos de 5 gramas para adultossaudáveis 2. Pesquisas demonstraram que uma dieta rica em sal (HSD) prejudica a função vascular e que a doença cardiovascular (DCV), a doença mais prevalente no mundo, frequentemente é acompanhada porvasculopatia 3. Esses achados ressaltam que reparar o dano endotelial vascular causado pelo HSD constitui uma estratégia crítica para prevenir a progressão das DCV. "Síndrome da estase sanguínea" (caracterizada por circulação sanguínea estagnada e acúmulo interno de sangue) está alinhada com disfunção de coagulação quantificável na medicina moderna. Biomarcadores de validação incluem tempo de protrombina (PT) significativamente reduzido e tempo de tromboplastina parcial ativada (APTT), bem como fibrinogênio (FIB) e tempo de trombomba (TT) significativamente elevados. Esses indicadores refletem um estado hipercoagulável, correspondendo diretamente às características patológicas da estase sanguínea.

A microbiota intestinal, presente em todo o trato gastrointestinal, atua como reguladores-chave dos processos imunometabólicos e da homeostase intestinal, ao mesmo tempo em que influencia diversas vias fisiológicas e patológicas4. Evidências emergentes indicam que o consumo excessivo de sal induz disbiose intestinal e desequilíbrio nutricional, desencadeando ativação imune pró-inflamatória que se manifesta como inflamação localizada enquanto promove danos microcirculatórios, remodelação vascular e disfunção endotelialsistêmica 1,5. O HSD crônico foi relatado como causa um aumento relativo nos níveis de Bacteroides intestinalis, Aspergillus e Prevotella spp. em camundongos, e tem sido associado à contribuição para o desenvolvimento de hipertensão e inflamaçãovascular 6.

A acupuntura, um pilar da Medicina Tradicional Chinesa (MTC), utiliza a inserção precisa de agulhas em pontos específicos como uma terapia complementar e alternativa baseada em evidências na prática clínica. Os Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e a Organização Mundial da Saúde (OMS) reconhecem a acupuntura como uma intervenção clinicamente validada para múltiplas condições patológicas. Evidências emergentes demonstram que a acupuntura possui um duplo mecanismoterapêutico 7,8, modulando a composição da microbiota intestinal enquanto suprime mediadores inflamatórios vasculares, mitigando assim coletivamente a progressão patológica em distúrbios relacionados. Importante destacar que a acupuntura é eficaz na redução da pressão arterial e na restauração da função endotelial nos vasos sanguíneosdanificados.

A EA foi escolhida em vez da acupuntura manual por seus parâmetros padronizados e quantificáveis de estimulação, que reduzem a variabilidade dependente do operador e melhoram a reprodutibilidade dos resultados. Portanto, investigamos o efeito do tratamento com EA na microbiota intestinal em ratos com modelo de síndrome de estase sanguínea de alto sal-alto (HSBS) e avaliamos a eficácia da EA na vasculopatia induzida por sal alto por reologia sanguínea e alterações histopatológicas vasculares. Para compreender melhor o papel da microbiota intestinal na melhoria das lesões vasculares pela terapia com EA, realizamos uma análise de correlação entre diferentes gêneros de microbiota intestinal e a taxa de corte do sangue total e a sedimentação do sangue.

Portanto, hipotetizamos que a EA alivia a vasculopatia induzida por HSD ao restaurar a homeostase da microbiota intestinal. Para testar isso, buscamos: (i) quantificar os efeitos protetores da EA na função e estrutura vascular, e (ii) identificar os táxons microbianos intestinais específicos modulados pela EA que se correlacionam com essas melhorias. Além disso, a análise de correlação de Pearson identificou relações significativas entre microbiota e vascular, especialmente entre flutuações diferencialmente abundantes dos gêneros e anomalias hemorheológicas. Até onde sabemos, este é o primeiro estudo a explorar os mecanismos protetores da AA na melhoria da vasculopatia induzida por dieta rica em sal sob a perspectiva da microbiota intestinal. O desenho experimental deste estudo é mostrado na Figura 1.

Figura 1
Figura 1: Diagrama técnico experimental. Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.

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Protocolo

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Todo o experimento foi realizado no Centro Experimental da Escola de Medicina Básica da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu. Todos os procedimentos de bem-estar animal e experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética do Bem-Estar Animal de Laboratório da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Ética nº 2024078). Os experimentos foram realizados seguindo estritamente o Guia do NIH para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (revisão de 1986, Publicação 86-23).

Animais e dieta
Ratos Wistar livres de patógenos específicos machos e fêmeas, com idades entre 6 e 8 semanas, pesavam 200 ± 20 g. Todos os ratos eram alojados em cômodos bem ventilados com um ciclo de 12 horas de luz e escuro e tinham acesso livre a comida e água.

Modelos e grupos
Modelos animais foram induzidos com referência à experiência de pesquisaanterior 10. Após um período de aclimatação de 7 dias, 21 ratos Wistar (distribuição de 50% machos/fêmeas) foram aleatoriamente distribuídos em três grupos experimentais (n = 7/grupo) usando o gerador de números aleatórios no Excel, mantendo o número de ratos machos e fêmeas em cada grupo aproximadamente equilibrado para minimizar o impacto do gênero nosresultados 11. Controle Normal (NC): Recebi uma gávage gástrica diária (1 mL/100 g) de água purificada. Modelo de Alto Nível de Sal (HS) e Intervenção de Ataque Superior (EA): Administrada solução de NaCl a 12% (1 mL/100 g) via gavage diário. Todas as intervenções foram mantidas por 30 dias consecutivos.

Tratamento de EA
O tratamento foi iniciado no dia seguinte à modelagem bem-sucedida. A EA foi escolhida em vez da acupuntura manual por seus parâmetros padronizados e quantificáveis de estimulação, que reduzem a variabilidade dependente do operador e melhoram a reprodutibilidade dos resultados. As localizações de BL23 (Shenshu, meridiano da bexiga) e KI3 (Taixi, meridiano renal) foram determinadas com base nos critérios de localização dos pontos de acupuntura em ratos da Sociedade Chinesa de Acupuntura eMoxibusção 12. O BL23 está situado 6 mm lateralmente à linha média dorsal, inferior à segunda vértebra lombar. KI3 estava localizada na depressão média entre o ponto mais alto do maléolo medial e a borda posterior do tendão de Aquiles. O cabelo local nos pontos de acupuntura foi removido e esterilizado. Agulhas de acupuntura estéreis descartáveis (0,18 mm × 13 mm) foram usadas para perfurar verticalmente os pontos de acupuntura, com profundidades de inserção de 4-6 mm para BL23 e 3-5 mm para KI3. O clipe positivo do eletrodo do dispositivo de eletroacupuntura era conectado ao cabo da agulha da agulha em BL23 de um lado, e o clipe negativo do eletrodo ao de KI3 do mesmo lado. Parâmetros do dispositivo de eletroacupuntura: Forma de onda: Onda densa-esparsa (10/50 Hz); Frequência: 5 s para onda esparsa, 10 s para onda densa; Intensidade: 1-2 mA, ajustada conforme as respostas convulsivas e dolorosas dos ratos (gritos, comportamentos de resistência); Largura do pulso: ≤ 1 MS. Protocolo de estimulação: A intervenção foi realizada diariamente das 17h00 às 19h00 (horário de Pequim), com duração de 20 minutos em cada vez. Ciclo: Um ciclo de tratamento consistiu em 7 dias, com um total de 4 ciclos e 1 dia de descanso entre cada ciclo. O processo específico é mostrado na Figura 2 (Criada com BioGDP.com13).

Figura 2
Figura 2: Linha do tempo experimental. Por favor, clique aqui para ver uma versão ampliada desta figura.

Coleta e preparação de amostras
Um mês após o gávage, sangue venoso orbital foi coletado de ratos antes da intervenção do EA. Amostras de plasma foram extraídas por centrifugação a 1.000 × g por 15 minutos a 4 °C. Ao final do tratamento, fezes frescas foram coletadas de cada grupo de ratos. Os ratos foram anestesiados com isoflurano emulsionado 10% (30 mg/kg) e eutanasiados. A cavidade abdominal foi aberta e aproximadamente 5 mL de sangue foram coletados da aorta abdominal para medir a viscosidade da taxa de cisalhamento do sangue total (WBSRV) em até 4 horas. Tecidos da aorta abdominal foram coletados para análise histopatológica. Todas as amostras eram armazenadas a -80 °C para uso subsequente.

Teste WBSRV
Após a conclusão da modelagem, aproximadamente 4-5 mL de sangue total foram coletados da aorta abdominal de ratos usando uma agulha de coleta de sangue e colocados em tubos anticoagulantes de heparina sódica. Os tubos foram suavemente agitados para garantir a mistura completa das amostras de sangue com o anticoagulante. Em 4 horas, o WBSRV e a taxa de sedimentação de eritrócitos (ESR) foram medidos usando um analisador hemorológico totalmente automatizado.

Histopatologia vascular
Os tecidos vasculares foram fixados em solução de paraformaldeído a 4% por pelo menos 24 horas e seccionados com espessura de 3 μm para coloração com hematoxilina-eosina (HE). As imagens foram capturadas com ampliações de 100× e 400×.

Sequenciamento de rDNA 16S
O DNA genômico foi extraído de amostras fecais de cada grupo. As sequências de espoletas V3-V4 (341F: 5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'; 805R: 5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3') foram usadas para amplificação por PCR do DNA total. O programa de amplificação por PCR foi o seguinte: pré-desnaturação a 98 °C por 30 s, desnaturação a 98 °C por 10 s, recozimento a 54 °C por 30 s e extensão a 72 °C por 45 s, com um total de 32 ciclos, seguida por uma extensão final a 72 °C por 10 min. Os produtos de PCR foram purificados e quantificados. O sequenciamento de extremidades pareadas (2×250 bp) foi realizado na plataforma de sequenciamento NovaSeq 6000. Leituras de extremidade pareada foram fundidas e filtradas para obter dados de alta qualidade. Usando o plugin DADA2 no QIIME 2, foram realizados filtros de comprimento e redução de ruído. Esse processo gerou variantes de sequência de amplicãs (ASVs) e tabelas de abundância de ASV, seguidas pela remoção dos ASVs singleton. Anotações taxonômicas e perfilamento de abundância foram realizados com base no arquivo de sequência ASV usando o banco de dados SILVA para investigar diferenças entre espécies e composição das comunidades entre amostras. A diversidade de espécies e as mudanças na abundância relativa foram avaliadas por meio de análises de diversidade α e diversidade β, e a visualização de dados foi realizada neste site (https://www.omicstudio.cn/home).

Análises estatísticas
Análises estatísticas foram realizadas usando o SPSS 26.0. Um valor de P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para dados com variâncias homogêneas, foi usada ANOVA unidirecional para comparações entre grupos, seguida por testes pós-hoc de diferença mínima significativa (LSD) caso diferenças significativas fossem encontradas. Para dados com variâncias heterogêneas, foi utilizado o ANOVA unidirecional não paramétrico de Kruskal-Wallis por patentes. A análise do teste Mann-Whitney U foi aplicada para avaliar alterações na composição da microbiota intestinal e na estrutura da comunidade. A análise de correlação de classificação de Pearson foi usada para avaliar correlações entre bactérias intestinais diferencialmente abundantes e outros indicadores. A análise de correlação de Pearson foi empregada porque os dados estavam em conformidade com as suposições de normalidade e linearidade, que foram validadas pelo teste de Shapiro-Wilk e pelo teste de Durbin-Watson. Gráficos estatísticos e mapas de calor foram gerados usando o GraphPad Prism 10.

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Resultados

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Validação do modelo animal
Os quatro parâmetros de coagulação desempenham um papel fundamental na pesquisa de lesões vasculares, monitorando anomalias na função coagulante intimamente ligadas a alterações patológicas vasculares. A avaliação pós-modelagem do sangue do plexo venoso retroorbitário demonstrou alterações significativas nos parâmetros de coagulação (PT, APTT, FIB, TT) entre os grupos HS/EA versus controles NC (Figura 3). Valores específicos de teste são forneci...

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Discussão

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Lesões vasculares são um fator crítico no desenvolvimento e nas manifestações patológicas de vários distúrbios cardiovasculares e metabólicos. Seus efeitos prejudiciais incluem disfunção vascular, coagulação sanguínea anormal, deposição lipídica e formação de placas, que podem levar a pressão arterial elevada, trombose e formação de placas arteriais, resultando em várias DCV 14,15,16. Portanto, ...

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Divulgações

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Os autores não declaram conflitos de interesse.

Agradecimentos

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Esta pesquisa foi financiada pelo Departamento Provincial de Ciência e Tecnologia de Sichuan (Bolsa nº 2024NSFSC0717). Agradecimentos à Figdraw pela ajuda prestada na preparação das figuras.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Agulhas de acupunturaSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.2420590,18 e vezes; 13 mm
Kit de Ensaio de Tempo de Tromboplastina Parcial Ativada (APTT) (Método de Coágulo)Beijing Succeeder Technology Inc.R21D24C4
Contas AMPure XPBeckman Coulter GenômicaA63881
Analisador Automático de CoagulaçãoBeijing Succeeder Technology Inc.SF-8050
Kit de Ensaio de Fibrinogênio (FIB) (Método de coagulação)Beijing Succeeder Technology Inc.R31D24D2
Testador Automático de Reologia SanguíneaBeijing Succeeder Technology Inc.SA-5600
GraphPad Prism 10GraphPad Software, Inc.
H& Solução de coloração EWuhan Saiweier Biotechnology Co., LtdG1005
Kit de quantificação da biblioteca IlluminaKapa Biociências7960166001
IsofluranoCiências da Vida RWDR510-22-10100 mL
Kit de extração de DNA genômico de fezes à base de esferas magnéticasBiotekAU46111-96
Microscópio vertical de luz branca Nikon Eclipse Ci-LNikon
QIIME 2https://qiime2.org/
Dispositivo eletrônico de acupuntura SDZ-II HuatuoSuzhou Medical Supplies Factory Co., Ltd.SDZ-II
Banco de dados SILVARelease 138, https://www.arb-silva.de/
Cloreto de sódioChengdu Jinshan Chemical Reagents Co., Ltd.20231008500 g
Ratos Wistar com SPFSPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SCXK (Pequim) 2024-0001
Kit de Ensaio Tempo de Trombina (TT) (Método de Coágulo)Beijing Succeeder Technology Inc.R4D24E1

Referências

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