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Artigo de método

Administração intranasal de poliplexos de mRNA via aerossóis de quebra de Rayleigh: Um método in vitro para deposição nasal e testes funcionais

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DOI:

10.3791/70000

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20 de janeiro de 2026

 ,  , 
1GKT School of Medical Education, Faculty of Life Sciences and Medicine, King's College London, 2Genetics, Faculty of Life Sciences and Medicine, King's College London, 3Institute of Pharmaceutical Science, King's College London

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Esse protocolo apresenta a fragmentação de Rayleigh como um processo leve para aerossolizar vetores de mRNA não virais. A deposição regional para vetores de mRNA aerossolizados é avaliada pelo modelo de Entrada Nasal Idealizada de Alberta (AINI). A expressão da proteína de fluorescência verde (GFP) em células pulmonares humanas representa a manutenção das funções fisicoquímicas e biológicas dos vetores de mRNA pós-aerossolizados.

Resumo

A administração intranasal de terapêuticas com mRNA é uma estratégia promissora para vacinação e tratamento de doenças respiratórias, oferecendo ativação imune direta no local de entrada do patógeno. No entanto, métodos convencionais de aerossolização (por exemplo, nebulizadores ultrassônicos ou de alta pressão) deterioram vetores de mRNA não virais por meio de forças de cisalhamento excessivas, fazendo com que os mRNAs percam sua integridade estrutural e atividades biológicas. Um atomizador nasal de quebra Rayleigh foi usado para aerossolizar suavemente vetores de mRNA de polietileneimina (PEI) em gotículas uniformes. O mRNA codificante da Proteína Fluorescente Verde (GFP) foi formulado em poliplexos catiônicos e caracterizado pré e pós aerossolização. O processo de fragmentação de Rayleigh forma um microjato contínuo de gotículas com cisalhamento mínimo, preservando assim as propriedades fisicoquímicas das nanopartículas. Tamanho consistente das partículas, baixo índice de polidispersidade e potencial zeta estável antes e depois da aerossolização foram observados, confirmando que as propriedades fisicoquímicas dos poliplexos de mRNA foram bem preservadas por meio da fragmentação de Rayleigh para aerossolização. Utilizando um modelo de Entrada Nasal Idealizada de Alberta (AINI) da via aérea nasal, os aerossóis PEI-mRNA foram administrados. Os mRNAs aerossolizados foram depositados principalmente nas regiões dos cornetos. Frações desprezíveis foram encontradas na nasofaringe ou em seções equivalentes aos pulmões. Além disso, os poliplexos de mRNA pós-aerossolizados foram entregues com sucesso às células epiteliais pulmonares humanas A549 e produziram expressão detectável de GFP. Esse protocolo demonstra um método não destrutivo de entrega intranasal de mRNA usando aerossolização de fragmentação de Rayleigh. Ela mantém efetivamente as propriedades fisicoquímicas e as funções biológicas dos vetores de mRNA não virais, atomizando a fase aquosa em gotículas de tamanhos apropriados para deposição nasal direcionada. Esse protocolo revela uma abordagem inovadora para aerossolar efetivamente mRNAs e avaliar sua deposição regional na cavidade nasal.

Introdução

Administrar vacinas na mucosa nasal (o portal de entrada de muitos patógenos respiratórios) pode provocar uma forte imunidade local e bloquear infecções em sua origem. O sucesso das vacinas intranasais contra a gripe e a recente aprovação das vacinas intranasais contra a COVID-19 ressaltam a eficácia da via nasal para induzir respostas imunes tanto mucosas quantosistêmicas. A administração intranasal de vacinas de mRNA está, portanto, atraindo grande interesse como estratégia para prevenir infecções virais respiratórias. Um grande desafio técnico, no entanto, é converter frágeis poliplexos de mRNA em aerossol inalássível sem comprometer sua estabilidade.

A aerossolização por fragmentação de Rayleigh oferece uma alternativa suave ao operar com um princípio físico diferente. Em um dispositivo de quebra Rayleigh, um fluxo de líquido pressurizado é forçado através de um orifício em microescala para formar um microjato contínuo. O jato naturalmente se fragmenta em gotículas de tamanho uniforme devido à instabilidadePlateau-Rayleigh 2. A tensão superficial faz com que a coluna de líquido se fragmente em um comprimento de onda característico cerca do dobro do diâmetro do bico. Ao contrário da nebulização ultrasônica, esse processo praticamente não introduz cisalhamento turbulento; As gotículas são formadas naturalmente pela autoinstabilidade do jato, não por forças externas de estilhaça. Como resultado, as formulações de nanopartículas sofrem estresse mínimo. Foi demonstrado que o uso da quebra de Rayleigh pode aerossolizar mRNAs de nanopartículas lipídicas (LNP) sem mudança significativa em seu tamanho, carga superficial ou eficiência de encapsulamento antes do pós-pulverização 3,4,5. Nesse método, o PEI-mRNA permanece intacto e funcional após a aerossolização, em contraste com a deterioração observada em técnicas de nebulização mais agressivas.

Outra vantagem da quebra de Rayleigh é o controle sobre o tamanho das gotículas. As gotículas geradas são relativamente grandes (na ordem de 20-30 μm). Esse tamanho de gotícula é ideal para entrega nasal: partículas com diâmetro aerodinâmico de >10 μm tendem a se depositar no nariz e nas vias aéreas superiores em vez de se espalharem para ospulmões 3. Ao produzir gotículas principalmente acima desse limiar, o atomizador de Rayleigh naturalmente direciona a deposição na cavidade nasal. A direcionamento é ainda mais aprimorada pelo uso do modelo Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI) para otimizar técnicas de administração. O AINI é uma réplica das vias aéreas nasais impressa em 3D que prevê com precisão os padrões de deposição de spray in vivo 6. Usando esse modelo, foi constatado que pulverizar em um ângulo de 45° na narina aumenta consideravelmente a deposição para oscornetos 7. O ângulo administrativo afeta significativamente o padrãode deposição 7. A deposição em áreas não alvo como a nasofaringe ou pulmões é indesejável, pois pode causar irritação na garganta, gosto ruim ou efeitos colateraissistêmicos. Nesse protocolo, essas condições foram replicadas (um ângulo de pulverização de 45° e fluxo de ar de inalação controlado) para maximizar a deposição dos cornetos do aerossolde mRNA 3. Dados anteriores mostram que mais da metade da massa de mRNA entregue pode ser focada na região dos cornetos sob condições ideais, enquanto <10% alcança a nasofaringe ou alémde 3. Espera-se que essa administração direcionada melhore a eficácia da vacina ao concentrar a dose nos locais indutivos de imunidade (que são bem vascularizados e ricos em células imunes) e, ao mesmo tempo, minimizar a deposição fora do alvo que pode levar a desperdício ou efeitos adversos.

Neste artigo de métodos, o procedimento experimental para aerossolização de mRNA via fragmentação de Rayleigh é descrito em detalhes, avaliando deposições regionais no modelo AINI e avaliando a atividade biológica do mRNA depositado in vitro. Um mRNA repórter codificando GFP é usado para visualizar os resultados da transfecção em células humanas. HEK293T células são escolhidas para testar a funcionalidade dos complexos aerossolizados. Para aumentar a absorção celular do mRNA aerossolizado in vitro, o mRNA é ramificado com PEI para formar poliplexos PEI-mRNA antes de adicioná-los às células. O PEI é um agente transfector de polímeros catiônicos que pode melhorar a eficiência da entrega de mRNA, e uma razão molar N:P (nitrogênio: fosfato) de 24:1 foi usada aqui com base em otimizações anteriores para a entrega de genes. O PEI é usado apenas para a etapa de validação da cultura celular neste estudo e não faz parte da entrega de aerossóis a um nariz real (in vivo , depende-se apenas do LNP-mRNA, mas em cultura celular isso ajuda a maximizar a expressão gênica para detecção).

Esse protocolo destaca uma nova abordagem para a administração intranasal da vacina de mRNA que aborda a questão da estabilidade da aerossolização de mRNA. A fragmentação de Rayleigh só foi aplicada recentemente à entrega de ácidos nucleicos em algunsestudos 3,4,5,9, e este trabalho fornece um guia metodológico detalhado para implementar essa técnica. Seguindo esse procedimento passo a passo, os pesquisadores podem reproduzir a aerossolização suave de nanoportadores de mRNA e avaliar suas características de deposição e transfecção. A seção de Protocolo abaixo está organizada em partes sequenciais: (1) formulação de PEI-mRNA; (2) Caracterização de nanopartículas (tamanho e potencial zeta) antes e depois da aerossolização; (3) Operação do atomizador de fragmentação de Rayleigh e procedimento de deposição nasal AINI. São anotadas considerações chave para o sucesso, como manter condições livres de RNase e alinhamento adequado do dispositivo. Os Resultados e Discussão incluem resultados representativos, vantagens do método em relação às abordagens convencionais, possíveis aplicações (por exemplo, vacinas nasais para influenza ouCOVID-19 10,11,12), bem como limitações e dicas de solução de problemas. Essa metodologia abrangente visa possibilitar experimentos reprodutíveis de entrega intranasal de mRNA e acelerar o desenvolvimento de vacinas de RNA mucoso sem agulhas.

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Protocolo

NOTA: Cultivar linhas celulares HEK293T e A549 em meio completo consistindo no Meio Eagle Modificado (DMEM) da Dulbecco, suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS) e 2% de penicilina-estreptomicina antes da transfecção de PEI-mRNA. Passe ambas as linhas celulares aproximadamente a cada 48 horas ao atingir a confluência. Células de semente com uma densidade de 40.000 células por cm² e cultivam por ~48 horas. Remova o meio de cultura e lave as células com soro tampão fosfatado (PBS) imediatamente antes da transfecção para remover o soro residual e padronizar as condições de transfecção. Autoclave de todos os frascos de cultura celular, placas de 24 poços, PBS, pipetas e pontas de pipeta antes do uso.

1. Formulação de PEI-mRNA

  1. Formação de complexos PEI-mRNA (para transfecção in vitro )
    NOTA: Essa etapa só é necessária se o PEI for usado para aumentar a transfecção em cultura celular.
    1. Calcule a quantidade necessária de PEI para a razão molar N:P desejada.
      NOTA: N:P = 24 (significando 24 mols de aminas carregadas positivamente por mol de fosfatos carregados negativamente em mRNA); e uma quantidade de 10 μg de mRNA exigiria ~31 μg PEI para formar PEI-mRNAs nessa proporção N/P.
    2. Prepare uma solução de PEI diluída (por exemplo, 1 mg/mL de estoque em água) e autoclave.
    3. Dilua o mRNA até uma concentração apropriada (por exemplo, 0,2 μg/μL).
    4. Adicione a solução PEI à solução de mRNA enquanto mistura suavemente (não faça vórtice).
      NOTA: A mistura pode estar em um tubo pequeno; Pipete cuidadosamente para cima e para baixo ou faça um estalo no tubo para misturar.
    5. Incube em temperatura ambiente por ~20 minutos para permitir a ligação eletrostática do PEI ao mRNA.
      NOTA: Se não for usando o IEP, o mRNA nu pode ser aerossolizado diretamente. A PEI adicional melhorou muito a expressão gênica nas células A549, mas é opcional e pode não ser usada para entrega in vivo devido a considerações de toxicidade.

2. Caracterização de nanopartículas (tamanho e potencial zeta)

NOTA: Configure os parâmetros de medição no software e salve como método antes de usar o analisador para medir o tamanho ou potencial zeta. A configuração do método é necessária para executar o instrumento, e os parâmetros dependem do ambiente de medição, da cuveta usada e das propriedades da amostra.

  1. Pré-aerossolização por espalhamento dinâmico da luz (DLS)
    1. Usando um analisador de tamanho de partícula, carregue uma amostra diluída da formulação em uma cuveta descartável (por exemplo, 500 μL a 0,2 μg/μL).
    2. Ligue o analisador e abra o software13 no computador conectado.
    3. Clique no botão Medir no topo da janela.
    4. Clique no ícone azul de Arquivo no topo da janela para selecionar o método de tamanho predefinido.
    5. Renomeie o protocolo para corresponder ao nome da amostra.
    6. Pressione o botão da tampa do analisador para abrir a câmara.
    7. Insira a cuveta na câmara.
    8. Clique no botão verde Executar no topo da janela do software. Espere a medição completar13.
    9. Clique no botão Analisar no topo da janela do software e depois clique no botão Tamanho na página13 do resultado.
    10. Obtenha o diâmetro hidrodinâmico médio (média Z) e o índice de polidispersidade (PDI) a partir da Tabela de Estatísticas.
    11. Pressione o botão da tampa do analisador para abrir a câmara, remover a cubeta e fechar a tampa.
    12. Descarte a cuveta e enxágue o atomizador com água livre de RNAase e com etanol 70% v/v para desinfetar e facilitar a secagem entre as medições de Tamanho.
      NOTA: Para o atomizador Rayleigh, certifique-se de que não restem depósitos de sal ou resíduos no bico, pois isso pode alterar o desempenho da pulverização.
  2. Pré-aerossolização do potencial zeta
    1. Use o mesmo instrumento (ou um analisador de potencial Zeta), carregue uma amostra diluída da formulação em uma célula capilar dobrada (por exemplo, 700 μL a 0,2 μg/μL).
    2. Ligue o analisador e abra o software13 no computador conectado.
    3. Clique no botão Medir no topo da janela.
    4. Clique no ícone azul do Arquivo no topo da janela para selecionar o método zeta predefinido.
    5. Renomeie o protocolo para corresponder ao nome da amostra.
    6. Pressione o botão da tampa do analisador para abrir a câmara.
    7. Insira a cuveta na câmara.
    8. Clique no botão verde Executar no topo da janela do software. Espere a máquinarodando 13.
    9. Clique no botão Analisar no topo da janela do software e depois clique no botão Zeta na página13 do resultado.
    10. Obtenha o potencial zeta (carga superficial) consultando a Tabela de Estatísticas.
    11. Pressione o botão da tampa do analisador para abrir a câmara, retirar a amostra e fechar a tampa.
    12. Enxágue a cuveta e o atomizador com água sem RNAase e com etanol 70% v/v para desinfetar e facilitar a secagem entre as medições do potencial Zeta.
      NOTA: Para o atomizador Rayleigh, certifique-se de que não restem depósitos de sal ou resíduos no bico, pois isso pode alterar o desempenho da pulverização.

3. Aerossolização e deposição nasal por fragmentação de Rayleigh

  1. Atomizador e configuração AINI
    1. Monte o dispositivo atomizador nasal de quebra de Rayleigh e o modelo Alberta Idealized Nasal Inlet (AINI).
      NOTA: O modelo AINI consiste em seções ocas anatomicamente representativas correspondentes a diferentes regiões da cavidade nasal humana (por exemplo, vestíbulo nasal, região dos cornetos, região olfativa, nasofaringe).
    2. Certifique-se de que todos os componentes do AINI estejam limpos e secos antes do uso (resíduos podem alterar os resultados da deposição). Limpe lavando com água desionizadae depois com etanol ou solvente orgânico.
    3. Conecte o AINI a um Impactador de Nova Geração (NGI) que está conectado a uma bomba de vácuo em sua saída para puxar o fluxo de ar pelas vias nasais.
    4. Ajuste a vazão para 7,5 L/min – um fluxo que representa uma inspiração nasal lenta e profunda emum adulto 6. Use um medidor de fluxo calibrado (ou um rotâmetro) conectado à porta de indução do NGI. Ajuste a bomba até o fluxômetro marcar 7,5 L/min.
      NOTA: Use um medidor de fluxo para medir o fluxo de ar na vazão necessária para o teste.
    5. Mantenha esse fluxo de ar durante toda a pulverização. Use Parafilm para selar o dispositivo corretamente no AINI.
  2. Posicionamento do atomizador
    1. Insira o bico do atomizador de quebra de Rayleigh na entrada da narina AINI (seção vestíbulo) em um ângulo de 45°.
    2. Fixe o atomizador para que ele não se desloque durante a operação (todas as conexões, seções do modelo, tubos para bomba) são herméticos.
  3. Carregando a amostra
    1. Misture delicadamente a suspensão preparada de PEI-mRNA para garantir homogeneidade (evitar a criação de bolhas).
    2. Retire a amostra para dentro do reservatório do atomizador.
      NOTA: Dependendo do design do dispositivo, isso pode envolver o enchimento de uma ponta de seringa ou pipeta que se conecta ao atomizador.
    3. Carregue a amostra no dispositivo.
      NOTA: Por exemplo, remova uma tampa central ou câmara no atomizador, pipete a amostra e depois monte o dispositivo de forma segura. Certifique-se de que não haja vazamentos e que o dispositivo esteja devidamente preparado se necessário.
  4. Geração do aerossol
    1. Ligue o fluxo de ar (7,5 L/min através do AINI) da bomba de ar antes ou ao mesmo tempo em que o spray começa, conforme as instruções do aparelho.
    2. Ative o atomizador de quebra Rayleigh para iniciar a aerossolização.
      NOTA: Para um atomizador manual acionado por seringa, pressione gradualmente o êmbolo da seringa para forçar o líquido a passar pelo orifício. Borrife todo o volume da amostra de uma vez seguida, se possível. O êmbolo deve ser pressionado suavemente para gerar uma pressão de operação estável, pois a formulação é aerossolizada somente após ser pressurizada a uma pressão elevada e exposta a uma taxa de cisalhamento da parede dentro domicro-orifício 14. Movimentos rápidos do êmbolo alteram a pressão e, portanto, alteram tanto a taxa de cisalhamento quanto o tempo de exposiçãoao cisalhamento 14.
    3. Certifique-se de que a vazão permaneça em 7,5 L/min durante todo o tempo. As gotículas de aerossol devem viajar pelo modelo da passagem nasal e ser depositadas em diferentes regiões de acordo com seus tamanhos aerodinâmicos.
    4. Desligue a bomba de ar rapidamente para evitar que gotículas já depositadas sejam puxadas para baixo ou ressecem de forma desigual.
  5. Coleta de amostras da AINI
    1. Desmonte cuidadosamente o modelo AINI em seus segmentos anatômicos individuais para coletar nanopartículas depositadas de cada região.
      NOTA: Antes de desmontar, anote ou marque a orientação para acompanhar as seções.
    2. Coletar depósitos de seis compartimentos: (i) o dispositivo atomizador, (ii) a seção do vestíbulo nasal, (iii) a seção dos cornetos, (iv) a região olfativa, (v) a seção da nasofaringe e (vi) qualquer captura a jusante (por exemplo, estágios de um NGI acoplado ou um filtro final representando fração penetrante no pulmão)
    3. Para cada compartimento, use um volume medido de meio de cultura celular para lavar o material depositado.
      NOTA: Por exemplo, para coletar a deposição do cornetado, desprenda a seção do cornetado e enxágue cuidadosamente suas superfícies internas com 5 mL do Médio Eagle Modificado (DMEM) de Dulbecco, usando uma pipeta descartável. Lave delicadamente todas as superfícies e depois despeje o enxágue em um tubo centrífugo de 15 mL rotulado (use um funil para facilitar a transferência). Durante o enxágue, o segmento era mantido horizontalmente ou levemente inclinado para garantir contato completo com a superfície interna e evitar o escape de fluido. Repita de forma semelhante para o vestíbulo, olfato, nasofaringe e quaisquer outras seções, usando 5 mL de DMEM fresco para cada uma e coletando em tubos separados e rotulados.
    4. Recupere qualquer amostra residual do dispositivo atomizador.
      NOTA: Para um tipo seringa, enxágue a seringa e o bico em um tubo.
    5. Recupere o líquido dos estágios NGI (impactador em cascata) se o AINI estivesse conectado a um NGI para reter partículas finas (por exemplo, enxaguando os estágios com DMEM).
    6. Tape o tubo com o líquido coletado.
      NOTA: Evite perder gotículas nas superfícies do banco ou por evaporação.
  6. Tratamento pós-coleta
    1. Imediatamente após a coleta, as amostras de PEI-mRNA foram colocadas separadamente sobre as células para transfecção.
      NOTA: Pode deixar as amostras de PEI-mRNA na geladeira por ~1-2 horas (até no máximo 6 horas) antes de usá-las para transfecção. Um certo volume (máximo 1 mL) é extraído de cada amostra coletada de PEI-mRNA para caracterizar os vetores pós-aerossolizados (ou seja, medições DLS e zeta).
  7. Limpeza do aparelho
    1. Limpe cuidadosamente o atomizador e o modelo AINI após cada execução para evitar contaminação cruzada em experimentos subsequentes.
    2. Enxágue todas as seções do AINI e as partes do atomizador com água desionizada para remover o meio e as nanopartículas, depois com etanol a 70% para desinfetar e facilitar a secagem.
      NOTA: Se o dispositivo ou modelo tiver pequenos orifícios, lave-os com uma seringa.
    3. Seque todas as peças até o ar completamente (ou coloque em um armário de secagem em baixa temperatura) antes de montar novamente. Para o atomizador Rayleigh, certifique-se de que não restem depósitos de sal ou resíduos no bico, pois isso pode alterar o desempenho da pulverização.

4. Imagem celular

NOTA: Após a transfecção, remova o meio de transfecção e substitua-o por meio novo e completo para terminar a exposição. Cultive células por 48 horas para permitir a expressão do repórter e a recuperação celular. A ~80% de confluência, fixe as células com 4% de formaldeído por 8 minutos, depois colora os núcleos com 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; 300 nM) por 5 minutos, seguido de uma lavagem de PBS 2 vezes antes da imagem.

  1. Imagem por fluorescência
    1. Use um microscópio de fluorescência com conjuntos de filtros para DAPI e GFP.
    2. Comece com o canal azul (comprimento de onda de excitação = 385 nm, comprimento de onda de emissão = 477,5 nm) para visualizar núcleos coloridos com DAPI.
    3. Mude para o canal Green (comprimento de onda de excitação = 488 nm, comprimento de onda de emissão = 525 nm) para visualizar células positivas para a GFP.

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Resultados

Como um manuscrito focado em métodos, resultados detalhados não são o objetivo principal; No entanto, resultados representativos são apresentados para ilustrar os resultados esperados de cada parte do protocolo. As figuras mencionadas abaixo mostram dados de exemplo (por exemplo, gráficos ou imagens) que apoiam a validade do método, mas nenhuma nova análise quantitativa além da demonstração é incluída.

Tamanho da gota e padrão de deposição:

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Discussão

Neste protocolo, antes de aerossolar a formulação, o mRNA é ramificado com PEI para aumentar a absorção celular. Isso serve como substituto para a entrega de LNP-mRNA durante a validação in vitro 10,15. O PEI-mRNA conserva a maioria das funções das formulações LNP, incluindo características biológicas e funcionais importantes10. Os grupos amina carregados positivamente no PEI se ligam a mRNA carre...

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Os autores reconheceram o apoio financeiro da King's Undergraduate Research Fellowship (KURF) e do Student Opportunity Fund fornecido pelo King's College London.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Tubos centrífugos de 50 mLSigma-Aldrich Company LimitedCLS430829-500EA
50– 1000 & mu; Pontas da pipeta em LSigma-Aldrich Company LimitedZ740031-1000EA
Linha de Células A549Coleção de Cultura do Tipo AmericanoATCC CRM-CCL-185
Medidor de Fluxo de ArN/AN/AUm medidor de fluxo de ar genérico pode ser utilizado.
Modelo de Entrada Nasal Idealizada de Alberta (AINI)TSI Incorporated (via Copley Scientific, Reino Unido)0001-01-8540
Fita indicadora de autoclaveSigma-Aldrich Company LimitedZ744090
DAPISigma-Aldrich Company LimitedD1306
DMEM (Eagle Medium Modificado da Dulbecco)Gibco, Thermo Fisher Scientific11966025
Álcool etílico, puroSigma-Aldrich Company Limited32221-MComprado via Merck
Soro Bovino Fetal (FBS)Gibco, Thermo Fisher ScientificA5256701
FormaldeídoSigma-Aldrich Company LimitedF8775
HEK293T Linha CelularColeção de Cultura do Tipo AmericanoATCC CRL-3216
Gabinete de Biossegurança Heraeus HERAsafe HS 12HeraeusN/A
Impactor de Próxima GeraçãoMSP's, uma divisão da TSI0170-01-1000Este produto também está presente no Catálogo Copley, com o número de peça 5201.
Câmera Monocromática Nikon DS-Qi2NikonN/A
Multidishes tratados com cultura celular NuncThermo Fisher Scientific142475
Frascos tratados com cultura celular Nunc EasYFlaskThermo Fisher Scientific156340
ParafilmSigma-Aldrich Company LimitedP7793-1EA
Penicilina-Estreptomicina (10.000 U/mL)Gibco, Thermo Fisher Scientific15140148
Comprimidos de solução salina tamponada com fosfato (PBS)Thermo Fisher Scientific18912014
Cloridrato de polietileneminaSigma-Aldrich Company Limited764965-1GComprado via SLS
Atomizador Nasal Rayleigh JetResyca BV EnschedeAdaptador de spray nasal macio
Água livre de RNAseThermo Fisher ScientificJ60610. EQC
Cuvette de DimensionamentoMalvern PanalyticalZEN0040
A célula capilar dobradaMalvern PanalyticalDTS1070
Zetasizer ProMalvern PanalyticalZetasizer Pro
Software Zetasizer Ultra-Pro ZS XplorerMalvern PanalyticalN/A

Referências

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