Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial

Summary

Neste vídeo e ensaio é demonstrar que testa a tolerância de nicotina para dois tipos de pulgões que infestam plantas de tabaco no campo e uma que não.

Abstract

Plantas podem upregulate a produção de muitos metabólitos seconday diferentes em resposta à alimentação de insetos. Um desses metabólitos, a nicotina, é conhecida por ter propriedades inseticidas. Uma resposta de plantas de tabaco a herbivoria, ou sendo roídas por insetos em cima, é aumentar a produção deste alcalóide neurotóxico. Aqui, vamos demonstrar como configurar um experimento para abordar esta questão de saber se um tabaco adaptado cepa do pulgão, Myzus persicae, pode tolerar níveis mais altos de nicotina do que a uma tensão desse inseto, que não do tabaco em infestam o campo.

Protocol

Neste experimento, quatro pulgões adultos são colocados em um copo de plástico pequeno. Eles se alimentam de dieta líquida pipetado entre 2 camadas de parafilme esticada por cima do copo. Após 3 dias de alimentação, a toxicidade de dietas contendo diferentes concentrações de nicotina é comparada a dietas de controle através da contagem de adultos e pulgões larval em cada copo.

1. Faça soluções contendo sacarose e 20 aminoácidos. Pulgões podem subsistir com esta dieta, reproduzindo em níveis normais, por pelo menos uma semana. Por favor, veja arquivo anexo para a dieta artificial.
2. Alíquota de 1 mL desta dieta em 6 diferentes tubos eppendorf contendo nicotina. Classificá-los com respeito a várias concentrações de nicotina utilizado, variando de 0 a 500μM.
3. Selecione 4 pulgões, vermelho ou verde, e colocadas em copos esses experimental.
4. Ao selecionar pulgões, é importante que eles sejam de idade consistente. Tipicamente, procure pulgões de tamanho similar e de cor (vermelho os pulgões ficam mais escuras quando são mais velhos).
5. Cubra o copo com um pedaço de parafilme. Coloque a dieta entre 2 pedaços de parafilme. Parcialmente esticar o nível de segundo parafilme em torno das bordas do copo. Alíquota dieta do líquido entre as camadas, e selar a camada de cima para baixo.
6. Manter esses copos na sala de insetos sob as luzes em um fotoperíodo longo dia, durante 3 dias, após o que os dados para o experimento pode ser coletado.

Visite Comentários Anual de Biologia Vegetal para obter mais informações sobre esta imunidade protocolo e planta à herbivoria de insetos.