É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Investigação dos efeitos da timoquinona na neurotoxicidade induzida pelo bisfenol A, sinalização do Keap-1/Nrf-2, estresse oxidativo e comportamento em ratos

255 vistas

⸱

DOI:

10.3791/70242

⸱

24 de março de 2026

 , 
1Department of Physiology, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University, 2Department of Histology and Embryology, Faculty of Medicine, Kirsehir Ahi Evran University

Neste artigo

Resumo

Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos da Timoquinona sobre o estresse oxidativo, a via de sinalização Keap-1/Nrf-2 e o comportamento no plasma, no córtex cerebral e no hipocampo de ratos expostos ao bisfenol A.

Resumo

A exposição crônica em baixas doses ao bisfenol A (BPA), um desintegrador endócrino ambiental amplamente utilizado, tem sido cada vez mais associada à neurotoxicidade mediada pelo estresse oxidativo. A timoquinona (TQ), um constituinte bioativo da Nigella sativa, apresenta potentes propriedades antioxidantes; no entanto, seu potencial neuroprotetor contra toxicidade induzida pelo BPA permanece incompletamente compreendido. Dada a natureza generalizada da exposição ao BPA, identificar estratégias neuroprotetoras eficazes e acessíveis está ganhando cada vez mais importância. Este estudo investigou os efeitos da TQ sobre o estresse oxidativo, sinalização do Keap-1/Nrf-2, comportamento e alterações histopatológicas em ratos expostos ao BPA. Um total de 24 ratos Wistar Albino machos adultos foi randomizado em quatro grupos (n = 6/grupo): controle, BPA, BPA + 10 mg/kg de qualificação (BPA+TQ I) e BPA + 20 mg/kg de qualificação (BPA+TQ II). BPA (50 μg/kg) e TQ foram administrados intragastricamente por 30 dias. A exposição ao BPA induziu comprometimentos comportamentais significativos, estresse oxidativo, perturbação da sinalização do Keap-1/Nrf-2 e danos histopatológicos marcantes no hipocampo e no córtex cerebral. O tratamento com TQ melhorou significativamente a atividade locomotrica e o comportamento semelhante à depressão, reduziu a peroxidação lipídica e os níveis de óxido nítrico, restaurou a capacidade antioxidante relacionada ao glutationa e normalizou a expressão de Keap-1 e Nrf-2 (p < 0,001). Esses efeitos protetores foram mais pronunciados na dose TQ mais alta. Em conjunto, esses achados demonstram que a timoquinona mitiga a neurotoxicidade induzida pelo BPA por meio da modulação do estresse oxidativo e da via de sinalização Keap-1/Nrf-2, destacando seu potencial como agente neuroprotetor contra exposição ambientalmente relevante ao BPA.

Introdução

Bisfenol A (BPA) é um composto sintético amplamente utilizado em plásticos e resinas epóxi, e é comumente detectado em materiais de embalagem de alimentos, sistemas de água, dispositivos médicos e produtosdomésticos. A exposição ambiental contínua levantou preocupações quanto aos seus potenciais efeitos neurotóxicos, especialmente sob condições crônicas de baixa dose que refletem a exposição humana real.

Embora agências reguladoras como a Food and Drug Administration dos EUA e a Agência de Proteção Ambiental dos EUA tenham definido 50 μg/kg/dia como o nível sem efeito adverso observado, evidências experimentais e epidemiológicas emergentes indicam que alterações comportamentais e cognitivas podem ocorrer em doses menores. Consequentemente, a ingestão diária tolerável europeia foi reduzida para 4 μg/kg/dia, enfatizando a necessidade de investigar os efeitos mecanicistas da exposição ambientalmente relevante aoBPA 1,2.

O estresse oxidativo é considerado um mecanismo central subjacente à neurotoxicidade induzida pelo BPA. O BPA prejudica o equilíbrio redox celular ao diminuir defesas antioxidantes como o glutationa (GSH) e aumentar marcadores de peroxidação lipídica, incluindo o malondialdeído (MDA)3,4. No entanto, os mecanismos regulatórios a montante que controlam as respostas antioxidantes sob exposição ao BPA permanecem insuficientemente caracterizados.

A via da proteína associada ECH semelhante a Kelch (Keap-1)/fator eritróide 2-relacionado ao fator 2 (Nrf-2) é um mecanismo de defesa antioxidante endógeno principal. Sob condições de estresse oxidativo, o Nrf-2 se dissocia do Keap-1, transloca para o núcleo e ativa a expressão gênica dependente de elementos de respostaantioxidante 5. Apesar de seu papel estabelecido na defesa celular, a modulação específica de região da sinalização Keap-1/Nrf-2 no cérebro durante a exposição ao BPA ambientalmente relevante não foi investigada de forma abrangente em conjunto com os desfechos comportamentais.

A timoquinona (TQ), o principal componente bioativo do óleo de semente de Nigella sativa, é um benzoquinona lipofílico capaz de atravessar a barreira hematoencefálica. A TQ apresenta propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e apoptóticas, em parte por meio da ativação da sinalização do Nrf-2 e do aumento da capacidade antioxidanteendógena 5,6. Embora estudos anteriores tenham demonstrado os efeitos protetores da TQ em vários modelos de neurotoxicidade, uma abordagem metodológica integrada avaliando marcadores de estresse oxidativo, sinalização Keap-1/Nrf-2 e parâmetros comportamentais dentro do mesmo paradigma de exposição ao BPA estáausente de 5,6,7.

Aqui, descrevemos um protocolo experimental reprodutível para avaliar biomarcadores de estresse oxidativo, expressão das vias Keap-1/Nrf-2 e alterações comportamentais em um modelo de rato de exposição ambientalmente relevante ao BPA, além de avaliar os efeitos neuroprotetores da timoquinona em múltiplas regiões cerebrais.

Hipotetizamos que a exposição em baixas doses de BPA induz comprometimentos comportamentais por meio da desregulação mediada pelo estresse oxidativo da via de sinalização Keap-1/Nrf-2, e que a timoquinona mitiga esses efeitos ao restaurar o equilíbrio redox e ativar respostas antioxidantes dependentes de Nrf-2.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê Local de Ética em Experimentação Institucional com Animais (Aprovação nº: 68429034/07).

Animais e desenho experimental
Vinte e quatro ratos Wistar Albino machos adultos (200-250 g) foram obtidos do Experimental Animal Research Laboratory e alojados individualmente sob condições controladas (ciclo claro/escuro de 12 horas, 24 ± 2 °C) com acesso ad libitum a comida padrão e água da torneira. Os animais foram aclimatados às condições laboratoriais antes do experimento, que durou 32 dias.

Ratos foram aleatoriamente designados para grupos experimentais usando um método de randomização simples gerado por computador para minimizar o viés de seleção, com números iguais de animais alocados a cada grupo (n = 6/grupo): controle, BPA, BPA + 10 mg/kg de timoquinona (BPA + TQ I) e BPA + 20 mg/kg de timoquinona (BPA + TQ II). O tamanho da amostra foi determinado por uma análise de potência a priori usando o software G*Power (versão 3.1). Com base nos tamanhos de efeito relatados em estudos anteriores 5,6,7 avaliando neurotoxicidade induzida pelo BPA e intervenções antioxidantes, especialmente para medidas bioquímicas e comportamentais, assumiu-se um poder estatístico de 0,80 para ANOVA unidirecional. Nessas condições, era necessário um mínimo de seis animais por grupo para detectar diferenças estatisticamente significativas entre os grupos experimentais.

BPA (50 μg/kg) e TQ (10 ou 20 mg/kg) foram administrados intragicastramente por gavage 1 vez ao dia durante 30 dias. Todos os tratamentos foram preparados recentemente e administrados em volume total de 1 mL/kg. A dose de BPA usada no presente estudo (50 μg/kg/dia) foi selecionada com base em sua designação como nível sem efeito adverso observado e dose de referência pela Agência de Proteção Ambiental dos Estados Unidos e pela Food and Drug Administration dos EUA. Essa dose tem sido amplamente empregada em estudos experimentais para modelar a exposição ao BPA ambientalmente relevante e para investigar possíveis alterações neurocomportamentais e bioquímicas ocorrendo em níveis de exposição anteriormente considerados seguros. Importante, a acumulação de evidências experimentais indica que efeitos neurológicos e comportamentais adversos podem ocorrer nessa dose ou abaixo, apoiando sua relevância para avaliar a toxicidade de BPA em baixadose 1,2. A seleção das doses de TQ (10 e 20 mg/kg) baseou-se em estudos experimentais anteriores que demonstraram sua eficácia neuroprotetora e antioxidante sem induzirtoxicidade 5,6,7. Essas doses têm sido amplamente utilizadas em modelos de roedores de neurotoxicidade, estresse oxidativo e neuroinflamação, e estão bem abaixo dos limiares de toxicidade relatados para administração repetida. Nenhum estudo piloto de dosagem foi realizado; A seleção da dose foi guiada pela precedência da literatura e perfis de segurança estabelecidos para garantir tanto a eficácia quanto a relevância translacional.

O BPA foi administrado por 30 dias consecutivos. Avaliações comportamentais foram realizadas nos dias 31 e 32 após a exposição final. Os animais foram sacrificados no dia 32, após a conclusão de todos os testes comportamentais. Essa linha do tempo foi projetada para permitir tempo suficiente para avaliação comportamental, minimizando os possíveis efeitos de confusão do manuseio agudo ou do estresse procedimental em análises bioquímicas, moleculares e histopatológicas subsequentes. A timoquinona foi administrada 1 vez ao dia imediatamente após o BPA pela mesma via intragástrica. Testes comportamentais foram realizados após as administrações finais de BPA e TQ. A linha do tempo experimental é resumida na Figura 1.

Medição do peso corporal
Os pesos corporais foram medidos usando um balanço digital calibrado de precisão (sensibilidade ±0,1 g). Cada rato foi pesado individualmente pela manhã antes da administração do tratamento, e as medições foram registradas nos dias 1, 10, 20 e 32 sob condições padronizadas para minimizar a variabilidade (Figura 2).

Avaliações comportamentais
Todos os parâmetros comportamentais foram pontuados por um único observador cegamente para a alocação de grupos, minimizando o viés do observador e a variabilidade entre observadores. Os animais foram habituados à sala de testes por pelo menos 30 minutos antes dos testes comportamentais para reduzir o estresse induzido por novidade.

O uso combinado do teste de campo aberto (OFT) e do teste de natação forçada (FST) permite uma avaliação abrangente da toxicidade neurocomportamental induzida pelo BPA, já que o BPA demonstrou alterar tanto a reatividade emocional quanto a atividade locomotora emroedores 2,3. Os resultados locomotores derivados da OFT foram considerados durante a interpretação da imobilidade da FST para minimizar possíveis efeitos de confusão relacionados à atividade motora alterada.

FST: O comportamento semelhante à depressão foi avaliado usando o teste de natação forçada no dia 32, precedido por uma sessão pré-teste de 15 minutos realizada 24 horas antes. Os ratos eram colocados individualmente em tanques cilíndricos (35 cm de diâmetro, 50 cm de altura) cheios de água (30 cm de profundidade, 25 ± 1 °C) e deixados nadar por 5 minutos. Comportamentos de imobilidade, natação e escalada foram registrados usando uma câmera de vídeo e analisados offline para avaliar o desesperocomportamental 7.

OFT: Comportamentos semelhantes à ansiedade e atividade locomotora espontânea foram avaliados usando o teste de campo aberto no dia 31. Cada rato foi colocado individualmente em uma arena branca de Plexiglas (90 cm x 35 cm) dividida em 24 quadrados iguais e permitido explorar livremente por 5 minutos. Os movimentos eram gravados usando uma câmera de vídeo. O tempo gasto nas zonas centrais e periféricas e o número de cruzamentos com as quatro patas foram quantificados como índices de comportamento e locomoção relacionados àansiedade 8.

Coleta de amostras
No dia 32, os ratos foram profundamente anestesiados com cetamina intramuscular (45 mg/kg) e xilazina (5 mg/kg). A profundidade adequada da anestesia foi confirmada pela ausência do reflexo de retirada do pedal. O sangue foi coletado por punção cardíaca usando uma seringa estéril, e aproximadamente 3-5 mL de sangue foram obtidos de cada animal. A eutanásia foi concluída por exsanguinação sob anestesia profunda. As amostras de sangue foram transferidas para tubos contendo anticoagulantes e centrifugadas a 3.000 x g por 10-15 minutos a 4 °C. O plasma separado foi aliquotado e armazenado a −80 °C até análise bioquímica.

O hipocampo e o hemisfério cerebral esquerdo foram rapidamente dissecados, pesados, congelados rapidamente em nitrogênio líquido e armazenados a −80 °C para análises bioquímicas subsequentes, enquanto o hemisfério cerebral direito foi fixado em formalina tamponada neutra a 10% para avaliações histopatológicas e imunohistoquímicas. Para garantir consistência metodológica e minimizar a variabilidade entre amostras, o hemisfério esquerdo foi sistematicamente alocado para medições bioquímicas e o hemisfério direito para análises morfológicas em todos os animais. Importante destacar que a fixação de formol foi estritamente limitada a tecidos designados para procedimentos histológicos e imunohistoquímicos, e nenhum tecido fixo foi usado para ensaios bioquímicos baseados em proteínas, prevenindo assim a degradação proteica relacionada à fixação. Para avaliações bioquímicas, quantidades definidas de tecido cerebral congelado (tipicamente 50-100 mg por ensaio) foram homogeneizadas usando tampões de homogeneização específicos do ensaio e proporções padronizadas de tecido para tampão de acordo com os requisitos de cada parâmetro bioquímico. Todas as análises foram realizadas usando quantidades iguais em tecido em cada ensaio entre os grupos experimentais.

A concentração total de proteínas em homogeneados teciduais foi determinada por meio de um ensaio proteico fluorométrico conforme as instruções do fabricante. Todos os parâmetros bioquímicos foram medidos usando concentrações padronizadas e iguais de proteína em cada ensaio para garantir comparabilidade entre amostras e grupos experimentais.

Avaliação dos parâmetros de estresse oxidativo
A peroxidação lipídica foi avaliada medindo os níveis de MDA usando o método de substâncias reativas do ácido tiobarbitúrico (TBARS) em amostras de plasma etecido 7. Níveis reduzidos de tiol (RSH) e GSH foram determinados espectrofotometricamente usando ensaios baseados em 5,5′-ditiobi (2-ácido nitrobenzoico) (DTNB) 7. Os níveis totais de óxido nítrico (NO) em homogeneados de plasma e tecido foram medidos usando a reação de Griess após a reduçãodo nitrato 7. Todos os parâmetros bioquímicos são expressos como proteína nmol/g ou tecido μmol/g, conforme indicado nas Figuras 3 e 4. Todos os ensaios bioquímicos foram realizados em duplicado, e os valores médios foram usados para análise estatística.

Além das análises de tecido cerebral, estimativas bioquímicas foram realizadas em amostras de sangue para avaliar o status oxidativo sistêmico induzido pela exposição ao BPA. Os níveis de peroxidação lipídica plasmática foram determinados pelo método TBARS, e os resultados foram expressos como equivalentes a MDA. Níveis reduzidos de sulfhidril (RSH) foram medidos usando DTNB, e os níveis totais de NO foram avaliados usando a reação de Griess após a redução do nitrato, conforme descritoanteriormente 7. Os valores de absorvância foram registrados espectrofotometricamente em 532 nm (TBARS), 412 nm (RSH) e 540 nm (NO). Todos os ensaios foram realizados em duplicado sob condições padronizadas.

O BPA é um tóxico ambiental onipresente que entra na circulação sistêmica e exerce efeitos multiorgânicos; portanto, marcadores circulantes de estresse oxidativo fornecem informações complementares que refletem o desequilíbrio redoxgeral 1,2. A avaliação de parâmetros bioquímicos baseados no sangue permite avaliar a relação entre alterações oxidativas centrais e periféricas e aumenta a relevância translacional dos achados, já que tais marcadores são comumente usados em estudos ambientais e clínicos para monitorar a toxicidade relacionada à exposição.

Análise do Western blot
A análise de Western blot foi realizada para determinar os níveis de proteínas Keap-1 e Nrf-2 no tecido hipocampal. Aproximadamente 50 mg de tecido foram homogeneizados em 500 μL de buffer RIPA contendo um coquetel inibidor de protease. Homogenados foram centrifugados a 14.000 x g por 10 minutos a 4 °C, e os supernadantes foram coletados. As concentrações de proteínas foram determinadas usando um ensaio de quantificação fluorométrica de proteínas, conforme as instruções do fabricante, e as concentrações foram calculadas a partir de uma curva de calibração padrão. Quantidades iguais de proteína (30 μg) foram misturadas com tampão de Laemmli contendo β-mercaptoetanol, aquecidas a 95 °C por 5 minutos, separadas em géis SDS-PAGE a 10% e transferidas para membranas PVDF a 110 V por 60-90 minutos. As membranas foram bloqueadas com 3% de BSA e incubadas durante a noite a 4 °C com anticorpos primários contra Keap-1 e Nrf-2 (1:3000) e β-actina (1:1000), seguidas pela incubação com anticorpos secundários conjugados com HRP. As bandas proteicas foram visualizadas por quimioluminescência, e as intensidades das bandas foram quantificadas por análise densitométrica e normalizadas para β-actina.

Análise histopatológica
Amostras de tecido cerebral do hemisfério direito foram fixadas em formalina tampão neutro a 10% por 72 horas, desidratadas por séries de etanol graduado, eliminadas em xileno e incorporadas em parafina segundo procedimentos histológicospadrão 9. Tecidos frescos foram reservados para análises bioquímicas. As seções coronais (5 μm) foram obtidas nos níveis do córtex hipocampal e entorhinal com base em um atlas cerebralde rato 10. Quatro seções consecutivas por animal foram montadas em lâminas de vidro para avaliações histológicas e imunohistoquímicas, garantindo espessura consistente das seções e localização anatômica. As seções foram desparafinizadas, reidratadas e coradas com hematoxilina e eosina (H&E) seguindo os protocolos de coloraçãorotineiras 11. O exame histopatológico foi realizado sob microscopia óptica por um único observador treinado, cegamente cegado, para os grupos experimentais para minimizar o viés e eliminar a variabilidade entre observadores.

Análise imunohistoquímica
Regiões de interesse, incluindo hipocampo e córtex entorrinal, foram selecionadas com base em sua vulnerabilidade à neurotoxicidade induzida pelo BPA e seus papéis na regulação cognitiva eemocional 1,2. A coloração imunohistoquímica para Nrf-2 e Keap-1 foi realizada em seções cerebrais embutidas em parafina. As seções foram desparafinizadas em xileno, reidratadas por séries graduadas de etanol e submetidas à recuperação de antígeno induzida por calor em tampão de citrato (pH 6,0). A atividade endógena da peroxidase foi extinta antes da incubação.

As seções foram incubadas durante a noite a 4 °C com anticorpos primários contra Nrf-2 (1:100) e Keap-1 (1:200). A detecção foi realizada usando um sistema de detecção de HRP à base de polímero, comercialmente disponível e pronto para uso, contendo anticorpos secundários específicos de espécie conjugados à peroxidase de raiz-forte, conforme as instruções do fabricante. A imunorreatividade foi visualizada usando 3,3′-diaminobenzidina (DAB) como cromógeno, seguida de contracoloração com hematoxilina. Trechos foram desidratados, limpos e cobertos por escorregamento.

As seções controle negativas foram processadas em paralelo, sem incubação primária de anticorpos. Para análise quantitativa, três seções não adjacentes por animal foram avaliadas. As imagens foram adquiridas sob configurações idênticas de exposição para todos os grupos. Dezesseis campos não sobrepostos por seção foram analisados usando o software ImageJ. As regiões de interesse foram delimitadas manualmente, a coloração de fundo foi subtraída e a imunorreatividade foi expressa como valor cinza médio. O valor médio por animal foi calculado e utilizado para análise estatística.

Pontuação histopatológica
Alterações histopatológicas foram avaliadas semi-quantitativamente em seções coloridas com H&E. Dez campos selecionados aleatoriamente, não sobrepostos por seção, foram examinados e parâmetros patológicos foram pontuados de forma independente. A gravidade do dano no hipocampo e no córtex entorinal foi avaliada usando uma escala de quatro pontos baseada na proporção de células afetadas: pontuação 0 (<5%), pontuação 1 (≤ um terço), pontuação 2 (um terço a dois terços) e pontuação 3 (> dois terços). As médias de escores por animal foram usadas para análise estatística.

Análise estatística
Os dados foram analisados usando o software SPSS (versão 29.0) e são apresentados como média ± desvio padrão (SD). O tamanho da amostra foi determinado com base em estudos anteriores e análise de potência, indicando que seis animais por grupo fornecem >80% de poder para detectar diferenças biologicamente relevantes. A normalidade da distribuição dos dados foi avaliada usando o teste de Shapiro-Wilk. A homogeneidade das variâncias foi avaliada usando o teste de Levene. Comparações em grupo foram realizadas usando análise unidirecional da variância (ANOVA), seguidas pelo teste post hoc de Tukey. A significância estatística foi definida em p < 0,05.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Peso corporal
Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas no peso corporal entre os grupos nos dias 1 e 32 do estudo (F(3,20)=2,750, p > 0,05; Figura 2).

Resultados do teste comportamental
A análise de teste em campo aberto revelou que a exposição ao BPA reduziu significativamente a atividade locomotora, como indicado por uma diminuição do número de cruzamentos e...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

O presente estudo avaliou os efeitos do BPA, um componente estrutural dos plásticos de policarbonato considerado seguro pela USEPA em uma dose de 50 μg/kg 1,2, sobre o estresse oxidativo, sinalização do Keap-1/Nrf-2, comportamento e alterações histopatológicas no cérebro do rato. Além disso, os potenciais efeitos neuroprotetores do TQ, um composto natural com propriedades antioxidantes bem documentadas, foram investigados em duas...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Agradecimentos

Este projeto foi apoiado pelo Escritório de Coordenação de Projetos de Pesquisa Científica da Universidade (número do projeto TIP. A4.24.003).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
5,5'-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid)Thermo Scientific  69-78-3 
Benchtop centrifuge NF048Nüve43560
Beta_Actin ThermoFisher Scientific, United States7D2C10
Bisphenol AMerck239658
BSA solution  Proteintech, United States)66201-1-Ig
Butylated hydroxytolueneSigma Aldrich128-37-0
Dijital Homojenizatör Daihan Scientifichttps://www.artlaboratuvarcih
azlari.com/urun/daihan-hg-
15d-dijital-homojenizator-set
-a?srsltid=AfmBOorx_az06ulc
HpSzKZsuP8-47Za4BkvLOM2
2Xhp00tgwWhJ-86Vc
Hematoxylin–eosin Bio OpticaW01030708
Hydrochloric acidMerck7647-01-0
Image J software program NIH; Washington, U.S.A.https://imagej.net/ij/
Immunohistochemical staining kit Lab VisionTM UltraVisionTM Large Volume Detection System: anti-polyvalentHRP, TA-125-HL
Leica Autocut 14051956472Germanyhttps://www.leicabiosystems.
com/histology-equipment/mic
rotomes/histocore-autocut/
Light microscope Nikon, Eclipse Ni-U, 940728
N-(1-Naphthyl)ethylenediamineThermo Scientific 1465-25-4
Nano Microplate ReaderBMG LABTECHSPECTROstar Nano
phosphate-buffered saline MerckP4417
Primary antibodies Keap-1 ProteintechCat No. 10503-2-AP, 1:200
Primary antibodies Nrf-2 ProteintechCat No. 16396-1-AP, 1/100
Qubit Protein BR Assay Kit ThermoFisher Scientific-INVITROGENQ33211
sodium citrateMerck03-04-6132
Sodium Dodecyl SulfateThermo Scientific 151-21-3
sodium hydroxideMerck1310-73-2
Sodium nitrateMerck7631-99-4
Streptavidin Peroxidase Thermo Scientific SHRP248-B
sulfanilamideThermo Scientific  63-74-1 
thiobarbituric acid Merck504-17-6
TQ CAYMAN 490-91-5
Tricarballylic acid, 99%Thermo Scientific Chemicals 139360500
Trichloroacetic acidThermo Scientific Chemicals76-03-9
Tris-HClThermo Scientific  1185-53-1 
Vanadium(III) chlorideSigma Aldrich7718-98-1
West Pico PLUS Chemiluminescent Substrate and the iBright 750 Thermo Fisher Scientific systemhttps://www.clinxsci.com/product/mini
_chemiluminescence_imaging_system
?gad_source=1&gad_campaignid=
16224184202&gbraid=0AAAAAoN6
UOOtoB8UD0deumBAMD8Xi-1l-&g
clid=CjwKCAjwgeLHBhBuEiwA
L5gNEXtK2CNSLS1GqllMuNgkrFYD
aW7yK585njQjFja485Fkwj9lRUEKD
BoCgLoQAvD_BwE
Zinc sulfate solutionMerck7733-02-0

Referências

  1. Castillo, L. Y., et al. Juvenile exposure to BPA alters the estrous cycle and differentially increases anxiety-like behavior and brain gene expression in adult male and female rats. Toxics. 10, 513 (2022).
  2. Fan, Y., et al. Preconception paternal bisphenol A exposure induces sex-specific anxiety and depression behaviors in adult rats. PLoS One. 13, e0192434 (2018).
  3. Sevastre-Berghian, A. C., et al. Neurotoxicity of bisphenol A and the impact of melatonin administration on oxidative stress, ERK/NF-?B signaling pathway, and behavior in rats. Neurotoxicol Res. 40, 1882-1894 (2022).
  4. Elswefy, S. E., et al. Inflammation, oxidative stress and apoptosis cascade implications in bisphenol A-induced liver fibrosis in male rats. Int J Exp Pathol. 97, 369-379 (2016).
  5. Dong, J., et al. Thymoquinone prevents dopaminergic neurodegeneration by attenuating oxidative stress via the Nrf2/ARE pathway. Front Pharmacol. 14, 615598 (2021).
  6. Fadishei, M., et al. Effects of Nigella sativa oil and thymoquinone against bisphenol A-induced metabolic disorder in rats. Phytother Res. 35, 2005-2024 (2021).
  7. Kuzay, D., et al. Effects of thymoquinone in a rat model of reserpine-induced depression. Braz J Pharm Sci. 58, e19847 (2022).
  8. Brocardo, P. S., et al. Anxiety- and depression-like behaviors are accompanied by an increase in oxidative stress in a rat model of fetal alcohol spectrum disorders: Protective effects of voluntary physical exercise. Neuropharmacology. 62, 1607-1618 (2012).
  9. Bancroft, J. D., Gamble, M. . Theory and Practice of Histological Techniques. , (2013).
  10. Paxinos, G., Watson, C. . The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2022).
  11. Klopfleisch, R. Multiparametric and semiquantitative scoring systems for the evaluation of mouse model histopathology. BMC Vet Res. 9, 123 (2013).
  12. Helli, B., et al. The protective effects of syringic acid on bisphenol A-induced neurotoxicity possibly through AMPK/PGC-1?/FNDC5 and CREB/BDNF signaling pathways. Mol Neurobiol. 61, 7767-7784 (2024).
  13. Lotfi, M., et al. Thymoquinone improved nonylphenol-induced memory deficit and neurotoxicity through its antioxidant and neuroprotective effects. Mol Neurobiol. 59, 3600-3616 (2022).
  14. Hatipoglu, D., et al. Neuroprotective role of Nigella sativa seed oil in mitigating bisphenol A-induced neurodegeneration. Sci Rep. 15, 22477 (2025).
  15. Kobayashi, K., et al. Effects of bisphenol A on oxidative stress in the rat brain. Antioxidants (Basel). 9, 240 (2020).
  16. Elbakry, M., et al. Nattokinase attenuates bisphenol A- or gamma irradiation-mediated hepatic and neural toxicity by activation of Nrf2 and suppression of inflammatory mediators in rats. Environ Sci Pollut Res Int. 29, 75086-75100 (2022).
  17. Tekin, S., et al. Molecular insights into the antioxidative and anti-inflammatory effects of p-coumaric acid against bisphenol A-induced testicular injury: In vivo and in silico studies. Reprod Toxicol. 125, 108579 (2024).
  18. Sahu, C., et al. Zinc-deficient diet increases the toxicity of bisphenol A in rat testis. J Biochem Mol Toxicol. 34, e22549 (2020).
  19. Hua, D., et al. Tetramethyl bisphenol A inhibits Leydig cell function in late puberty by inducing ferroptosis. Ecotoxicol Environ Saf. 236, 113515 (2022).
  20. Okoh, O. S., et al. Thymoquinone inhibits neuroinflammatory mediators and vasoconstriction injury via NF-?B-dependent NeuN/GFAP/Ki-67 pathways in hypertensive dams and F1 male pups exposed to bisphenol A analogues. Toxicol Appl Pharmacol. 494, 117162 (2025).
  21. Abdel-Wahab, W. M. Thymoquinone attenuates toxicity and oxidative stress induced by bisphenol A in the liver of male rats. Pak J Biol Sci. 17, 1152-1160 (2014).
  22. Abu-Elfotuh, K., et al. Protective effects of thymoquinone and/or thymol against monosodium glutamate-induced ADHD-like behavior in rats: Modulation of Nrf2/HO-1, TLR4/NF-?B/NLRP3/caspase-1 and Wnt/?-catenin pathways. Biomed Pharmacother. 155, 113799 (2022).
  23. Qadri, M., et al. Thymoquinone ameliorates carfilzomib-induced renal impairment by modulating oxidative stress markers, inflammatory/apoptotic mediators, and augmenting Nrf2 in rats. Int J Mol Sci. 24, 10621 (2023).
  24. Patisaul, H. B., Bateman, H. L. Neonatal exposure to endocrine-active compounds or an ER? agonist increases adult anxiety and aggression in gonadally intact male rats. Horm Behav. 53, 580-588 (2008).
  25. Singh, S. P., et al. Evaluation of p21 expression and related autism-like behavior in bisphenol A-exposed offspring of Wistar albino rats. Birth Defects Res. 114, 536-550 (2022).
  26. Elkader, H. T. E., et al. Perinatal bisphenol A exposure has age- and dose-dependent associations with thyroid allostasis and anxiogenic-depressive-like behaviors in male rats. Physiol Behav. 288, 114732 (2025).
  27. Morin, A., et al. Adult male rats show resilience to adolescent bisphenol A effects on hormonal and behavioral responses, while co-exposure with hop extracts supports synergistic actions. Front Toxicol. 3, 639820 (2021).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Etiquetas

Neuroprote o por TimoquinonaNeurotoxicidade do Bisfenol ASinaliza o Keap 1 Nrf 2Comprometimento ComportamentalPeroxida o Lip dicaAntioxidante GlutationaDano HipocampalC rtex CerebralDesregulador End crino Ambiental
Entre em contato
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.