Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Clínica da Universidade Ordu (Aprovação nº: 09/11/2017–138). O estudo foi conduzido de acordo com as diretrizes éticas institucionais e nacionais relevantes, incluindo a Declaração de Helsinque. Foi obtido consentimento informado por escrito de todos os participantes incluídos no estudo. O consentimento obtido cobre explicitamente a realização de visitas domiciliares e a coleta de amostras de poeira doméstica de residências.
1. Desenho do estudo
Este é um estudo transversal e descritivo da prevalência do ácaro-do-poeira doméstico realizado na província de Ordu, Turquia. Amostras de poeira doméstica foram coletadas de superfícies internas específicas onde o acúmulo de ácaros é comumente esperado. A amostragem foi realizada em colchões, materiais de cama (travesseiros e colchas), tapetes e móveis estofados localizados em quartos e salas de estar. A poeira era coletada com um aspirador portátil, e amostras de diferentes locais dentro da mesma casa eram agrupadas para formar uma amostra composta de poeira doméstica.
2. Definição de população e coorte clínica do estudo
A população do estudo é composta por indivíduos que visitaram as Clínicas de Otorrinolaringologia e Clínica Ambulatorial de Medicina Interna do Hospital de Educação e Pesquisa da Faculdade de Medicina da Universidade Ordu devido a asma e/ou queixas alérgicas. Os critérios de inclusão para os participantes foram ter 18 anos ou mais, consentirem com a coleta de amostras de poeira do ambiente doméstico e concordarem em responder ao questionário. Indivíduos que não consentiram com uma visita domiciliar, não forneceram consentimento por escrito ou para quem não foi possível obter amostras suficientes de poeira doméstica foram excluídos do estudo. Os diagnósticos clínicos foram avaliados com base nos relatos dos pacientes e nos motivos das visitas ambulatoriais; Nenhuma verificação clínica ou exame diagnóstico foi realizado. Cada paciente foi pareado com um domicílio, e as análises foram realizadas em nível domiciliar. A Província de Ordu está localizada na região oriental do Mar Negro, na Turquia, e apresenta um clima úmido e temperado, com alta umidade durante todo o ano, condições que podem favorecer a sobrevivência e proliferação dos ácaros-do-pó doméstico.
3. Unidade de amostragem e método de amostragem
A principal unidade de amostragem deste estudo foi a residência. Múltiplas amostras de subpoeira foram obtidas em diferentes locais internos dentro de cada residência, com foco especial em quartos e áreas de convivência. Embora essas subamostras tenham sido coletadas separadamente, elas foram agrupadas e analisadas como uma única amostra composta de poeira doméstica no laboratório para representar a exposição geral a ácaros internos. Para estimar a densidade de ácaros, aproximadamente 1 g de poeira de cada amostra composta doméstica foi processada usando o método de precipitação do ácido lático. Todos os ácaros observados nas lâminas microscópicas preparadas derivadas dessa amostra de poeira foram contados. O número total de ácaros detectados foi então expresso como o número de ácaros por grama de pó doméstico.
Cada domicílio foi amostrado apenas uma vez, e nenhuma amostragem repetida foi realizada. As amostras de poeira doméstica foram coletadas usando sacos descartáveis designados para cada área de amostragem e um aspirador portátil com potência de sucção de 1200 W. A amostragem foi realizada a uma taxa padronizada de aproximadamente 2 min/m2 para garantir consistência e reprodutibilidade em todos os domicílios.
4. Procedimentos laboratoriais e identificação de ácaros
Uma vez que as amostras eram levadas ao laboratório, eram peneiradas para remover partículas grossas. As amostras foram examinadas pelo método de precipitação do ácido lático. O método de precipitação do ácido lático foi usado para clarificar amostras de poeira dissolvendo detritos orgânicos, facilitando a separação e visualização dos ácaros e possibilitando detecção microscópica confiável e identificação morfológica. Um grama de poeira doméstica foi adicionado a 5 mL de ácido lático 90% em tubos de ensaio. Os tubos foram cuidadosamente misturados e incubados por 1 hora. Após a incubação, amostras coletadas tanto da superfície quanto do fundo do líquido eram montadas entre uma lâmina e uma capa de cobertura e examinadas sob microscópio óptico em ampliações de 100×, 200× e 400×ampliações 15. A identificação de espécies foi posteriormente realizada em amostras de poeira nas quais ácaros foram detectados.
Amostras em que ácaros foram detectados foram definidas como "positivas para ácaros". A presença de pelo menos um ácaro em qualquer estágio de desenvolvimento (larva, ninfa ou adulto) em uma residência foi considerada suficiente para que a residência fosse considerada positiva para ácaros. Para identificação de espécies em amostras positivas, ácaros visíveis sob um estereoscópio foram coletados usando uma agulha de seringa de insulina de ponta fina após filtração do sobrenadante em papel de filtro e montados no meio de Hoyer. Os espécimes preparados foram examinados ao microscópio óptico para identificação morfológica. As análises estatísticas foram realizadas usando softwares de análiseestatística 16,17,18,19,20. Os espécimes foram identificados com espécie, gênero ou níveis taxonômicos superiores, dependendo do estágio de desenvolvimento e da disponibilidade de características diagnósticas. Dermatophagoides spp. inclui estágios larval, protoninfo e deutoninfa que não puderam ser identificados de forma confiável para o nível da espécie. Oribatida representa ácaros identificados no nível da ordem. Larvas e ninfas não identificadas referem-se a espécimes imaturos, e imago não identificados a espécimes adultos, que não puderam ser classificados taxonômicamente devido a características morfológicas insuficientes ou danificadas. O número total representa a contagem cumulativa de todos os indivíduos de ácaros detectados em amostras positivas.
5. Aplicação da pesquisa e definições de variáveis
Foi aplicada aos participantes uma pesquisa contendo perguntas sobre características demográficas, estrutura habitacional, fatores ambientais e queixas alérgicas. Os dados foram avaliados com base nas declarações dos participantes e não foram clinicamente verificados.
6. Análise estatística
A associação entre variáveis categóricas foi examinada usando o teste qui-quadrado, e a mudança na densidade de ácaros de acordo com características demográficas e vitais foi examinada usando os testes Mann-Whitney U ou Kruskal-Wallis. A regressão logística binária foi usada para examinar a associação entre a variável dependente (positividade dos ácaros) e as variáveis independentes. Foram calculadas razões de probabilidades (ORs) com intervalos de confiança (IC) de 95%.