É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de investigação
A porta poligonal (PGG) e a porta cruciforme (CFG) são métodos de citometria de fluxo para detectar a integridade do DNA do espermatozoide. O PGG mede o índice de fragmentação do DNA (DFI) e o alto índice de coloração do DNA (HDS). O CFG relata DFI severo, DFI leve e DFI geral. Este estudo tem como objetivo comparar os resultados e as correlações entre eles.
A integridade do DNA do esperma é um fator chave para garantir o sucesso da fertilização, desenvolvimento embrionário e gravidez contínua. A avaliação da estrutura da cromatina espermática (SCSA), utilizando citometria de fluxo após desnaturação do DNA e coloração de laranja acridina é considerada o método padrão ouro para avaliar o DNA do espermatozoide. Duas estratégias de gate para avaliação baseada em citometria de fluxo do índice de fragmentação do DNA do esperma (DFI) foram relatadas na literatura: gating poligonal (PGG) e gating cruciforme (CFG). O objetivo do presente estudo foi comparar as relações dos resultados do ensaio entre PGG e CFG, e analisar suas correlações com parâmetros da análise básica de sêmen. Os dados obtidos independentemente pelos dois métodos foram comparados por análise estatística, incluindo gráficos de Bland-Altman e análise de regressão. Um total de 121 pacientes ambulatoriais masculinos submetidos à avaliação de fertilidade no centro reprodutivo do nosso hospital foram selecionados por meio de um método de amostragem completamente aleatória. A DFI do esperma e indicadores relacionados foram detectados por citometria de fluxo usando PGG e CFG, respectivamente. Os resultados demonstraram que os valores de DFI obtidos dos dois métodos mostraram boa concordância. Os coeficientes de correlação entre DFIp do método PGG e DFIm, DFIs e DFIc do método CFG foram 0,6497, 0,9404 e 0,9667, respectivamente (todos p < 0,01). O alto índice de coloração de DNA (HDS) mostrou uma leve correlação negativa com DFIs (r = -0,3042, p < 0,05). A porcentagem de espermatozoides progressivamente móveis foi negativamente correlacionada com DFIp, DFIs e DFIc (r = -0,3824, -0,3794, -0,3574, respectivamente, todos p < 0,05). Não foi observada correlação significativa entre HDS e volume de sêmen, concentração de espermatozoides, contagem total de espermatozoides ou PR (%). Esses achados indicam que os DFIs estão mais intimamente associados à fertilidade masculina, sugerindo que o método CFG, que fornece esse parâmetro, pode ser mais adequado para avaliação clínica de danos ao DNA do esperma.
Integridade do DNA do esperma refere-se à integridade e estabilidade funcional da estrutura molecular do DNA no núcleo do espermatozoide. Especificamente, é caracterizado por conformação normal da cromatina, sequências de bases intactas sem quebra ou dano oxidativo, e capacidade de transmitir informações genéticas com precisão para a prole. Durante a espermatogênese, quando o estresse oxidativo aumenta1, a remodelação da cromatina éanormal 2, ou o espermatozoide é afetado por toxinasambientais 3, a integridade do DNA do esperma será danificada, resultando em desco....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Médica do Hospital Afiliado Huai'an First People's Hospital da Universidade Médica de Nanjing (Número de aprovação: KY-2024-181-01). Foi obtido consentimento informado dos pacientes cujas amostras foram usadas neste estudo. Diagrama esquemático geral do fluxo de trabalho apresentado na Figura 1. Os detalhes dos reagentes e equipamentos utilizados estão descritos na Tabela de Materiais.
Configurações do CFG para o citômetro de fluxo
Após o tratamento ácido, a cromatina nuclear dos espermatozoides ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Entre os 121 participantes do estudo (idade média: 32,5 ± 4,9 anos; faixa de 26–44 anos), 28 foram diagnosticados com astenozoospermia e 4 com oligozoospermia. As características demográficas de base e os parâmetros da análise de sêmen são resumidos na Tabela 1.
Como demonstrado na Figura 4, o gráfico de Bland-Altman revelou que os resultados DFI de espermatozoides obtidos pelos métodos PGG e CFG apresentaram exce.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
A 6ª edição do Manual de Laboratório da OMS para o Exame e Processamento do SêmenHumano 12 recomenda quatro métodos para avaliar a integridade do DNA do espermatozoide: marcação terminal de desoxinucleotidila transferase (dUTP) por ponta de corte (TUNEL), ensaios de eletroforese em gel unicelular (Comet), SCSA e teste de dispersão da cromatina espermática (SCD). Entre eles, o SCSA foi amplamente adotado em laboratórios de andrologia devido ao uso da citometria de .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Os autores não têm nada a revelar.
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sistema de análise de esperma assistido por computador | Beijing Suijia Software Co., Ltd | SA-II | |
| Citômetro de fluxo | Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd | Cyto E6 | |
| Kit de citometria de fluxo | Shenzhen BRED Biotechnology Co., LTD | ||
| Câmara de contagem Makler | Sefi Medical Instruments | ||
| Kit de integridade do DNA do núcleo do esperma | Shenzhen BRED Biotechnology Co., LTD | - |
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.