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Artigo de método
Este protocolo descreve um modelo in utero. fetal de cordeiro obstrução do fluxo mitral, utilizando restrição do fluxo auricular esquerdo baseada em balão para induzir fisiologia semelhante à síndrome do coração esquerdo hipoplásica, com monitoramento hemodinâmico contínuo e técnicas refinadas de implantação com balão auricular esquerdo.
A síndrome hipoplásica do coração esquerdo (HLHS) é um defeito cardíaco congênito grave caracterizado pelo subdesenvolvimento do ventrículo esquerdo (VE), da válvula mitral, da válvula aórtica e da aorta ascendente. Baseado na teoria do "sem fluxo, sem crescimento", este protocolo descreve um modelo fetal reprodutível de ovelhas que restringe o fluxo mitral para prejudicar o crescimento do VE no útero. Por volta dos 120 dias de gestação, são realizadas laparotomias maternas e histerotomias, seguidas pela toracotomia fetal esquerda. Um cateter balão é introduzido no átrio esquerdo (LA), deixado esvaziado na cirurgia e, posteriormente, inflado a partir aproximadamente do terceiro dia pós-operatório para restringir o fluxo mitral até que o fluxo antegrado na aorta ascendente seja marcadamente reduzido ou abolido, conforme comprovado por uma sonda de fluxo após a recuperação materna. As mudanças hemodinâmicas são monitoradas continuamente por meio da pressão arterial carótida fetal e de uma sonda de fluxo aórtico ascendente. Fetos são mantidos por até três semanas e passam por necropsia. Passos críticos incluem a colocação e fixação não traumática da sonda de fluxo aórtico e do balão LA no feto frágil, bem como a prevenção meticulosa da perda de líquido amniótico antes e após o fechamento uterino. Esse modelo oferece uma plataforma para investigar mecanismos de HLHS, validar biomarcadores de imagem, avaliar intervenções terapêuticas pré-natais ou perinatais e orientar o desenvolvimento de estratégias preventivas.
A síndrome hipoplásica do coração esquerdo (HLHS) é uma forma grave de doença cardíaca congênita caracterizada pelo subdesenvolvimento das estruturas do coração esquerdo e daaorta 1. Como o pequeno ventrículo esquerdo (VE) não suporta a perfusão sistêmica, a circulação passa a depender do ventrículo direito, resultando em uma fisiologia de ventrículo único. Consequentemente, a HLHS normalmente requer uma série de cirurgias cardíacas abertas em etapas.
A etiologia da HLHS é multifatorial, com fatores genéticos 2,3<....
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Esse protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso Institucional de Animais do Instituto de Pesquisa Abigail Wexner do Nationwide Children's Hospital (AR24-00184). Todos os procedimentos seguiram as diretrizes do Guia dos Institutos Nacionais de Saúde para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Este estudo seguiu as diretrizes ARRIVE (Pesquisa Animal: Relato de In Vivo. Experimentos). Ovelhas grávidas de Dorset (65–79 kg, 117–120 dias de gestação) foram alojadas em um ambiente específico livre de patógenos, com livre acesso a comida e água por pelo menos 1 semana antes da cirurgia. O equipamento utiliza....
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Desfechos cirúrgicos
Um total de três ovelhas gêmeas passaram por laparotomia e histerotomia. Três fetos (um de cada ovelha) passaram por implantação de balão, enquanto os co-gêmeos atuavam como controles. Os procedimentos foram realizados na idade gestacional de 119 ± 1,4 dia, com peso corporal materno de 73 ± 4,2 kg.
Todos os três fetos experimentais sobreviveram por pelo menos 1 semana sem complicações cirúrgicas.......
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Um modelo fetal de cordeiro de obstrução do fluxo mitral usando um balão inserido no átrio esquerdo (LA) já foi descritoanteriormente 13; No entanto, uma limitação fundamental tem sido a curta duração da restrição de entrada mitral. Períodos mais longos de entrada ventricular esquerda (VV) restringida têm sido sugeridos induzir mudanças mais pronunciadas semelhantes aoHLHS 8,13. Portanto,.......
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Os autores declaram não haver interesses financeiros concorrentes.
Este trabalho foi apoiado pelo Additional Ventures Single Venttricle Research Fund #1284695 (PI: Onohara)
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Sutura 0 Ti-Cron | Covidien | 88863374-62 | Para fixar a bolsa no flanco direito da ovelha |
| 1 Sutura de polissorb | Covidien | CL-932 | Sutura de cordão no útero e fechamento do útero |
| 16 G de cateter intravenoso | BD | 382259 | Para administração de fluidos e medicamentos |
| Seda permanente 2-0 (sem agulha) | Ethicon | A185H | Para a ligadura dos vasos sanguíneos e para fixar cateteres de pressão nos vasos do feto |
| Sutura de seda 2-0 | DemeTECH | SK262026B0P | Fixar os cateteres e cabos na pele fetal e fechar a caixa torácica e a pele fetal |
| 22 G de cateter intravascular | BD | 381423 | Para monitoramento da pressão arterial |
| Sutura de seda 3-0 | Ethicon | K832H | Para fixar os cateteres e cabos na pele fetal |
| 3-0 Vicryl Plus | Ethicon | VCP944H | Fechamento por laparotomia da ovelha |
| Sutura de seda 4-0 | Covidien | GS-64-M | Para suturas de permanência no pericárdio do feto |
| Sonda de fluxo de 6 mm | Transonic System Inc. (ADInstruments) | 6PSS | Para medição do fluxo sanguíneo |
| Sutura Prolene 6-0 | Ethicon | 8805H | Sutura de cordão de bolsa no átrio esquerdo fetal |
| Sutura prolene 7-0 | Ethicon | 8702H | Sutura de cordão na átrio esquerdo fetal e para estancar o sangramento dos tecidos fetais |
| 70% isotopil alchohol | Veterinário de Álamo | 11795782 | Solução de limpeza tópica |
| Cateter de ultrassom Acuson Acunav | Johnson & Johnson | IPX8 | Sonda de ecocardiografia intracardíaca para realizar ecocardiografia transesofágica fetal |
| Ampicilina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Profilaxia antibiótica |
| Atropina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Para prevenir a bradicardia fetal |
| Pinças de tecido de Babcock | Suprimentos médicos NIFTY | 1100-FCP-03 | Para segurar a parede do útero |
| Cateter balão | Feito à mão | Obstruir o fluxo sanguíneo para o ventrículo esquerdo fetal | |
| Agulha de preenchimento blant 18G | Medline | SYR110021Z | Para conectar tubo PVC V8 a cateter de infusão ou conectores macho-macho |
| Agulha Blant 25G | Tecnologias de Infusão SAI | B25-50 | Para conectar tubo de PVC Gilson a cateter de infusão ou conectores macho-macho |
| Braçadeira de pressão arterial | Pilips Reais | 989803000000 | Monitoramento não invasivo da pressão arterial |
| Buprenorfina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Controle pós-operatório da dor: concentração 0,3 mg/mL, dose 0,03 mg/kg |
| Lápis de cautério | Medline | ESRK3002L | Para corte e dissecação usando eletrocauterização |
| Cefazolina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Profilaxia antibiótica |
| Adaptadores de sítio de injeção Heplock Centurion | Medline | HL50LT100 | Para fechar as linhas de pressão e para injeção ou coleta de sangue |
| Chloraprep | BD | 930825 | Antisséptico tópico |
| Ciprofloxacina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Profilaxia antibiótica |
| Pinça para vasos Cooley Bulldog | NAZMED SMS SDN BHD | SMS-05-7237 | Para clampear o átrio esquerdo fetal |
| Simulador e testador de transdutor DELTA-CAL | ADInstruments | MLA6595 | Simulador/testador de transdutor de pressão |
| Eletrodos de ECG | 3M | 2570 | Monitoramento de ECG |
| Trompa endotraqueal, tamanho 8-9 | Covidien | 86452, 86114 ou 86454 | Para garantir a via aérea |
| Unidade de medição de fluxo | Transonic System Inc. (ADInstruments) | TS420 | Para medição do fluxo sanguíneo |
| Bomba Gilson | Gilson. Inc | F155006 | Para infusão contínua e precisa de pequenas quantidades de fluido para fetos |
| Heparina | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Anticoagulante: 1.000 unidades USP/mL |
| Isoflurano | Corporação de Saúde Baxter | Farmácia | Anestésico: dose 1-5% |
| Drapeado de laparotomia com bolsas | Medline | AAMI PB70 | Drapeado estéril |
| Adaptador M/M | Medline | DYNJADAPMM | Adaptador macho-macho para cateteres de pressão |
| Tubo orogástrico | Jorgensen Lab, Inc. | J0348R | Para descompressão do estômago e do rúmen |
| Clamp de tubo plástico ocluente (hemostato) | Saúde Cardinal | X0029XO5ET | Para clampagem tubular dos cateteres de pressão e cateter balão |
| Cloreto de potássio | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Para deter o coração fetal em diástole |
| Sistema PowerLab (interface de instrumento, AMP quad bridge) | ADInstruments | FE224, PLCF1/4 | Registro das pressões, fluxo sanguíneo, frequência cardíaca |
| Kit de cobertura de sonda | Medline | DYNJE5930 | Cobertura estéril da sonda ecocardiográfica |
| Propofol | Fresenius Kabi | Farmácia | Anestésico: concentração 10 mg/mL, dose 20-45 mg/kg/hr |
| Clipe lingual com oxímetro de pulso | Nellcor | PO736 | Para monitoramento de pulsometria |
| Tubo de PVC para bomba Gilson (Laranja/Verde) | Gilson. Inc | F117933 | Para tubos de bomba Gilson |
| Espalhador de costelas para recém-nascidos | República Cirúrgica | 550-020-030 | Para toracotomia fetal |
| Lâmina do bisturi #10 | Bard-Parker | 371610 | Para incisões na pele da ovelha |
| Pentobarbital sódico | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Para a eutanásia de uma ovelha |
| Dispositivo de tunelamento (tubo redondo metálico) | Everbilt | N/A | Para exteriorizar os cabos e cateteres para o flanco da ovelha |
| Fita umbilical | McKesson | 894782 | Ligar o cordão umbilical na necropsia |
| Tubo V8 PVC (micro tubo médico) | Scientific Commodities, Inc. | BB31785-V/8 | Cateter preenchido com líquido para monitoramento de pressão do feto |
| Vecurônio | Hospira Pharmaceuticals | Farmácia | Para prevenir o movimento fetal durante a cirurgia |
| Picareta de veias | Fisher Scientific | 50-19506098 | Para inserir linhas de pressão em recipientes |
| Anel de embarcações | Medline | DYNJVL03 | Para manter a aorta ascendente e a artéria pulmonar principal |
| Cobertor térmico | Jorgensen Lab, Inc. | J1034B | Para manter a temperatura corporal do animal |
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