Este estudo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Médica do Hospital Popular de Heyuan (Número de Aprovação: YXYJLL-SFKJ202461; Data de aprovação: 15 de maio de 2024). O certificado ético foi carregado como um arquivo suplementar. O paciente, pai ou responsável de um menor assinou uma declaração durante o registro afirmando: "Concordo que minhas amostras e dados biológicos clínicos serão usados para pesquisa científica, inovação tecnológica e pesquisa clínica aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Médica após a remoção de informações pessoais identificáveis", e que essa análise não representará riscos adicionais para o paciente e está em conformidade com as regulamentações relevantes. Todos os materiais utilizados neste estudo estão listados na Tabela de Materiais.
Assuntos
Um total de 1.559 pacientes do sexo masculino que visitaram o departamento ambulatorial do Hospital Popular de Heyuan e realizaram testes de HPV entre janeiro de 2021 e dezembro de 2024 foram incluídos no estudo. Os participantes tinham entre 2 e 80 anos (A população do estudo é composta por todos os pacientes do sexo masculino com resultados válidos de teste de ácido nucleico de HPV provenientes de consultas ambulatoriais nesta instituição médica entre 2021 e 2024; O objetivo principal é fornecer uma visão abrangente dos testes de HPV e dos padrões de infecção entre pacientes do sexo masculino na região; Além disso, as vias da infecção por HPV incluem não apenas atividade sexual, mas também atrito ou contato com a superfície da pele e as mucosas, além da transmissão vertical da mãe para a criança. Portanto, não foram impostas restrições de idade, com idade média de (34,2 ± 10,7) anos.
Métodos
Este estudo utilizou um desenho transversal retrospectivo para analisar todos os pacientes do sexo masculino que visitaram o departamento ambulatorial do nosso hospital e fizeram testes de HPV; apenas os resultados iniciais da amostragem foram incluídos para aqueles que passaram por testes repetidos.
Coleção de espécimes
As amostras celulares esfoliadas foram obtidas por clínicos treinados usando escovas estéreis e especializadas. Os locais de coleta incluíam as superfícies dorsal e ventral do pênis, os sulcos coronais interno e externo, a glande peniana, a uretra distal e quaisquer lesões verrugosas visíveis, com a seleção do local determinada com base nos achados individuais do paciente; Após a coleta, as cabeças de escova foram quebradas em uma solução dedicada para preservação de amostras. Condições de preservação da amostra: Após a amostragem, as amostras eram imediatamente armazenadas em uma geladeira a 2–8 °C, e o teste foi concluído em 3 dias.
Extração de DNA
Após cada amostra ser oscilada e misturada, 200 μL foram adicionados sequencialmente ao reagente de extração ou purificação de ácidos nucleicos. A extração de DNA foi realizada usando tecnologia de esferas magnéticas com o reagente de extração no instrumento totalmente automatizado SP96 de extração de ácidos nucleicos.
Detecção de HPV
O teste de HPV-DNA foi realizado utilizando o kit de detecção de genotipagem do papilomavírus humano (tipo 23), que utiliza uma combinação de amplificação in vitro baseada em PCR e hibridização reversa por DNA por dot blot para genotipagem do HPV. Primers específicos foram desenhados com base nas características genéticas do HPV, e fragmentos-alvo de 23 genótipos de HPV foram amplificados. Os produtos amplificados foram hibridizados com as sondas de tipagem fixadas na membrana, incluindo 17 HR-HPV (HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82) e 6 LR-HPV (HPV6,11,42,43,81,83). Com base na presença ou ausência de sinais de hibridização, foi determinado o status de infecção desses genótipos de HPV. O procedimento laboratorial específico envolveu o uso de uma ponta de pipeta filtrada para adicionar 5 μL de DNA extraído à mistura da reação PCR, elevando o volume total para 25 μL. Posteriormente, foi realizada amplificação por PCR. Após a amplificação, todos os produtos amplificados foram adicionados ao hibridizador isotérmico contendo tiras de membrana para hibridização colorimétrica. Após a conclusão do desenvolvimento de cor, os resultados podem ser interpretados.
Análise estatística
O software SPSS 23.0 era utilizado para análise estatística. Os dados de contagem foram expressos como número de casos (n) e porcentagem (%). A comparação entre grupos foi realizada pelo teste χ2 . P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Entre os 23 genótipos de HPV, a positividade para qualquer genótipo individual indica infecção por HPV; positividade para apenas um genótipo indica uma única infecção; e positividade para dois ou mais genótipos indica infecção múltipla. Infecções múltiplas são ainda classificadas com base no número de genótipos coexistentes em infecção dupla, infecção tripla, infecção quádrupla, infecção pêntupla, infecção hexúplice e superiores." A razão para a frequência total de detecção" foi calculada usando o número total de detecções de genótipo (1.238) como denominador, já que pacientes com múltiplas infecções contribuíram com múltiplos genótipos.