Modelos de Tumores Transplantáveis Clinicamente Relevantes para Estudo do Câncer de Ovário Metastático e Resposta Terapêutica em Camundongos

Resumo

Aqui apresentamos um protocolo passo a passo para estabelecer os modelos de tumor intraperitoneal e intrabursal para estudar a progressão do câncer de ovário, metássase e resposta terapêutica. Além disso, descrevemos como usar imagens in vivo não invasivas à base de luciferase nesses modelos para monitorar a progressão tumoral em camundongos.

Resumo

O câncer de ovário metastático é uma malignidade ginecológica extremamente letal que carece de opções de tratamento eficazes. O desenvolvimento de abordagens terapêuticas clinicamente tradutíveis para pacientes com câncer de ovário depende da compreensão dos fatores que impulsionam a metástase do câncer de ovário. Embora a maioria dos tumores sólidos apresente metástase hematógena, as células do câncer de ovário se espalham principalmente pela via intraperitoneal. Esse processo envolve o descolamento e a eliminação de células cancerígenas do tumor primário para a cavidade peritoneal, que então adquirem propriedades que lhes permitem resistir à anoikis e formar agregados multicelulares. Esses agregados celulares então se ligam e invadem o revestimento mesotelial do peritônio, formando lesões metastáticas. Modelos in vivo clinicamente relevantes são essenciais para entender como fatores celulares e o microambiente tumoral impactam as diferentes etapas do processo metastático e para testar novas estratégias terapêuticas. Dois modelos transplantáveis de tumores de camundongos amplamente utilizados para estudar a metástase e a resposta terapêutica do câncer de ovário são os modelos intraperitoneal e intrabursal. Neste relatório, descrevemos a metodologia passo a passo para estabelecer esses modelos e destacamos suas vantagens e limitações. Além disso, descrevemos como usar imagens bioluminescentes para monitorar a progressão tumoral de forma não invasiva usando esses modelos.

Introdução

Apesar do progresso significativo em nossa compreensão dos fatores que impulsionam a progressão do câncer de ovário, o câncer de ovário continua sendo a segunda malignidade ginecológica mais letal nos Estados^Unidos. Devido à falta de sintomas óbvios e à ausência de marcadores diagnósticos precoces confiáveis, mais de 70% dos pacientes com câncer de ovário apresentam doença metastática avançada no diagnóstico ^2,3. As terapias atuais não são eficazes no tratamento do câncer de ovário metastático e, consequentemente, as taxas de sobrevivência a 5 anos para....

Protocolo

Todos os procedimentos com animais descritos neste protocolo foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais (IACUC) da Universidade de Maryland, Condado de Baltimore (Investigador Principal - Achuth Padmanabhan; Número do protocolo - 1947).  A lista completa de materiais e equipamentos usados neste protocolo e seus números de catálogo são fornecidas na Tabela de Materiais.

1. Preparação de linhagens celulares de câncer de ovário para transplante em camundongos

Nota: Para todos os modelos in vivo descritos neste protocolo, as ....

Resultados

Dados representativos de um modelo de câncer de ovário intraperitoneal usando células OVCAR8 marcadas com luciferase em camundongos nus imunocomprometidos com Foxn1 são mostrados na Figura 4. A expressão estável de luciferase nessas células permitiu o monitoramento longitudinal da progressão tumoral por meio de imagens bioluminescentes não invasivas usando o imager IVIS, conforme descrito na seção III. A injeção intraperitoneal de 5 milhões de células de OVC.......

Discussão

A capacidade de imitar interações complexas entre células tumorais, microambiente e fatores sistêmicos faz dos modelos de camundongos um excelente recurso para estudar a progressão do câncer de^{ovário 12}. Além de avançar nossa compreensão dos fatores que impulsionam a progressão e a metástase do câncer de ovário, modelos de camundongos in vivo também desempenham um papel importante na avaliação pré-clínica de pequenas moléculas e nas estratégias de tratamento para .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Filtro estéril de seringa de 0,22 um, 33mm	Fisher Scientific	09-720-004
Seringa de 1 ml de TB	BD	309659
21G, agulha de 1 polegada	BD	305167
30G, ½ agulha de polegada	BD	305106
Pinça curva de ponta fina de 5 polegadas	Fisher Scientific	1631
6-0 Sutura monofilamentosa absorvível	MaxonTM	6532-11
Swab de álcool (álcool isoprolílico 70%)	Dukal Corp	80003156
Betadina (solução de iodo a 1%)	Produtos Purdue	367618150085
Carprofeno Inj, 50mg/ml	Levafen	RXLEVA50-20INJ
Centrífuga	Eppendorf	5702
D-luciferina	Laboratórios Syd	MB000102-R70170
Micropinças de joalheiro dissecando, ponta fina	Fisher Scientific	08-953E
Pomada para os olhos	Medvet	11897
Tesoura de ponta fina	Fisher Scientific	8940
Bolsa térmica	Sunbeam	731-500
Instrumentos que Dissecam Pinças com Pontas Finas	Fisher Scientific	S08096
Seringa de Insulina 3/10ml	BD	328438
Isofurano	Fluriso	Fluriso250
IVIS	Perkin Elmer	IVISLMIII
Maionese - Suporte de Agulha Reta Heger	Fisher Scientific	08-966
PBS 1X estéril (1X), sem cálcio nem magnésio	Corning	21-040-CV
Aplicadores de ponta de algodão estéril	McKeesson	24-106-1S
Calibre Estéril	Kendall	3033
Almofada/Toalha/Drapeado Estéril, não fenestrada	Henry-Schein	100-9687
Pomada Tripla Antibiótica	Globo	4006-4SL
Tripsina-EDTA (0,25%), fenol vermelho	Gibco	25200-056