Este estudo envolveu apenas materiais vegetais e não incluiu experimentos com seres humanos ou animais. Portanto, não foi necessária aprovação ética. As ferramentas de pesquisa utilizadas neste protocolo estão listadas na Tabela de Materiais.
1. Local experimental
O experimento foi conduzido nas estações de 2023/24 e 2024/25 na Fazenda Experimental da Estação de Pesquisa Hortícola de El-Qassassin, governadoria de Ismailia, Egito (30°53′ N, 31°56′ E), para avaliar a resposta de plantas de funcho (F. vulgare Mill.) à fertilização orgânica e aplicações de bioestimulantes. As condições climáticas durante o período de cultivo (novembro a abril) foram registradas pela Estação Meteorológica de Ismailia. As temperaturas médias mínimas e máximas do ar variaram de 12–18 °C e 22–30 °C, respectivamente, enquanto a umidade relativa variou de 50%–65%. Nenhum evento climático extremo foi registrado durante os períodos experimentais (Figura 1).

Figura 1: Representação esquemática do delineamento experimental em parcelas subdivididas, mostrando os níveis de chá de compostagem atribuídos às parcelas principais e os tratamentos com bioestimulantes alocados nas subparcelas em três repetições. Ct.1, Ct.2 e Ct.3 representam 360, 480 e 600 litros por hectare (ha) aplicados no solo, enquanto F.1, F.2, F.3, F.4 e F.5 representam pulverização foliar com 2 cm³/L de água para cada um dos extratos Controle, Azolla, Spirulina, Nostoc e Chlorella, respectivamente. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
2. Material vegetal
As sementes de funcho foram obtidas do Departamento de Pesquisa de Plantas Medicinais e Aromáticas, Instituto de Pesquisa em Horticultura, Centro de Pesquisa Agrícola, Dokki, Giza, Egito. As sementes foram semeadas em canteiros de viveiro durante a primeira semana de novembro, e as mudas foram posteriormente desbasteadas para uma planta por covão após o estabelecimento.
3. Coleta e análise de solo
Antes da preparação do solo, amostras compostas de solo (profundidade de 0–30 cm) foram coletadas, secas ao ar, peneiradas em peneira de 2 mm e analisadas quanto às propriedades físicas e químicas utilizando protocolos padrão13,14 (Tabela 1).
| Distribuição granulométrica (%) | Classe textural | *M.O. (%) |
| Areia grossa | Areia fina | Silte | Argila | Arenosa | 0,48 |
| 80,65 | 14,06 | 3,8 | 1,49 |
| pH | CE dS/m | PS % | Cátions (meq/L) | Ânions (meq/L) |
| Ca++ | Mg++ | Na+ | K+ | HCO3- | Cl- | SO4 |
| 8 | 0,79 | 28 | 4 | 2,68 | 1,79 | 0,61 | 1,4 | 4,38 | 2,98 |
| *M.O.(%): matéria orgânica |
Tabela 1: Propriedades físicas e químicas do solo experimental. As características incluem distribuição do tamanho das partículas, classe textural, teor de matéria orgânica, pH, condutividade elétrica, porcentagem de saturação e principais cátions e ânions.
4. Configuração experimental
O experimento seguiu um delineamento em parcelas subdivididas com blocos ao acaso completos, com três repetições. Os níveis de chá de composto foram atribuídos às parcelas principais e os tratamentos com bioestimulantes às subparcelas (Figura 2). Cada parcela media 8,4 m2 e continha 24 plantas dispostas em três fileiras (4 m de comprimento), com 70 cm entre fileiras e 50 cm entre plantas dentro das fileiras.
A irrigação por gotejamento foi aplicada usando emissores que forneciam 4 L h⁻1 por touceira durante 1 h a cada dois dias. Para evitar interferência entre os tratamentos, uma leira entre as parcelas foi deixada sem plantio como zona tampão.
Todas as parcelas receberam 24 t ha⁻1 de composto durante o preparo do solo, duas semanas antes do plantio. Os fertilizantes minerais foram aplicados na dose de 50% da dose recomendada (DR): 360 kg ha⁻1 de sulfato de amônio (20,6% N), 240 kg ha⁻1 de superfosfato simples (15,5% P₂O₅) e 120 kg ha⁻1 de sulfato de potássio (48% K₂O). Os fertilizantes nitrogenados e potássicos foram aplicados em três doses iguais com intervalos de 15 dias, enquanto o fertilizante fosfatado foi aplicado em uma única dose básica. Práticas agronômicas padrão foram seguidas durante todo o período de cultivo.

Figura 2: Rendimento de óleo por hectare (kg ha⁻¹) e seu aumento relativo em comparação com o tratamento controle (T1: Ct1 × F1) durante a primeira (S1) e segunda (S2) estações. Ct1 representa o menor nível de chá de compostagem (360 L ha⁻¹), e F1 representa o controle sem pulverização. Os tratamentos são definidos da seguinte forma: T1 (Ct1 × F1), T2 (Ct1 × F2), T3 (Ct1 × F3), T4 (Ct1 × F4), T5 (Ct1 × F5), T6 (Ct2 × F1), T7 (Ct2 × F2), T8 (Ct2 × F3), T9 (Ct2 × F4), T10 (Ct2 × F5), T11 (Ct3 × F1), T12 (Ct3 × F2), T13 (Ct3 × F3), T14 (Ct3 × F4) e T15 (Ct3 × F5). As barras de erro representam os erros padrão da média (SEM). Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
5. Tratamentos com chá de composto
O composto à base de plantas maduras foi extraído em água doce com aeração por 24–48 h. O chá de composto resultante apresentou condutividade elétrica de 1,2–1,6 dS m⁻1 e pH levemente alcalino (7,5–8,0). O chá de composto foi aplicado via irrigação por gotejamento nas doses de 360, 480 ou 600 L ha⁻1 durante um período de 16 semanas, iniciando um mês após a semeadura.
6. Preparação e aplicação do bioestimulante
A biomassa fresca de Azolla caroliniana, Spirulina platensis, Nostoc muscorum e Chlorella vulgaris foi homogeneizada em água destilada na proporção de 1:10 (p/v), filtrada e diluída até uma concentração final de 2 cm3 L⁻1 (aproximadamente 1200 L ha⁻1). Os extratos foram preparados recentemente antes da aplicação e aplicados como pulverizações foliares três vezes durante a estação de crescimento (30, 60 e 90 dias após o plantio), utilizando um pulverizador manual até o escoamento.
7. Dados registrados
Parâmetros de crescimento vegetativo
Seis plantas selecionadas aleatoriamente de cada unidade experimental foram colhidas 65 dias após o plantio. A altura da planta (cm) foi medida desde a base até a ponta do caule principal. O peso fresco total da matéria verde (g) e o peso seco (g) foram registrados, sendo o peso seco determinado após secagem em estufa a 70 °C por 48 h até atingir peso constante. O número de ramos por planta foi calculado como o número médio entre as plantas amostradas.
Extração do óleo essencial (EO)
Óleo essencial foi extraído de 40 g de frutos colhidos utilizando hidrodestilação por 3 h, seguindo o método descrito por Miller15. O óleo extraído foi deixado em repouso para garantir separação completa16.
Determinação do teor e rendimento de óleo essencial
O teor de óleo essencial (% p/p) foi calculado como:

Onde:
WEO = peso do óleo essencial extraído (g)
Wsample = peso seco da amostra vegetal submetida à hidrodestilação (g)
O rendimento de óleo essencial por planta foi calculado como:

Onde:
DWplant = peso seco da planta inteira por planta (g)
EO content = porcentagem de óleo essencial com base no peso seco (% p/p)
Observação: A densidade do óleo essencial foi considerada aproximadamente 1 g cm⁻3, permitindo a conversão de gramas para centímetros cúbicos.
O rendimento de óleo essencial por hectare foi calculado como:

Onde:
rendimento de OEpor planta - 1 = rendimento de óleo essencial por planta (cm3)
Nplantas = número de plantas por hectare
1000 = fator de conversão de cm3 para L
Observação: Todos os cálculos de rendimento de óleo foram baseados na matéria seca para evitar a variabilidade associada ao teor de umidade da planta.
Atributo de rendimento
O número de umbelas por planta foi registrado na fase de amadurecimento dos frutos, contando-se todas as umbelas em cada planta.
8. Análise estatística
Para cada característica e estação, as observações em nível de repetição foram testadas quanto à normalidade utilizando o teste de Shapiro–Wilk. Como não foram observados desvios significativos da normalidade (p > 0,05), aplicou-se análise paramétrica. Os dados foram analisados por meio de análise de variância (ANOVA) para um delineamento em parcelas subdivididas com o programa Statistix 8.1 (Analytical Software, 2008), e as médias dos tratamentos foram comparadas utilizando o teste da diferença mínima significativa (LSD)17.
A análise de componentes principais (PCA) foi realizada como uma ferramenta multivariada para resumir as relações entre as características medidas. Os autovalores foram utilizados para determinar a contribuição relativa de cada componente, e a visualização em biplot foi usada para comparar tratamentos e associações entre características18.