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Artigo de método
Aqui, apresentamos um protocolo para padronizar a preparação do músculo liso duodenal isolado do coelho para avaliação farmacológica in vitro , utilizando um Sistema Experimental de Músculo Liso Horizontal a Temperatura Constante para registro em tempo real da atividade contrátil.
A atividade contrátil coordenada do músculo liso gastrointestinal forma a base fisiológica para manter as funções normais de digestão, absorção e transporte, com sua disfunção intimamente associada a distúrbios de motilidade. A técnica de perfusão de órgãos isolados elimina interferências complexas in vivo — como fatores neurais, endócrinos e hemodinâmicos — servindo como um modelo clássico para estudos farmacológicos. Para isso, este estudo detalha um protocolo passo a passo para a preparação padronizada do músculo duodenal liso isolado de coelho. O fluxo de trabalho procedimental destaca as etapas críticas de preparação de soluções, eutanasia do coelho, realização de uma laparotomia asséptica precisa no meio do abdômen para excisão rápida de tecido, suspensão das tiras de músculo liso e calibração dos transdutores para registro de tensão em tempo real. Com base nessa plataforma técnica, validamos ainda mais o método avaliando os efeitos do Líquido Oral Huoxiang Zhengqi (HXZQ-OL) em contrações espontâneas e contrações tetânicas induzidas por acetilcolina/cloreto de bário. Em conclusão, esse protocolo proporciona uma estrutura metodológica robusta e altamente reprodutível, fornecendo uma plataforma amplamente aplicável para triagem in vitro para a avaliação farmacológica de agentes terapêuticos que visam a motilidade gastrointestinal.
A atividade contrátil coordenada do músculo liso gastrointestinal serve como base fisiológica para manter as funções digestivas, absortivas e de transportenormais 1. Sua disfunção está intimamente associada a vários distúrbios clínicos comuns, incluindo síndrome do intestinoirritável 2, dispepsiafuncional 3 e distúrbios de motilidade gastrointestinalpós-operatória 4. Elucidar os mecanismos moleculares e farmacológicos que regulam a atividade dos músculos lisos é crucial para desenvolver novas terapias procinéticas ou antiespasmódicas. Nesse....
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Coelhos brancos adultos saudáveis da Nova Zelândia, de ambos os sexos (pesando 2,0–2,5 kg), foram usados neste trabalho. Todos os procedimentos experimentais com animais foram realizados de acordo com as diretrizes para o cuidado e uso de animais de laboratório e aprovados pelo Comitê de Ética de Animais de Laboratório da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Nº de Aprovação: [2026070]). Todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento animal e reduzir o número de animais utilizados. O diagrama do fluxo de trabalho está ilustrado na Figura 1.
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Este protocolo experimental descreve o método padronizado de preparação para tiras musculares duodenais isoladas de coelho e o processo de registrar suas mudanças dinâmicas de tensão e frequência em tempo real usando um sistema de perfusão de órgãos isolados. Seguindo esse protocolo, o HXZQ-OL foi adicionado sequencialmente por dosagem cumulativa em um banho de solução de tirodo de 20 mL, alcançando concentrações de volume final de 10, 20, 30, 40 e 50 μL/mL no banho. Referenciando os padrões da Farmacopeia Chinesa (ediçã.......
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Técnicas de perfusão isolada de órgãos e registro de tensão representam métodos clássicos para estudar a fisiologia do músculo liso e a farmacologia. Seus achados têm grande importância para elucidar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes a distúrbios de motilidade gastrointestinal, doenças vasculares e disfunçãouterina 12,13,14,15. Utilizando um modelo duo.......
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Os autores não têm conflitos de interesse a revelar.
Esse trabalho foi apoiado pelo Projeto de Promoção da Pesquisa Xinglin Scholar da Universidade de Chengdu da MTC (QJRC2022031), pelo Projeto de Talentos de Educação para Crianças Xinglin da Universidade de Chengdu da MTC (MPRC2023027) e pela Universidade de Chengdu da MTC—Fundo Conjunto de Inovação Hospitalar Afiliado (LH202402016).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,5-10 µL Pipeta | Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101004 | |
| Pontas de Pipeta de 10 µL | LABSELECT | T-001-10 | |
| Balão volumétrico de 10 mL | Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd. | B-043804 | |
| Balão volumétrico de 100 mL | Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd. | B-043807 | |
| Pipeta de 100-1000 µL | Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101014 | |
| Pontas de Pipeta de 1250 µL | LABSELECT | T-001-1250 | |
| Balão volumétrico de 20 mL | Sichuan Shuniu Glass Instrument Co., Ltd. | B-010105 | |
| Pontas de Pipeta de 200 µL | LABSELECT | T-001-200 | |
| Tubo de centrífuga cônico de 50 mL | LABSELECT | CT-002-50A | |
| Pipeta de 5-50 µL | Dalong Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101006 | |
| Cloreto de acetilcolina | Supelco | PHR1546 | |
| Computador de Laboratório All-in-One | Lenovo | R5-3500U | |
| Sulfato de atropina | Macklin | A822893 | |
| Cloreto de bário | Sigma-Aldrich | 342920 | |
| Cloreto de cálcio | Sigma-Aldrich | 499609 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | G5767 | |
| Osmômetro de ponto de congelação | Shanghai Precision Instruments Co., Ltd. | BS100 | |
| Sistema de Experimento de Músculo Liso de Temperatura Constante Horizontal | Chengdu Instrument Factory | DSQG-1 | |
| Líquido Oral Huoxiang Zhengqi | Taiji Group Co., Ltd. | Z50020409 | |
| Cloreto de magnésio | Sigma-Aldrich | M8266 | |
| Sistema Multicanal de Gravação e Processamento Fisiológico | Chengdu Instrument Factory | RM6240XC | |
| Coelhos Brancos da Nova Zelândia | Pizhou Dongfang Breeding Co., Ltd. (Licenciamento No.: SCXK[Su]2022-0004) | ambos os sexos (pesando 2,0–2,5 kg) | |
| pHmetro | Shanghai Leici | PHS-25 | |
| Cloreto de potássio | Sigma-Aldrich | P5405 | |
| Povidona-iodina | H&H Medical Co., Ltd. | 3180132 | |
| Balança de precisão (0,1 mg) | Sartorius | BCE64i | |
| Solução salina | H&H Medical Co., Ltd. | 100014438029 | |
| Bicarbonato de sódio | Sigma-Aldrich | S6014 | |
| Cloreto de sódio | Sigma-Aldrich | S9888 | |
| Fosfato de dihidrogênio de sódio | Supelco | 1063700250 | |
| Pentobarbital de sódio | Sigma-Aldrich | P3761 | |
| Cloreto de Verapamil | Macklin | V820460 | |
| Misturador Vortex | Kylin-Bell | XW-80A |