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Uma Dose Única Intravenosa de Brucela Atenuada Produtora de Indol em Camundongos NOD: Avaliação do Início do Diabetes Tipo 1 e Remodelação Imune em Ilhotas

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DOI:

10.3791/71193

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26 de maio de 2026

 ,  ,  , 
1Department of Microbial Pathogenesis and Immunology, Texas A'M University Health Science Center, 2Department of Veterinary Pathobiology, College of Veterinary Medicine ' Biomedical Sciences, Texas A'M University, 3Bond Life Sciences Center, The University of Missouri

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve a administração intravenosa de uma cepa atenuada de Brucella melitensis produtora de indol a camundongos NOD/ShiLtJ, seguida por monitoramento longitudinal do diabetes, histologia pancreática e proteômica espacial de alto plexo opcional e sequenciamento de RNA unicelular para avaliar a reprogramação imune em ilhotes.

Resumo

O diabetes tipo 1 (DT1) resulta da destruição autoimune das células β pancreáticas, e as terapias atuais não conseguem restaurar a tolerância imunológica duradoura. Bactérias metabolicamente modificadas que produzem metabólitos imunomoduladores representam uma estratégia terapêutica promissora de dose única. Aqui, este artigo apresenta um protocolo abrangente no qual uma única administração intravenosa de uma cepa atenuada produtora de indol , BmΔvjbR:tnaA, é usada para avaliar os efeitos no início do diabetes autoimune em camundongos pré-diabéticos femininos NOD/ShiLtJ.

O protocolo começa com a preparação de BmΔvjbR::tnaA a partir de estoques de glicerol congelados, crescendo-o em meio seletivo até a fase média logaritaria, e calculando unidades formadoras de colônias com base na densidade óptica. Fêmeas de camundongos NOD, <5 semanas, são contidas sem anestesia e injetadas por via intravenosa via veia lateral da cauda com uma dose bacteriana definida em soro tampão fosfato, enquanto mantidas em almofadas térmicas. A glicose no sangue é monitorada 2 vezes por semana após um jejum de 2 horas por 70–105 dias, com diabetes definido como glicose ≥250 mg/dL em duas leituras consecutivas. Nos pontos finais experimentais, o pâncreas colhido é fixado em formalina tamponada neutra por 72 horas, incorporado em parafina e seccionado para coloração de hematoxilina e eosina, imunohistoquímica da insulina e quantificação da área total das ilhéus. Seções embutidas em parafina fixadas com formol são submetidas para proteômica espacial com um painel de 25 marcadores de anticorpos para visualizar populações reguladoras e imunes a efetores. Por fim, o tecido pancreático fresco passa por isolamento de célula única, preparação de biblioteca 3′, sequenciamento e análise bioinformática baseada em Seurat para projetar mudanças transcricionais entre populações imunes e estromais.

Esse protocolo integrado permite a entrega reprodutível de terapia bacteriana em dose única e a caracterização multimodal da remodelação imune em ilhéus, fornecendo uma estrutura para testar microrganismos metabolitos modificados por metabólitos em modelos autoimunes e dissecar mecanismos imunes específicos de tecidos em resolução unicelular.

Introdução

O diabetes tipo 1 (DT1) é uma doença autoimune crônica caracterizada pela destruição imunizada das células β pancreáticas produtoras de insulina, levando à dependência vitalícia de insulina e ao aumento do risco de complicaçõesvasculares 1. O camundongo NOD/ShiLtJ recapitula características-chave do diabetes autoimune humano, incluindo insulite espontânea e progressão para diabetes manifesto, sendo amplamente utilizado como modelo pré-clínico para estudos mecanicistas e terapêuticos 1,2,3. As terapias atuais para DT1 — incluindo medicamentos imunossupressores, anticorpos monoclonais e terapias adotivas de células T regulatórias (Treg) — podem retardar temporariamente a progressão da doença, mas frequentemente falham em proporcionar restauração duradoura da tolerância imunológica ou preservação sustentada da massa β celular 1,2,4,5,6,7,8,9,10, 11.

O direcionamento para Tregs e outras populações regulatórias é um foco principal das terapias emergentes para DT1, incluindo infusões policlonais autólogas de Treg, Tregs específicos de antígeno modificados e regimes baseados emIL-2 1,2,4,5,6,7,8,9,10,11 . No entanto, um microambiente pró-inflamatório dentro das ilhotas pancreáticas pode minar a eficácia dessas abordagens, enfatizando a necessidade de reprogramar localmente as redes imunológicas residentes nostecidos 2,7. Metabólitos de triptofano derivados de microbianos, particularmente indol e compostos relacionados, podem modular tanto a imunidade inata quanto a adaptativa promovendo a diferenciação reguladora das células T, induzindo polarização anti-inflamatória dos macrófagos e suprimindo as respostas Th1712,13. Terapias microbianas vivas e bactérias metabolicamente modificadas representam, portanto, uma estratégia promissora para entregar metabólitos imunomoduladores in situ e remodelar a imunidadetecidual 12,13,14,15,16,17,18.

Anteriormente, desenvolvemos uma cepa metabolicamente modificada de Brucella melitensis, BmΔvjbR::tnaA, que produz de forma constitutiva o indol e controla a artrite autoimune expandindo Tregs e remodelando microambientesinflamatórios 14,15,16. Cepas atenuadas de Brucella, como BmΔvjbR, foram amplamente caracterizadas como plataformas vacinais e podem ser geneticamente modificadas para carregar cargas imunorreguladoras 14,15,16.

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para avaliar uma única dose intravenosa de BmΔvjbR:tnaA no modelo NOD/ShiLtJ, incluindo preparação bacteriana, administração intravenosa padronizada, monitoramento do diabetes e análise multimodal do tecido pancreático por histologia, proteômica espacial de alto plexo e RNA-seq unicelular. Esse fluxo de trabalho fornece uma estrutura prática para testar microrganismos modificados por metabólitos como imunoterapias de dose única em autoimunidade específica de órgãos. Uma análise dose-resposta anterior demonstrou segurança e tolerabilidade até 1 × 1010 UFC da cepa atenuada.

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Protocolo

Todos os experimentos com animais foram conduzidos em estrita conformidade com diretrizes éticas e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso Animal (IACUC) da Texas A&M University (Número do Protocolo: 2021-0123).

1. Preparação e caracterização de BmΔvjbR::tnaA

  1. Origem e armazenamento da cepa bacteriana
    NOTA: BmΔvjbR::tnaA é derivado de Brucella melitensis 16M com deleção do regulador de virulência vjbR e inserção do gene Escherichia coli tnaA para produção constitutiva de indol, conforme descritoanteriormente 14,15,16.
    1. Mantenha estoques de glicerol a −80 °C em 20% de glicerol.
  2. Cultura bacteriana em ágar seletivo
    1. Retirar um estoque de glicerol congelado de armazenamento a −80 °C. Estrie 10–20 μL em placas de ágar de soja (TSA) trípticas suplementadas com cloranfenicol (25–30 μg/mL).
    2. Incubar placas a 37 °C sob condições de CO₂ ambiente por 48–72 horas até que colônias individuais (2–3 mm de diâmetro) fiquem visíveis.
      ATENÇÃO: O trabalho com cepas de Brucella requer instalações adequadas de nível de biossegurança (mínimo BSL2). Siga os protocolos institucionais de biossegurança e as aprovações necessárias.
  3. Preparação em cultura líquida
    1. Escolha uma placa TSA nova (≤1 semana). Escolha 2–3 colônias isoladas usando um laço estéril.
    2. Inocular em 10 mL de caldo de soja tríptico (TSB) suplementado com cloranfenicol (25–30 μg/mL) em um tubo estéril de 15 mL. Incubar a 37 °C com agitação a 250 rpm sob condições de CO₂ ambiente.
      NOTA: Para ampliação, use um frasco Erlenmeyer com defletor de 250 mL.
  4. Monitoramento de crescimento e colheita
    1. Apague o espectrofotômetro usando TSB estéril suplementado com cloranfenicol.
    2. Meça OD₆₀₀ a cada 2–3 horas.
    3. Continue a incubação até que OD₆₀₀ atinja 2,0 ± 0,2 (aproximadamente 18–24 horas).
      PASSO CRÍTICO: Colheita em OD₆₀₀ = 2,0 ± 0,2 para concentração bacteriana consistente e viabilidade.
      NOTA: Nessas condições, OD₆₀₀ ≈ 2.0 corresponde à fase logarítima média a tardia.
  5. Estimativa da CFU
    1. Estima a concentração bacteriana usando a relação:
      OD₆₀₀ = 1 corresponde a 5 × 109 CFU/mL.
      NOTA: Uma cultura de 10 mL em OD₆₀₀ = 2,0 contém aproximadamente 1 × 1011 CFU.
    2. OPCIONAL: Prepare diluições seriadas de 10 vezes (10⁻6 a 10⁻9) em PBS estéril. Placa 100 μL no TSA suplementado com cloranfenicol. Incubar a 37 °C por 48–72 horas. Conte colônias para confirmar a CFU.
  6. Colheita e concentração bacteriana
    1. Transfira a cultura de 10 mL para um tubo cônico estéril de 15 mL.
    2. Centrifuge a 3.000–4.000 × g por 10 minutos em temperatura ambiente.
    3. Aspire cuidadosamente e descarte o sobrenadante sem perturbar a pelota.
  7. Resuspensão para injeção
    1. Adicione 1 mL de soro salino estéril e sem endotoxinas de 1× fosfato tamponado (PBS, pH 7,4) ao pellet bacteriano. Resuspenda suavemente pipetando 10–15 vezes até que uma suspensão homogênea seja alcançada, sem aglomerados visíveis.
      NOTA: A concentração final é aproximadamente 1 × 1011 CFU/mL.
  8. Armazenamento e uso
    1. Mantenha a suspensão bacteriana no gelo dentro de um tubo fechado. Use a suspensão para injeções intravenosas dentro de 4 horas após a preparação.
      NOTA: Não congele nem armazene durante a noite, pois a viabilidade bacteriana diminui.
      PONTO DE PAUSA: Bactérias podem ficar no gelo por até 4 horas; Recomenda-se o uso no mesmo dia.

2. Aquisição de camundongos NOD/ShiLtJ para aquisição e preparação

  1. Obtenha camundongos fêmeas NOD/ShiLtJ. Aclimate os camundongos por pelo menos 7 dias antes da experimentação.
    NOTA: Use camundongos fêmeas devido à incidência de diabetes mais alta e mais consistente.
  2. Camundongos domésticos em gaiolas ventiladas individualmente sob condições específicas livres de patógenos. Mantenha até cinco ratos por gaiola.
  3. Forneça roupa de cama, enriquecimento ambiental, comida e água ad libitum. Mantenha a temperatura entre 20–24 °C, umidade entre 40–60% e um ciclo de 12 horas claro/escuro.
  4. Use camundongos com menos de 5 semanas de idade. Registre o peso corporal de base.
  5. Randomize camundongos no nível da gaiola em grupos de tratamento e controle. Atribua identificadores únicos (etiqueta de orelha ou tatuagem na cauda) a cada rato.
    NOTA: Mantenha um registro mestre de todos os camundongos e trabalhos em grupo.
  6. Transferir as gaiolas para a sala de procedimentos pelo menos 30 minutos antes da injeção. Coloque as gaiolas em almofadas térmicas ajustadas entre 37–40 °C para promover a dilatação das veias caudais.

3. Administração intravenosa via veia caudal lateral

  1. Usando técnica estéril, retire 100 μL da suspensão bacteriana em seringas de insulina estéreis (29G–30G). Rotule cada seringa com o ID correspondente do mouse.
  2. Prepare seringas de controle contendo 100 μL de PBS estéril.
    NOTA: Prepare as seringas imediatamente antes da injeção.
  3. Coloque cada rato em um sistema de contenção, permitindo acesso à cauda.
    NOTA: Não use anestesia para injeções na veia caudal.
  4. Limpe a cauda com etanol a 70% e deixe secar ao ar.
  5. Visualize as veias laterais da cauda sob iluminação adequada.
    DICA: Aqueça a cauda se as veias não estiverem visíveis.
  6. Segure o terço distal da cauda com tensão suave. Insira o bisel da agulha em um ângulo raso (10–15°) na veia lateral.
  7. Injete 100 μL lentamente ao longo de 5–10 s. Retire a agulha e aplique uma pressão suave com gaze estéril.
    PASSO CRÍTICO: Confirme a injeção intravenosa bem-sucedida pela ausência de resistência, inchaço ou branqueamento.
  8. Coloque o rato de volta na gaiola em uma almofada térmica. Observe por 5 a 10 minutos sinais de sofrimento. Registre quaisquer eventos adversos.
  9. Realize injeções para todos os camundongos em ordem aleatória dentro de uma janela de 2 horas.

4. Monitoramento da glicose no sangue e definição de diabetes

  1. Comece o monitoramento de glicose 7 dias após a injeção. Meça a glicose no sangue duas vezes por semana até o final do estudo.
  2. Remova a comida 2 horas antes da medição, mantendo o acesso à água.
  3. Prenda o rato. Limpe a ponta da cauda com 70% de etanol.
  4. Corte a cauda usando uma lanceta ou agulha estéril. Descarte a primeira gota de sangue. Pegue a segunda gota em uma tira de teste do glicosímetro. Registre os valores de glicose no sangue junto com a identificação e data do camundongo.
    NOTA: Use um novo local se a ponta da cauda ficar marcada.
  5. Defina diabetes como glicose no sangue ≥ 250 mg/dL em duas medições consecutivas separadas por pelo menos 24 horas.
  6. Eutanasiem camundongos que apresentam sinais graves de doença de acordo com as diretrizes institucionais.

5. Colheita, fixação e processamento do pâncreas

  1. Eutanasie camundongos de acordo com protocolos aprovados. Dissecar e coletar cuidadosamente o pâncreas, incluindo todos os lóbulos.
  2. Coloque o pâncreas em formalina tamponada neutra de 10%, com uma razão mínima de 10:1 entre fixador e volume de tecido. Fixe para 72 h em temperatura ambiente.
    ATENÇÃO: Manuseie formol em uma exaustão química com EPI apropriado.
  3. Transfira os tecidos para etanol 70% após a fixação.
  4. Submeta tecidos fixos a uma unidade de núcleo histológico para embedding de parafina, separação com espessura de 5 μm em lâminas carregadas positivamente, coloração de hematoxilina e eosina, e imunohistoquímica da insulina.
    NOTA: Solicite seções não coradas se análises adicionais a jusante estiverem planejadas.

6. Avaliação histológica e quantificação da área das ilhotas

  1. Adquira imagens de lâminas inteiras usando um scanner de lâminas ou microscópio.
  2. Imagens abertas no software referenciado. Anote manualmente ilhéus usando as ferramentas apropriadas.
  3. Meça a área das ilhotas usando ferramentas de anotação.
  4. Medições de exportação para análise.
    NOTA: A área total das ilhotas inclui células endócrinas e infiltrantes.

7. Diversas análises a jusante

  1. Calcule a área média da ilhota por mouse. Compare grupos usando testes estatísticos apropriados.
  2. Opcional: Análise de proteômica espacial (veja Tabela Suplementar S1)
    1. Prepare seções FFPE em slides com carga positiva. Envie amostras para um provedor de serviços de proteômica espacial. Forneça especificações do painel de anticorpos.
  3. Opcional: Sequenciamento de RNA de célula única (veja Tabela Suplementar S2)
    1. Colha o pâncreas e coloque-o em meio frio.
    2. Envie amostras para uma unidade central de genômica para isolamento de célula única e preparação de bibliotecas.
    3. Processar dados de sequenciamento usando pipelines apropriados (por exemplo, Cell Ranger, Seurat).
    4. Deposite os dados de sequenciamento em um repositório público antes da publicação.

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Resultados

Embora o protocolo mais amplo descrito neste manuscrito tenha sido otimizado para um regime preventivo de dose única, esses desfechos piloto são apresentados aqui exclusivamente para ilustrar as leituras histológicas e glicêmicas esperadas possíveis com esse fluxo de trabalho.

O contexto geral da doença e o contraste entre pâncreas diabético saudável e tipo 1 são ilustrados esquematicamente na Figura 1A. A destruição autoimune das...

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Discussão

Uma limitação crítica dos resultados representativos aqui apresentados é que os dados fornecidos para ilustrar os desfechos analíticos (Figura 3) foram derivados de uma coorte piloto inicial utilizando um esquema de duas doses. Como esse protocolo foi refinado para um regime preventivo de dose única, estudos futuros em maior escala utilizando o protocolo otimizado de dose única descrito aqui são necessários para estabelecer a eficácia estatística formal.

...

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Divulgações

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Esse trabalho foi apoiado por bolsas do National Institutes of Health R01CA273002 e R21AI167793 para J.S. e P.D.F., e por um Prêmio Nacional de Pesquisa Institucional do NIH (T32) que apoia K.D. Agradecemos ao Centro de Ciências da Saúde da Texas A&M University pelo apoio institucional. Agradecemos ao Dr. Yava Jones-Hall pelas avaliações histopatologicas cegas, ao laboratório Song pelo suporte técnico piloto e animal, ao Espaço de Trabalho de Genômica do Instituto Texas A&M para Ciências e Sociedades do Genoma (TIGSS) pela preparação e sequenciamento da biblioteca de RNA-seq de célula única, ao Núcleo de Bioinformática TIGSS para análise e interpretação de dados, e à Akoya Biosciences pelos serviços de proteômica espacial. Agradecemos o apoio do Instituto Texas A&M para Ciências do Genoma e Sociedade (TIGSS) Bioinformatics Core (TBC) pela assistência.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Formalina Tamponada Neutra 10% (NBF)VWR10790-714
Controlador de Cromio 10x GenômicaEspaço de Trabalho de Genômica Molecular do TIGSS, Texas A & Universidade M
70% de etanolVWR89125-164
Laminas adesivas para microscópio FFPELeica Biosystems3800084E
Painel de anticorpos FFPE do camundongo Akoya (~25 marcadores)Akoya Biosciences[ID do painel/painel personalizado]
Bioanalisador ou TapeStation com kits de DNA HSEspaço de Trabalho de Genômica Molecular do TIGSS, Texas A & M/ Agilent
Bm & Delta; Cepa bacteriana vjbR::tnaAMaterial de laboratório (laboratórios Song/de Figueiredo)
Pipeline do Cell Ranger10x Genômicav7.1
CloranfenicolProdutos de Pesquisa Internacional56-75-7
Kit Chromium Next GEM Single Cell 3'Genômica 10x via núcleo TIGSS
Colagenase de Clostridium histolyticumMillipore SigmaC7657-100MG
Coloração nuclear DAPIAkoya Biosciences[Serviço prestado]
Embedding FFPE, H& Coloração por E, insulina IHC e varredura de lâminaLaboratório de Histologia VMBS, Texas A & Universidade Mhttps://vetmed.tamu.edu/vmbs-histology-lab/
Tiras de teste de glicoseEKF Diagnostics / Fisher Scientific22-022-649
Tiras de teste de glicose (alternativas)Ascensia Diabetes CareTiras de teste CONTOUR NEXT
Glicerol (volume, 500 mL)Millipore SigmaG7893-500ML
Glicerol (estéril, 100 mL)Sigma Aldrich (G Biociências)G5516-100ml
GraphPad Prism (ou pacote de sobrevivência R)GraphPad Software / Rv10.2
Glicosímetro portátilAscensia Diabetes CareCONTORNO NEXT EZ
Sequenciador Illumina NextSeq 2000Espaço de Trabalho de Genômica Molecular do TIGSS, Texas A & Universidade M
Seringas de insulina, 29 e traço; 30 G (U-100)VWR10002-702
Lancetas para testes de diabetesBecton, Dickinson and Company (BD)366594
Grau de Pesquisa Liberase TLMillipore Sigma5401020001
Almofadas térmicas de baixa temperaturaCiência da CondutaRWD-69025
Kit de isolamento de núcleos/células MiltenyiEspaço de Trabalho de Genômica Molecular do TIGSS, Texas A & M/ Miltenyi Biotec
Tapete térmico para mouse (alternativo)Kent ScientificRightTemp
Restritores de camundongosBraintree ScientificTV-RED 150-STD
Camundongos NOD/ShiLtJ (fêmea, 5 semanas)O Laboratório JacksonCepa #001976
Kit de célula de fluxo P2 XLEAP de 100 ciclosIllumina via núcleo TIGSS
Aquisição de dados e serviço de controle de qualidade PhenoCyclerAkoya Biosciences
Reagentes PhenoCycler e fluxo de trabalho de imagemAkoya Biosciences[Serviço prestado]
Sistema FenoCiclador-FusãoAkoya Biosciences
Soro salino tamponado com fosfato (PBS), 1xThermo Fisher10010023
Inibidor de RNase ProtetorMillipore Sigma3335402001
Fluorômetro de Qubit e Kit de Ensaio HS de dsDNAEspaço de Trabalho de Genômica Molecular do TIGSS, Texas A & M/ Thermo Fisher
QuPathCódigo abertov0.4.3
Software RProjeto Rv4.0+
Seurat (pacote R)Satija Lab / CRANv4.3
StarDistCódigo abertov0.8.3
Ágar de Soja de Triptona (TSA)VWRCA90002-706

Referências

  1. Bender, C., et al. A phase 2 randomized trial with autologous polyclonal expanded regulatory T cells in children with new-onset type 1 diabetes. Sci Transl Med. 16, eadn2404 (2024).
  2. Yang, S. J., et al. Pancreatic islet-specific engineered Tregs exhibit robust antigen-specific and bystander immune suppression in type 1 diabetes models. Sci Transl Med. 14, eabn1716 (2022).
  3. . NOD/ShiLtJ (001976) datasheet Available from: https://www.jax.org/strain/001976 (2026)
  4. Raeber, M. E., et al. Interleukin-2 immunotherapy reveals human regulatory T cell subsets with distinct functional and tissue-homing characteristics. Immunity. 57 (9), 2232-2250.e10 (2024).
  5. Efe, O., et al. A humanized IL-2 mutein expands Tregs and prolongs transplant survival in preclinical models. J Clin Invest. 134 (5), e173107 (2024).
  6. Haque, M., et al. Stem cell-derived tissue-associated regulatory T cells suppress the activity of pathogenic cells in autoimmune diabetes. JCI Insight. 4 (7), e126471 (2019).
  7. Su, W., et al. Protein prenylation drives discrete signaling programs for the differentiation and maintenance of effector Treg cells. Cell Metab. 32 (6), 996-1011.e17 (2020).
  8. Hassan, M., Elzallat, M., Mohammed, D. M., Balata, M., El-Maadawy, W. H. Exploiting regulatory T cells (Tregs): cutting-edge therapy for autoimmune diseases. Int Immunopharmacol. 155, 114624 (2025).
  9. Chen, X., et al. Differential roles of human CD4+ and CD8+ regulatory T cells in controlling self-reactive immune responses. Nat Immunol. 26 (2), 230-239 (2025).
  10. Huang, Q., Zhu, J. Regulatory T cell-based therapy in type 1 diabetes: latest breakthroughs and evidence. Int Immunopharmacol. 140, 112724 (2024).
  11. Passerini, L., Forlani, A., Gregori, S. Advances in regulatory cell therapy for type 1 diabetes: emerging strategies and future directions. Eur J Immunol. 55 (5), e202451722 (2025).
  12. Singh, N. P., et al. Dietary indoles suppress delayed-type hypersensitivity by inducing a switch from proinflammatory Th17 cells to anti-inflammatory regulatory T cells through regulation of microRNA. J Immunol. 196 (3), 1108-1122 (2016).
  13. Krishnan, S., et al. Gut microbiota-derived tryptophan metabolites modulate inflammatory response in hepatocytes and macrophages. Cell Rep. 23 (4), 1099-1111 (2018).
  14. Das, J. K., et al. A metabolically engineered bacterium controls autoimmunity and inflammation by remodeling the pro-inflammatory microenvironment. Gut Microbes. 14 (1), 2143222 (2022).
  15. Plocica, J., et al. Engineering live attenuated vaccines: old dogs learning new tricks. J Transl Autoimmun. 6, 100198 (2023).
  16. Bender, E. Could a bacteria-stuffed pill cure autoimmune diseases?. Nature. 577, S12-S13 (2020).
  17. Chen, G., Wang, C., Wan, Q., Dong, F., Radstake, T. Editorial: next generation therapeutic modality to cure autoimmune diseases. Front Immunol. 16, 1631995 (2025).
  18. Adedokun, A. I., et al. Exploring immunotherapeutic strategies for bacterial and viral diseases. Explor Immunol. 5, 100320 (2025).
  19. Bankhead, P., et al. QuPath: open source software for digital pathology image analysis. Sci Rep. 7 (1), 16878 (2017).
  20. Satija, R., Farrell, J. A., Gennert, D., Schier, A. F., Regev, A. Spatial reconstruction of single-cell gene expression data. Nat Biotechnol. 33 (5), 495-502 (2015).

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