Artigo de método

Construção e Implantação de um Sistema de Microinfusion para entrega Sustentada de Agentes neuroativos.

DOI:

10.3791/716

17 de março de 2008

Neste artigo

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Resumo

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Como neurociência inquérito se torna mais sofisticada investigação, de estruturas cerebrais e circuitos exige melhores níveis de precisão e de alta resolução. Nós desenvolvemos um método para a preparação e implantação de um sistema de infusão crônica no cérebro utilizando uma microcânula borosilicato com um diâmetro da ponta de 50 microns.

Resumo

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Protocolos experimentais usados ​​para infusão crônica de agentes neuroactive dentro das regiões do cérebro, muitas vezes utilizam um sistema de bomba de mini-osmótica. Agentes são comumente entregues através de uma cânula de aço inoxidável com um diâmetro de 0,30 mm ou maior. Sistemas utilizando uma cânula deste calibre pode impor trauma para a área de interesse, resultando em danos arquitetônicos, comprometendo a integridade estrutural e funcionamento normal. Como neurociência inquérito se torna mais sofisticada investigação, de estruturas cerebrais e circuitos exige melhores níveis de precisão e de alta resolução. Nós desenvolvemos um método para a preparação e implantação de um sistema de infusão crônica no cérebro utilizando uma microcânula borosilicato com um diâmetro da ponta de 50 microns. Esta técnica reduz os danos ao meio ambiente local e diminui gliose reativa no local da infusão. A configuração do sistema microinfusion também é capaz de estar de acordo com a superfície do crânio do animal, impedindo a necessidade de grandes pedestais cranial, facilitando o fechamento da incisão no couro cabeludo e reduzindo o risco de infecção. Demonstramos entrega sustentado confiável de um corante tendo um peso representativo molecular utilizando um modelo in vitro e in vivo em ratos.

Protocolo

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Introdução

Infusão direta de neuroactive agentes permite que regiões específicas do cérebro a ser estudada, enquanto ultrapassando a barreira hemato-encefálica. As aplicações desta abordagem em neurociência são diversas e incluem a alteração do nível de atividade cerebral em sub-regiões distintas (Berretta et al, 2004;. Gliddon et al, 2005;.. Kim et al, 2000), investigando as ações dos agentes psicotrópicos ( Clinton et al, 2006;.. Di Benedetto et al, 2004), fornecendo modelos controlada de inflamação cerebral (Hauss-Wegrzyniak et al, 1998;. Marchalant et al, 2007;.. Rosi et al, 2004), estudando os mecanismos de vício (Kim et al, 2005;. Loc....

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Discussão

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Vários estudos têm demonstrado que, diminuindo o tamanho da cânula de entrega para infusões intracerebrais, trauma tecidual e insulto à barreira hemato-encefálica são reduzidos (Perry et al., 1993), a inflamação é diminuído eo atenuada imuno-resposta (Finsen et al gliose., 1991), e reativa é diminuída (Nikkhah et al., 1994). Apresentamos aqui um método para a entrega crônica de agentes neuroactive dentro do cérebro através de uma microcânula, com um diâmetro que é reduzida de 6 vezes comparado ao de cânulas de entrega convencionalmente util.......

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Bombas mini-osmóticas (MOPs)Toolfigure-materials-1 ALZETmodelo #1002
Ferramenta extratora de eletrodosStoelting Co.
Tubos de borossilicatoSurgeryWorld Precision Instruments, Inc.1B100F-6
MicrofórcepsCirurgiaWorld Precision Instruments, Inc.
Tubos de polietileno CirurgiaPlásticos Um#C312 VT
LumaBondReagentemyNeuroLab, Inc

Referências

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  1. Berretta, S., Lange, N., Bhattacharyya, S., Sebro, R., Garces, J., Benes, F. M. Long-term effectsof amygdala GABA receptor blockade on specific subpopulations of hippocampalinterneurons. Hippocampus. 14, 876-894 (2004).
  2. Clinton, S. M., Sucharski, I. L., Finlay, J. M.

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Reimpressões e permissões

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Errata

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Formal Correction: Erratum: Construction and Implantation of a Microinfusion System for Sustained Delivery of Neuroactive Agents.
Posted by JoVE Editors on 4/01/2012. Citeable Link.

A correction was made to: Construction and Implantation of a Microinfusion System for Sustained Delivery of Neuroactive Agents. A key reference was excluded and a revised abstract was republished.

Additional Reference:

22. Cunningham, M.G., Ames, H.M., Donalds, R.A., & Benes, F.M. Construction and implantation of a microinfusion system for sustained delivery of neuroactive agents. Journal of Neuroscience Methods 167, 213-220, doi:10.1016/j.jneumeth.2007.08.016 (2008).

Revised Abstract:

Sustained delivery of neuroactive agents is widely used in neuroscience, but poses many technical challenges. It is necessary to deliver the agent with high precision while minimizing localized trauma and inflammation. Also, the ability to customize the system to accommodate animals of different species and sizes is desirable. This video presentation demonstrates the construction of an infusion system that can be fitted to any particular research animal. The delivery microcannula diameter is approximately 10-fold smaller than most infusion cannulas presently used. This translates into enhanced accuracy and reduced trauma to the brain region under study. The delivery cannula can also be sculpted to fit the contour of the surface of the animal's skull, thereby allowing closure of the scalp incision neatly over the infusion system, precluding the need for a skull-mounted pedestal, reducing risk of infection, and ensuring a greater level of comfort to the animal. The system is assembled in an air-free environment and requires the researcher to fashion glass micropipettes with a heat source. These construction methods require special skills that are best acquired, if not in person, using video instruction. (This article is based on work first reported in J Neurosci Methods. 2008 Jan 30;167(2):213-20. Epub 2007 Aug 28.).

Original Abstract:

Experimental protocols used for chronic infusion of neuroactive agents within regions of the brain often utilize a mini-osmotic pump system. Agents are commonly delivered via a stainless steel cannula with a diameter of 0.30 mm or greater. Systems utilizing a cannula of this caliber may impose trauma to the area of interest resulting in architectural damage, thereby compromising structural integrity and normal functioning. As neuroscience inquiry becomes more sophisticated, investigation of brain structures and circuitry requires improved levels of accuracy and higher resolution. We have developed a method for the preparation and implantation of a chronic infusion system within the brain utilizing a borosilicate microcannula with a tip diameter of 50 microns. This technique reduces damage to the local environment and diminishes reactive gliosis at the site of infusion. The configuration of the microinfusion system is also able to conform to the surface of the animal's skull, precluding the need for large cranial pedestals, thus facilitating closure of the scalp incision and reducing the risk of infection. We demonstrate reliable sustained delivery of a dye having a representative molecular weight using an in vitro model and in vivo studies in rats.

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