Artigo de método

Fabricação e Caracterização de Adesivos de Microagulhas Dissolvíveis Carregados com 3BDO para Recrescimento Capilar em Camundongos C57BL/6

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DOI:

10.3791/71814

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25 de agosto de 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1School of Stomatology, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Sciences, 2Engineering Laboratory for Biomaterials and Tissue Regeneration, Ningbo Stomatology Hospital, Savaid Stomatology School, Hangzhou Medical College

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve a fabricação, caracterização e aplicação de patches de microneedles carregados com 3BDO e de dissolução rápida para administração transdérmica de fármacos em um modelo de regeneração capilar em camundongo.

Resumo

Os tratamentos convencionais para a alopecia androgenética (AA) apresentam limitações, o que motiva abordagens alternativas de administração. Este protocolo descreve a fabricação, caracterização e aplicação de microagulhas solúveis carregadas com 3BDO, compostas por ácido hialurônico/quitosana (HA/CS), em um modelo de regeneração capilar em camundongos C57BL/6. O método utiliza um processo de moldagem em duas etapas em um molde de polidimetilsiloxano (PDMS) para concentrar o 3BDO nas pontas das microagulhas, ao mesmo tempo em que forma uma camada de suporte de HA/CS sem fármaco. O curativo é caracterizado por meio de imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV), testes mecânicos, testes de inserção e dissolução na pele, testes de liberação in vitro, ensaios antibacterianos, testes de citotoxicidade e avaliação in vivo da regeneração capilar. Após a inserção, as pontas das microagulhas se dissolvem, liberando o 3BDO localmente. A avaliação in vivo mostrou que o grupo tratado com microagulhas carregadas com 3BDO apresentou uma regeneração capilar mais uniforme em comparação com os grupos submetidos à injeção subcutânea e ao grupo controle. Este protocolo também permite a avaliação da morfologia do curativo, do desempenho na inserção e da biocompatibilidade local. Este método fornece um fluxo de trabalho pré-clínico para avaliar a administração mediada por microagulhas do 3BDO em aplicações de regeneração capilar.

Introdução

A alopecia androgenética (AGA) é uma das doenças clínicas de queda de cabelo mais comuns, caracterizada principalmente pelo afinamento progressivo e perda de cabelo no couro cabeludo. Sua prevalência ao longo da vida permanece persistentemente alta entre homens, tornando-a um problema de saúde crítico que exige resolução urgente1,2. Atualmente, os tratamentos clínicos para a AGA são principalmente classificados em intervenções farmacológicas e transplante cirúrgico, ambos com desvantagens significativas. Fármacos terapêuticos de primeira linha, como finasterida e minoxidil, apresentam certos efeitos terapêuticos, mas estão associados a reações adversas definidas, como disfunção sexual, prurido no couro cabeludo e ressecamento do couro cabeludo1,3. Embora o transplante capilar possa promover a regeneração local do cabelo, ele é limitado por altos custos de tratamento, quantidade insuficiente de cabelo nas áreas doadoras e taxas variáveis de sobrevivência dos enxertos, dificultando sua ampla popularização na prática clínica1. Diante dessas limitações, há necessidade de novas estratégias terapêuticas que combinem eficácia, segurança e adesão do paciente.

O 3BDO é um ativador de molécula pequena da mTOR que compete com a rapamicina4. Tem sido amplamente utilizado como inibidor da autofagia em diversos sistemas5,6,7. Por exemplo, o tratamento de longo prazo com 3BDO pode melhorar a função da memória ao reduzir o número de autofagossomos8. Além disso, evidências crescentes sugerem que o 3BDO pode atuar independentemente como ativador da mTOR. Por exemplo, o 3BDO impediu a morte de células endoteliais e o desenvolvimento da aterosclerose em camundongos, independentemente da atividade da mTOR9. No entanto, seu possível papel no crescimento do folículo piloso ainda não foi relatado. Notavelmente, em nossos estudos preliminares, observou-se que o 3BDO promove o crescimento de novos pelos. Contudo, os métodos tradicionais de administração tópica de fármacos apresentam limitações evidentes. A camada córnea da pele limita a eficiência transdérmica, dificultando a entrega de medicamentos ao sítio-alvo nos folículos pilosos na derme. Embora géis transdérmicos possam prolongar o tempo de retenção do fármaco, podem deixar resíduos indesejáveis. A eficácia clínica de ambas as estratégias de tratamento mencionadas acima permanece subótima10,11.

As microneedles (MNs) são uma tecnologia inovadora e indolor de administração de fármacos cuja principal vantagem reside na sua capacidade de penetrar facilmente o estrato córneo e entregar com precisão medicamentos ao microambiente perifolicular na junção entre a epiderme e a derme. Além disso, as MNs apresentam uso conveniente, mínima invasividade e custo razoável12,13,14. Para superar o gargalo da entrega transdérmica do 3BDO tópico, foi desenvolvido um curativo com microneedles utilizando ácido hialurônico (HA) como matriz e quitosana (CS) como componente funcional. A incorporação de CS tem como objetivo fornecer um componente funcional com potencial antibacteriano. Além disso, a aplicação de HA na pele de camundongos alopecicos pode estimular significativamente o desenvolvimento dos folículos pilosos15. Portanto, este protocolo descreve a fabricação e caracterização de um sistema de MNs dissolúveis carregadas com 3BDO e sua aplicação em um modelo de regeneração capilar em camundongos C57BL/6 depilados. Esse modelo é útil para avaliar as respostas de regeneração capilar após a depilação, mas por si só não estabelece eficácia clínica para a AAG.

Protocolo

O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal da Universidade Médica de Shandong & Academia de Ciências Médicas de Shandong (W202112030345). Todos os métodos foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentações pertinentes.

1. Fabricação dos patches 3BDO@MN

  1. Preparação da formulação de CS/HA
    1. Pese 1 g do pó de CS (grau de desacetilação ≥ 95%) e adicione-o a 20 mL de água destilada, seguido de agitação à temperatura ambiente (TA) por 10 min.
    2. Continue adicionando 0,4 mL de solução de ácido acético 2% (v/v) (massa molecular 60,05) e continue agitando por 2 h.
      CAUTION: O ácido acético concentrado é corrosivo. Realize a diluição e o manuseio em capela, e use luvas descartáveis e óculos de proteção para evitar contato com a pele e membranas mucosas.
    3. Continue com a adição de 2 g do pó de HA e, em seguida, centrifugue a formulação mista a 1.207 × g (aproximadamente 3.000 rpm) por 5 min para garantir dissolução completa.
      ​NOTA: A formulação de CS/HA deve ser preparada fresca e pode ser mantida em geladeira a 4 °C por não mais de 24 h.
  2. Preparação da formulação de CS/HA carregada com 3BDO
    1. Adicione a solução pré-dissolvida de 3BDO (2 mg/mL) em dimetilsulfóxido (DMSO)
      CAUTION: O DMSO é permeável à pele. Use luvas durante a operação para evitar contato direto com a pele e adicione-o à formulação de CS/HA. Misture bem para garantir dissolução completa.
    2. Centrifugue a formulação mista a 1.207 × g por 5 min para remover quaisquer bolhas de ar aprisionadas.
      ​NOTA: Se as bolhas persistirem após a centrifugação, deixe a formulação repousar por 5 min e, em seguida, centrifugue novamente.
  3. Fabricação dos patches de MN com 3BDO@MN
    1. Utilize um molde de MN de polidimetilsiloxano (PDMS), com uma matriz 20 × 20 de pontas cônicas com altura de 600 µm, diâmetro da base de 250 µm e passo de 550 µm.
    2. Trate a superfície do molde de PDMS utilizando um limpador de plasma para torná-lo completamente hidrofílico.
    3. Adicione 1 mL da formulação de 3BDO@CS/HA ao molde de MN de PDMS. Coloque o molde em uma câmara de vácuo e aplique vácuo por 10 min para facilitar a infiltração da formulação viscosa nas microcavidades.
    4. Centrifugue o molde a 134 × g por 5 min à TA para garantir que a formulação preencha todas as cavidades. Utilize um raspador metálico estéril para remover cuidadosamente o excesso de formulação da superfície do molde, deixando um plano perfeitamente plano.
    5. Dispense a mistura da matriz de CS/HA sem 3BDO sobre a superfície do molde. Centrifugue a 134 × g por 5 min à TA para formar uma camada de reforço uniforme.
    6. Coloque o molde em uma estufa a 36 °C e 37% de umidade e seque-o durante a noite (aproximadamente 12–16 h).
    7. Retire com cuidado o patch de MN completamente seco do molde após o molde atingir a TA.
      NOTA: Mantenha os patches de 3BDO@MN fabricados armazenados em geladeira a 4 °C até o momento de uso.

2. Caracterização dos patches de 3BDO@MN

  1. Monte o curativo 3BDO@MN preparado sobre um suporte usando fita de carbono condutiva dupla face.
    1. Recubra por pulverização catódica a amostra montada com uma fina camada de ouro (ou platina) para aumentar a condutividade elétrica.
    2. Insira o suporte com a amostra na câmara a vácuo de um microscópio eletrônico de varredura de emissão de campo (MEV-EF).
    3. Ajuste a tensão de aceleração e a distância de trabalho para obter imagens de alta resolução. Observe a morfologia geral do arranjo e a topografia superficial detalhada das MNs individuais.
    4. Adquira micrografias representativas de MEV. Meça o comprimento das MNs e o diâmetro da ponta.
  2. Teste de resistência mecânica
    1. Coloque o curativo de MNs plano sobre a plataforma do analisador de textura. Certifique-se de que o substrato esteja perfeitamente plano e que as pontas das agulhas estejam voltadas diretamente para cima.
    2. Fixe firmemente uma sonda cilíndrica plana (25 mm de diâmetro) ao célula de carga do instrumento.
    3. Desça a sonda verticalmente até que ela fique posicionada logo acima das pontas das MNs. Evite qualquer contato físico entre a sonda e as pontas antes do teste.
    4. Defina os parâmetros específicos de teste no software: ajuste a velocidade de descida para 0,05 mm/s e defina a distância-alvo de deslocamento para 0,7 mm.
  3. Teste de dissolução
    1. Estique a pele dorsal de rato sobre uma placa de dissecação e seque a superfície da pele com papel absorvente. Mantenha a pele plana e sem rugas.
    2. Coloque os curativos de MNs secos com as pontas das agulhas voltadas para baixo sobre a superfície da pele e aplique pressão vertical uniforme para garantir a inserção das MNs na pele.
    3. Remova os curativos da pele em intervalos de tempo predeterminados (5, 10, 30 e 60 s) e seque por 5 min.
    4. Observe a morfologia residual por MEV nas mesmas condições de imagem.
  4. Ensaios in vitro de liberação de fármaco
    1. Adicione 500 µL de solução salina tamponada com fosfato (PBS) a cada poço de uma placa de 6 poços. Coloque as MNs carregadas com 3BDO em cada poço, de modo que entrem em contato com o PBS.
    2. Incube as placas à temperatura ambiente (RT). Em cada ponto de tempo, colete 500 µL de PBS para quantificação da concentração de 3BDO.
    3. Reponha imediatamente cada poço com 500 µL de PBS fresco para manter condições de sumidouro.
    4. Calcule a porcentagem cumulativa de 3BDO liberado com base na carga total de fármaco inicialmente presente nas MNs.
  5. Ensaios antibacterianos
    1. Retire as culturas bacterianas armazenadas (E. coli e Staphylococcus aureus) do congelador a -80 °C e adicione 10 µL de cada cultura a 5 mL de meio LB.
    2. Incube o meio inoculado em agitador incubado a 37 °C e 250 rpm por aproximadamente 16 h (durante a noite).
    3. Ajuste a cultura bacteriana com meio LB para uma OD620 inicial de 0,01.
    4. Dilua a solução estoque de CS com água estéril para preparar soluções de CS em seis concentrações (1, 5, 10, 50, 100 e 500 mg/mL), com três repetições para cada concentração.
    5. Divida as amostras em três grupos: grupo branco, grupo controle e grupo CS. Para o grupo branco, adicione 200 µL de LB. Para o grupo controle, adicione 180 µL de solução bacteriana e 20 µL de água estéril. Para o grupo CS, adicione 180 µL de solução bacteriana e 20 µL da concentração correspondente de solução de CS.
    6. Incube a 37 °C por 20 h.
    7. Meça e registre a OD620 de cada poço da placa de 96 poços em um leitor de placas de absorvância no tempo 0 h e 20 h.
  6. Avaliações de citotoxicidade
    1. Plante 100 µL de suspensão de células epidérmicas ou dérmicas em uma placa de 96 poços (2 × 103 células por poço).
    2. Adicione 10 µL dos respectivos tratamentos aos poços designados para estabelecer quatro grupos: um grupo controle (meio de cultura), um grupo 3BDO (concentração final de 1 µM), um grupo extrato de MN e um grupo 3BDO+extrato de MN, com 3 repetições para cada grupo.
    3. Incube a 37 °C, 5% CO₂ por 24 h.
    4. Adicione 10 µL de solução de trabalho do Kit de Contagem Celular-8 (CCK-8) a cada poço.
      NOTA: Evite formar bolhas nos poços, pois elas podem afetar as leituras de absorvância.
    5. Incube a 37 °C, 5% CO₂ por 2 h.
    6. Leia a absorvância em 450 nm em todos os poços utilizando um espectrofotômetro de microplacas.
    7. Analise os dados e calcule a taxa de sobrevivência celular.

3. Experimentos com animais

  1. Preparação e tratamento do animal experimental
    1. Anestesiar camundongos machos C57BL/6 de 7 semanas de idade com isoflurano e manter a termorregulação durante a anestesia.
      CAUTION: O isoflurano é um anestésico volátil. Operar em ambiente bem ventilado para evitar inalação excessiva.
    2. Aplicar lubrificante oftálmico nos olhos dos camundongos para protegê-los da dessecação.
    3. Depilar os pelos da região dorsal dos camundongos com uma máquina elétrica, deixando uma área depilada de aproximadamente 2 × 2 cm2.
    4. Aplicar o creme depilatório, aguardar 5–10 s e, em seguida, removê-lo com um lenço. Limpar a pele com um cotonete umedecido em solução salina para remover qualquer resíduo de creme depilatório e pelos.
    5. Recortar os patches de microagulhas (MN) e reservá-los.
    6. Dividir aleatoriamente os camundongos depilados em cinco grupos (n = 5 por grupo) e tratar conforme a seguir:
      1. Grupo controle não tratado: apenas depilar os pelos, sem nenhum tratamento adicional.
      2. Grupo com patch de MN vazio: tratar a pele depilada com patches de MN sem 3BDO, seguindo o mesmo cronograma do grupo 3BDO@MN.
      3. Grupo com patch 3BDO@MN: tratar a pele depilada com patches de 3BDO@MN nos dias 1, 3, 5, 7, 9, 11 e 13.
      4. Grupo com injeção subcutânea de PBS: administrar injeção subcutânea de solução PBS na região dorsal depilada dos camundongos diariamente.
      5. Grupo com injeção subcutânea de 3BDO: administrar injeção subcutânea de solução de 3BDO na região dorsal depilada dos camundongos diariamente.
    7. Colocar os patches de 3BDO@MN sobre a pele depilada e aplicar pressão vertical uniforme para garantir a inserção das microagulhas na pele. Fixar os patches de 3BDO@MN com uma bandagem elástica e usar um prendedor reto para manter a bandagem no lugar.
      ​NOTE: Os diferentes esquemas de dosagem foram escolhidos com base nas características distintas de liberação de cada estratégia: o patch de 3BDO@MN proporciona liberação sustentada localizada, enquanto a injeção subcutânea libera o 3BDO como uma dose em bólus.
    8. Observar os camundongos durante todo o experimento para garantir que eles se recuperem completamente da anestesia.
  2. Coleta de amostras e avaliação do crescimento capilar
    1. Fotografar a pele dorsal dos camundongos diariamente para registrar o crescimento dos pelos.
    2. Avaliar o crescimento dos pelos medindo o diâmetro do fio capilar, a cobertura capilar e a densidade capilar no dia 15. Quantificar a porcentagem de cobertura capilar na área tratada utilizando o software ImageJ.

Resultados

Este protocolo apresenta a fabricação e caracterização do curativo 3BDO@MN. Figura 1 mostra o esquema do processo de fabricação do curativo 3BDO@MN. O 3BDO foi misturado na formulação de CS/HA, e a mistura da matriz foi então adicionada à matriz de MN de PDMS e centrifugada para preencher as pontas das agulhas. A mistura da matriz de CS/HA sem 3BDO foi adicionada à superfície da matriz e centrifugada para preencher a camada de suporte. Após secagem completa, os curativos foram destacados para obter os curativos 3BDO@MN. A morfologia das MNs foi caracterizada por MEV, conforme mostrado na Figura 2A.

As MNs cônicas foram formadas uniformemente em um arranjo 20 × 20 em um curativo de 15 × 15 mm, cada uma com largura da base de 250 µm e altura de 600 µm. As pontas das MNs resistiram a uma força de 1,2 N, suficiente para penetração na pele, conforme evidenciado por orifícios claros de inserção observados por meio de coloração com hematoxilina e eosina (H&E) (Figura 2B,C). A pele dorsal de camundongo foi então utilizada para testar a aplicação de curativos com 3BDO@MN. Os curativos foram pressionados contra a pele do camundongo para medir o tempo de dissolução, e as pontas das MNs se dissolveram completamente em até 60 s (Figura 2D). No ensaio in vitro, o perfil de liberação do 3BDO a partir das MNs mostrou que aproximadamente 90% do fármaco foi liberado (Figura 2E). O extrato das MNs não apresentou citotoxicidade em células epidérmicas e dérmicas, enquanto 1 µM de 3BDO promoveu significativamente o crescimento celular (Figura 2F). A formulação contendo quitosana demonstrou atividade antibacteriana dependente da concentração contra E. coli e S. aureus, com efeito mais acentuado em concentrações superiores a 10 mg/mL (Figura 2G,H). Esses resultados apoiam o uso da quitosana como componente funcional da formulação das MNs, embora testes adicionais dos curativos fabricados sejam necessários para confirmar o desempenho antibacteriano em condições de aplicação.

Os resultados experimentais com animais demonstraram que o grupo 3BDO@MN exibiu pigmentação significativa da pele no dia 5. No dia 15, o grupo que recebeu injeções de 3BDO apresentou cerca de 45% de cobertura capilar, em comparação com aproximadamente 39% no grupo controle, enquanto o grupo 3BDO@MN alcançou cerca de 90% de cobertura (Figura 3). O crescimento capilar no grupo 3BDO@MN foi mais uniforme e denso, indicando melhor penetração e retenção do fármaco em comparação com a injeção direta.

Em conjunto, esses achados indicam que a entrega mediada por MN de 3BDO promoveu o crescimento capilar no modelo de camundongo C57BL/6 despilado utilizado neste estudo. São necessários estudos adicionais para determinar se essa abordagem é eficaz em modelos específicos de alopecia androgenética e sob condições de dosagem clinicamente relevantes.

Diagrama do processo de bioimpressão 3D: revestimento 3BDOQCS/HA, centrífuga, secagem a vácuo, matriz CS/HA.
Figura 1. Ilustração esquemática do processo de fabricação dos 3BDO@MNs. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Diagramas de matriz de microneedles e gráficos de viabilidade celular; estudo sobre as propriedades antibacterianas do lactato de quitosana.
Figura 2. Fabricação e caracterização do sistema 3BDO@MN. (A) Imagem de MEV mostrando a morfologia dos 3BDO@MN. Barra de escala = 500 µm. (B) Curva força-deslocamento dos 3BDO@MN. (C) Seção transversal de pele de camundongo corada com H&E após inserção dos 3BDO@MN e remoção da base, confirmando a penetração bem-sucedida no tecido. Barra de escala = 100 µm. (D) Imagens de MEV mostrando a dissolução dos MNs aos 5 s, 10 s, 30 s e 60 s após a inserção na pele. (E) Perfil cumulativo in vitro de liberação do 3BDO a partir dos MNs. (F) Viabilidade celular de células epidérmicas e células dérmicas tratadas com 3BDO, extrato de MN e extrato de MN contendo 3BDO após 24 h. (G,H) Absorbância em 620 nm das suspensões de (G) Staphylococcus aureus e (H) Escherichia coli cultivadas em meio contendo quitosana em diferentes concentrações. Os dados são apresentados como média ± DP (n = 3), e a significância estatística foi analisada por ANOVA a um critério (**p < 0,01). Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Experimento de crescimento capilar com patches de microagulhas (MNs); resultados de pigmentação e cobertura capilar em camundongos.
Figura 3. Efeitos do 3BDO@MNs na regeneração capilar in vivo. (A) Ilustração esquemática dos experimentos com animais. (B) Imagens representativas da pele dorsal de camundongos no dia 0 (aparado), dia 5, dia 10 e dia 15 após o tratamento. (C) Análise quantitativa dos escores de pigmentação (unidades arbitrárias) em (B). (D) Análise quantitativa da área de cobertura capilar (%) na região tratada em (B). (E) Mudança relativa da área de cobertura capilar na região tratada em comparação com o grupo controle. Os dados são apresentados como média ± DP (n = 5) e a significância estatística foi analisada por ANOVA unidirecional (**p < 0,01). Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Discussão

Atualmente, os tratamentos clínicos para a AAG são principalmente classificados em intervenções farmacológicas e transplante cirúrgico. Neste estudo, os MNs carregados com 3BDO promoveram o crescimento capilar em um modelo de camundongo C57BL/6. No entanto, os métodos convencionais de administração de fármacos apresentam limitações, como distribuição desigual do medicamento. O protocolo principal deste estudo é um método em duas etapas para fabricar MNs carregados com 3BDO. O AH e o CS são os componentes principais dos MNs. Várias etapas críticas exigem atenção para garantir a qualidade dos MNs.

Primeiro, para evitar a formação de bolhas de ar na solução polimérica, utilizou-se um molde pré-resfriado para retardar a evaporação do solvente durante a centrifugação. Segundo, as condições de secagem afetam diretamente a fragilidade da ponta e a integridade da camada de suporte. Secagem por 16 h a 36 °C com umidade controlada ajudou a garantir pontas com resistência mecânica suficiente, ao mesmo tempo em que manteve a flexibilidade da camada de suporte, evitando a secagem excessiva. Terceiro, uma velocidade de 134 × g por 5 min concentra efetivamente o 3BDO na região da ponta, mas velocidades mais altas ou tempos mais longos podem causar precipitação do fármaco na base da matriz, reduzindo a eficiência de entrega. Para o in vivo ensaio, camundongos C57BL/6 foram utilizados como modelo de regeneração capilar. Os folículos pilosos de camundongos C57BL/6 exibem um ciclo de crescimento capilar visível e altamente sincronizado, o que oferece conveniência experimental e os torna um dos modelos mais comuns para o estudo de doenças cutâneas¹⁶. Aproximadamente aos 7 semanas de idade, os folículos pilosos de camundongos C57BL/6 entram naturalmente na fase telógena. Após a depilação artificial dos camundongos, os folículos pilosos reentram imediatamente na fase anágena17. O in vivo ensaio mostrou que o sistema MN promoveu um crescimento capilar mais uniforme do que a injeção subcutânea neste modelo.

O sistema 3BDO@MN pode representar uma estratégia pré-clínica promissora para o tratamento da queda de cabelo, integrando uma molécula pequena regeneradora capilar com uma plataforma de liberação transdérmica minimamente invasiva. Formulações de microneedles de ação prolongada já demonstraram permitir a liberação controlada ou sustentada de fármacos, reduzir a frequência de administração e melhorar a adesão do paciente, superando algumas limitações associadas aos tratamentos tópicos ou sistêmicos convencionais18,19. Além disso, estratégias recentes de regeneração capilar assistidas por microneedles, incluindo a entrega de células-tronco, reforçam ainda mais a aplicabilidade mais ampla das plataformas de microneedles nesta área20. Contudo, antes da translação clínica, ainda são necessários estudos adicionais para avaliar a biossegurança de longo prazo, perfis farmacocinéticos/farmacodinâmicos, otimização de dose, estabilidade durante o armazenamento e produção em larga escala.

Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82273554), pelo Projeto de Desenvolvimento Científico e Tecnológico em Saúde da Província de Shandong (nº 202304030716), pelo Programa Nacional de Treinamento em Inovação e Empreendedorismo para Estudantes Universitários da China (nº 202410439001) e pelo Projeto de Desenvolvimento de Inovação Científica e Tecnológica de Tai’an (nº 2023NS232).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
3BDOYuanye Bio-Technology Co., Xangai, China890405-51-3Preparação da formulação CS/HA carregada com 3BDO
Placa de 6 poçosCorning Incorporated, EUAREF 3516ensaio antibacteriano e ensaio de liberação de fármaco in vitro
Etanol 75%Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd.1202050004Desinfecção
Placa de 96 poçosCorning Incorporated, EUAREF3599avaliações de citotoxicidade celular e ensaio antibacteriano
Camundongos C57BL/6Charles River Laboratories7 semanasexperimentos com animais
Kit de Contagem Celular-8 (CCK-8)Dojindo, JapãoCK04avaliações de citotoxicidade
CentrífugaThermo Fisher Scientific75007204centrífuga para formulação
Quitosana (CS) Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd9012-76-4Preparação da formulação CS/HA
Creme depilatórioVeet3059944023307Depilação
Dissulfóxido de dimetila (DMSO)Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd67-68-5Preparação da formulação CS/HA carregada com 3BDO
Balança eletrônicaRadwagAS 220.R2Pesagem de pó
Escherichia coli (E. coli)ATCC/ensaio antibacteriano
Ácido hialurônico (HA) em póBloomage Biotechnology Co. China9067-32-7Preparação da formulação CS/HA
Software ImageJInstitutos Nacionais de Saúde/Análise estatística
Agitador-incubadoraThermo Scientific  50163013incubação bacteriana
Vaporizador de isofluranoGene&IAMSanestesia animal
Meio LBSigma Life ScienceL3022ensaio antibacteriano
Agitador magnéticoHangzhou MiuLab Instrument Co., Ltd.SP-16Agitação da formulação
Espectrofotômetro microplaca Multiskan SkyHighThermo Fisher Scientific/Medição de OD
EstufaShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co.,LtdDHG-9260ASecagem de microneedles
Parafilm MAmcor PM-996vedação de microneedles
Solução tampão fosfato (PBS)BiosharpBL302Aensaio de liberação de fármaco in vitro
Staphylococcus aureus (S. aureus)ATCC/ensaio antibacteriano
Analisador universal de textura TAShanghai Tengba Instrument Technology Co., Ltd/Teste de resistência mecânica
Câmara de vácuoShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co.,LtdDZF-6050Secagem a vácuo

Referências

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