Este protocolo descreve a fabricação, caracterização e aplicação de patches de microneedles carregados com 3BDO e de dissolução rápida para administração transdérmica de fármacos em um modelo de regeneração capilar em camundongo.
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Artigo de método
Fabricação e Caracterização de Adesivos de Microagulhas Dissolvíveis Carregados com 3BDO para Recrescimento Capilar em Camundongos C57BL/6
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Neste artigo
Resumo
Resumo
Os tratamentos convencionais para a alopecia androgenética (AA) apresentam limitações, o que motiva abordagens alternativas de administração. Este protocolo descreve a fabricação, caracterização e aplicação de microagulhas solúveis carregadas com 3BDO, compostas por ácido hialurônico/quitosana (HA/CS), em um modelo de regeneração capilar em camundongos C57BL/6. O método utiliza um processo de moldagem em duas etapas em um molde de polidimetilsiloxano (PDMS) para concentrar o 3BDO nas pontas das microagulhas, ao mesmo tempo em que forma uma camada de suporte de HA/CS sem fármaco. O curativo é caracterizado por meio de imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV), testes mecânicos, testes de inserção e dissolução na pele, testes de liberação in vitro, ensaios antibacterianos, testes de citotoxicidade e avaliação in vivo da regeneração capilar. Após a inserção, as pontas das microagulhas se dissolvem, liberando o 3BDO localmente. A avaliação in vivo mostrou que o grupo tratado com microagulhas carregadas com 3BDO apresentou uma regeneração capilar mais uniforme em comparação com os grupos submetidos à injeção subcutânea e ao grupo controle. Este protocolo também permite a avaliação da morfologia do curativo, do desempenho na inserção e da biocompatibilidade local. Este método fornece um fluxo de trabalho pré-clínico para avaliar a administração mediada por microagulhas do 3BDO em aplicações de regeneração capilar.
Introdução
A alopecia androgenética (AGA) é uma das doenças clínicas de queda de cabelo mais comuns, caracterizada principalmente pelo afinamento progressivo e perda de cabelo no couro cabeludo. Sua prevalência ao longo da vida permanece persistentemente alta entre homens, tornando-a um problema de saúde crítico que exige resolução urgente1,2. Atualmente, os tratamentos clínicos para a AGA são principalmente classificados em intervenções farmacológicas e transplante cirúrgico, ambos com desvantagens significativas. Fármacos terapêuticos de primeira linha, como finasterida e minoxidil, apresentam certos efeitos terapêutic....
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Protocolo
O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação animal da Universidade Médica de Shandong & Academia de Ciências Médicas de Shandong (W202112030345). Todos os métodos foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentações pertinentes.
1. Fabricação dos patches 3BDO@MN
- Preparação da formulação de CS/HA
- Pese 1 g do pó de CS (grau de desacetilação ≥ 95%) e adicione-o a 20 mL de água destilada, seguido de agitação à temperatura ambiente (TA) por 10 min.
- Continue adicionando 0,4 mL de solução de ácido acético 2% (v/v) (massa molecular 60,05) e continue agitando por 2 h.....
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Resultados
Este protocolo apresenta a fabricação e caracterização do curativo 3BDO@MN. Figura 1 mostra o esquema do processo de fabricação do curativo 3BDO@MN. O 3BDO foi misturado na formulação de CS/HA, e a mistura da matriz foi então adicionada à matriz de MN de PDMS e centrifugada para preencher as pontas das agulhas. A mistura da matriz de CS/HA sem 3BDO foi adicionada à superfície da matriz e centrifugada para preencher a camada de suporte. Após secagem completa, os curativos for.......
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Discussão
Atualmente, os tratamentos clínicos para a AAG são principalmente classificados em intervenções farmacológicas e transplante cirúrgico. Neste estudo, os MNs carregados com 3BDO promoveram o crescimento capilar em um modelo de camundongo C57BL/6. No entanto, os métodos convencionais de administração de fármacos apresentam limitações, como distribuição desigual do medicamento. O protocolo principal deste estudo é um método em duas etapas para fabricar MNs carregados com 3BDO. O AH e o CS são os componentes principais dos M.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82273554), pelo Projeto de Desenvolvimento Científico e Tecnológico em Saúde da Província de Shandong (nº 202304030716), pelo Programa Nacional de Treinamento em Inovação e Empreendedorismo para Estudantes Universitários da China (nº 202410439001) e pelo Projeto de Desenvolvimento de Inovação Científica e Tecnológica de Tai’an (nº 2023NS232).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 3BDO | Yuanye Bio-Technology Co., Xangai, China | 890405-51-3 | Preparação da formulação CS/HA carregada com 3BDO |
| Placa de 6 poços | Corning Incorporated, EUA | REF 3516 | ensaio antibacteriano e ensaio de liberação de fármaco in vitro |
| Etanol 75% | Shandong Lircon Medical Technology Co., Ltd. | 1202050004 | Desinfecção |
| Placa de 96 poços | Corning Incorporated, EUA | REF3599 | avaliações de citotoxicidade celular e ensaio antibacteriano |
| Camundongos C57BL/6 | Charles River Laboratories | 7 semanas | experimentos com animais |
| Kit de Contagem Celular-8 (CCK-8) | Dojindo, Japão | CK04 | avaliações de citotoxicidade |
| Centrífuga | Thermo Fisher Scientific | 75007204 | centrífuga para formulação |
| Quitosana (CS) | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | 9012-76-4 | Preparação da formulação CS/HA |
| Creme depilatório | Veet | 3059944023307 | Depilação |
| Dissulfóxido de dimetila (DMSO) | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | 67-68-5 | Preparação da formulação CS/HA carregada com 3BDO |
| Balança eletrônica | Radwag | AS 220.R2 | Pesagem de pó |
| Escherichia coli (E. coli) | ATCC | / | ensaio antibacteriano |
| Ácido hialurônico (HA) em pó | Bloomage Biotechnology Co. China | 9067-32-7 | Preparação da formulação CS/HA |
| Software ImageJ | Institutos Nacionais de Saúde | / | Análise estatística |
| Agitador-incubadora | Thermo Scientific | 50163013 | incubação bacteriana |
| Vaporizador de isoflurano | Gene&I | AMS | anestesia animal |
| Meio LB | Sigma Life Science | L3022 | ensaio antibacteriano |
| Agitador magnético | Hangzhou MiuLab Instrument Co., Ltd. | SP-16 | Agitação da formulação |
| Espectrofotômetro microplaca Multiskan SkyHigh | Thermo Fisher Scientific | / | Medição de OD |
| Estufa | Shanghai Huitai Instrument Manufacturing Co.,Ltd | DHG-9260A | Secagem de microneedles |
| Parafilm M | Amcor | PM-996 | vedação de microneedles |
| Solução tampão fosfato (PBS) | Biosharp | BL302A | ensaio de liberação de fármaco in vitro |
| Staphylococcus aureus (S. aureus) | ATCC | / | ensaio antibacteriano |
| Analisador universal de textura TA | Shanghai Tengba Instrument Technology Co., Ltd | / | Teste de resistência mecânica |
| Câmara de vácuo | Shanghai Huitai Instrument Manufacturing Co.,Ltd | DZF-6050 | Secagem a vácuo |
Referências
- Zhou C, Li X, Wang C, Zhang J. Alopecia areata: an update on etiopathogenesis, diagnosis, and management. Clin Rev Allergy Immunol. 2021;61(3):403-23.
- Rudnicka L. Hair loss is a symptom of many complex medical and psychological problems. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2023;37(8):1460-1.
- Alessandrini A, Bruni F, Piraccini BM, Starace M. Common causes of hair loss: clinical manifestations, trichoscopy and therapy. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2021;35(3):629-40.
- Zhao X et al. Long noncoding RNA CA7-4 promotes autophagy and apoptosis via sponging MIR877-3P and MIR5680 in high glu....
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Reimpressões e permissões
