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Artigo de investigação

Lesão da Mucosa Gástrica Induzida por Clopidogrel Associada ao Estresse do Retículo Endoplasmático em Ratos

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DOI:

10.3791/72097

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28 de agosto de 2026

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1Gastroenterology Department, Dagang Hospital of Binhai New Area, 2Clinical Laboratory, Tianjin Adicon Clinical Laboratories Co., Ltd.

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este estudo investiga a lesão da mucosa gástrica associada ao tratamento com clopidogrel em ratos e células epiteliais gástricas, destacando sua associação com alterações moleculares relacionadas ao estresse do retículo endoplasmático, apoptose e inflamação sistêmica.

Resumo

O clopidogrel é amplamente utilizado como agente antiplaquetário para a prevenção e tratamento de doenças trombóticas arteriais, mas sua aplicação clínica pode ser limitada por efeitos adversos gastrointestinais, incluindo lesão da mucosa gástrica. Como a sobrevivência das células epiteliais é essencial para manter a integridade da mucosa gástrica, formulamos a hipótese de que a lesão epitelial gástrica induzida pelo clopidogrel seria acompanhada por alterações nos marcadores relacionados ao estresse do retículo endoplasmático (ER) e à apoptose. Para testar essa hipótese, células epiteliais gástricas humanas GES-1 foram tratadas com diferentes concentrações de clopidogrel, e a viabilidade celular, apoptose, distribuição do ciclo celular e alterações moleculares foram avaliadas utilizando o ensaio com o kit de contagem celular-8 (CCK-8), citometria de fluxo, reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR) e Western blotting. Paralelamente, ratos Sprague-Dawley receberam clopidogrel por gavagem para estabelecer um modelo in vivo de lesão gástrica. As alterações patológicas da mucosa gástrica foram avaliadas por coloração com hematoxilina e eosina, e os níveis séricos de citocinas inflamatórias foram medidos por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). O clopidogrel reduziu a viabilidade das células GES-1, promoveu apoptose e alterou a progressão do ciclo celular. Em ratos, o clopidogrel induziu erosão da mucosa gástrica, edema e infiltração de células inflamatórias, acompanhado por aumento nos níveis séricos de interleucina (IL)-1β, IL-6 e fator de necrose tumoral-α (TNF-α). O clopidogrel também aumentou a expressão dos marcadores de estresse do retículo endoplasmático proteína homóloga a C/EBP (CHOP) e fator de transcrição ativador 5 (ATF5), aumentou a expressão da proteína Bcl-2 associada a X (Bax), diminuiu a expressão da linfoma de células B 2 (Bcl-2) e elevou a razão Bax/Bcl-2 em tecidos gástricos e nas células GES-1. Esses achados sugerem que a lesão da mucosa gástrica induzida pelo clopidogrel está associada ao aumento da expressão de marcadores relacionados ao estresse do retículo endoplasmático e à desregulação do equilíbrio Bax/Bcl-2, embora uma relação causal direta entre a via de estresse do retículo endoplasmático e a apoptose mitocondrial não tenha sido estabelecida neste estudo.

Introdução

Os sistemas imunológico inato e adaptativo da mucosa gástrica, compostos por células epiteliais, células imunes e moléculas sinalizadoras, atuam em conjunto para manter a integridade da mucosa e funcionam como uma barreira fisiológica crítica contra fatores nocivos1,2. Essa função protetora é essencial para a homeostase gastrointestinal, e sua interrupção pode contribuir para o desenvolvimento de doenças gástricas, incluindo gastrite3. Clinicamente, a lesão da mucosa gástrica induzida por medicamentos é uma complicação comum, sendo as drogas anti-inflamatórias não esteroides e os agentes antiplaquetários entre as causas mais frequentes4. A integridade da mucosa gástrica depende de um equilíbrio dinâmico entre proliferação celular e apoptose5. A exposição crônica a fatores ambientais, incluindo medicamentos, pode desestabilizar esse equilíbrio, promover a apoptose e resultar em lesão da mucosa6,7. O retículo endoplasmático desempenha um papel central na manutenção da homeostase intracelular. Em condições de estresse celular, o acúmulo de proteínas mal dobradas ou desdobradas ativa a resposta à proteína desdobrada, incluindo a sinalização PERK/eIF2α/ATF4/CHOP, que pode promover a apoptose e alterar a expressão das proteínas da família da linfoma de células B (Bcl-2)8. A ATF5 também está envolvida nas respostas ao estresse mitocondrial e na interação entre disfunção mitocondrial e estresse do retículo endoplasmático9. Evidências clínicas recentes indicam que a terapia contínua com antiplaquetários, incluindo clopidogrel, está associada à lesão progressiva da mucosa gástrica e do intestino delgado10.

O clopidogrel é um agente antiplaquetário amplamente prescrito que requer ativação metabólica antes de se ligar irreversivelmente aos receptores plaquetários P2Y12, inibindo assim a agregação plaquetária mediada por difosfato de adenosina e produzindo efeitos antitrombóticos11. Essa bioativação ocorre principalmente por meio das enzimas hepáticas do citocromo P450. Portanto, a exposição direta de células epiteliais gástricas cultivadas ao composto original do clopidogrel não reproduz o contexto metabólico e farmacocinético completo do tratamento com clopidogrel in vivo. No entanto, evidências crescentes sugerem que o tratamento com clopidogrel pode estar associado a úlceras gástricas recorrentes e sangramento gastrointestinal, destacando a importância de equilibrar a eficácia antitrombótica com a segurança gastrointestinal12,13,14. Embora esses efeitos adversos tenham sido relatados, os mecanismos subjacentes à lesão da mucosa gástrica associada ao clopidogrel permanecem parcialmente compreendidos, limitando o desenvolvimento de estratégias preventivas e terapêuticas direcionadas. No presente estudo, investigamos os efeitos do clopidogrel na mucosa gástrica utilizando ratos Sprague–Dawley e células GES-1. Os ratos receberam clopidogrel por gavagem, e experimentos complementares in vitro foram realizados com células GES-1. Análises histopatológicas, moleculares e celulares foram conduzidas para investigar se a lesão da mucosa gástrica induzida por clopidogrel está associada ao estresse do retículo endoplasmático e à apoptose. Assim, o presente estudo focou-se em caracterizar as alterações moleculares associadas à lesão gástrica induzida por clopidogrel, em vez de estabelecer uma via de sinalização causal. Nossos achados fornecem novas perspectivas sobre as alterações moleculares associadas à lesão da mucosa gástrica induzida por clopidogrel e podem contribuir para estudos futuros voltados à prevenção e ao manejo desses efeitos adversos.

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Protocolo

Todos os procedimentos experimentais com animais foram revisados e aprovados pelo Laboratório de Inspeção Ética Experimental Animal da Dr. Can Biotechnology (Zhejiang) Co., Ltd. O estudo foi conduzido de acordo com as diretrizes institucionais para o cuidado e uso de animais de laboratório. O número de aprovação de ética animal foi DRK-20251015210.

Animais e Linhagens Celulares

A aprovação ética abrangeu o uso de 20 ratos Sprague–Dawley de grau SPF. Um total de 12 ratos Sprague–Dawley de grau SPF, machos, com idade entre 6 e 8 semanas e peso entre 280 e 300 g no início do experimento, foram incluídos no presente estudo. Os ratos foram obtidos da Hangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Hangzhou, China; Licença de Produção nº SCXK [Zhejiang] 2024-0004) e distribuídos aleatoriamente nos grupos controle e tratado com clopidogrel, com seis ratos por grupo. Os animais foram mantidos em um ambiente controlado a aproximadamente 22 °C, sob ciclo de luz/escuridão de 12 h, com acesso livre a ração padrão e água potável esterilizada. Todos os ratos tiveram um período de aclimatação de uma semana antes do início do experimento. O clopidogrel hidrogenssulfato foi suspenso em carboximetilcelulose sódica (CMC-Na) a 0,5% na concentração de 0,781 mg/mL. Os ratos do grupo tratado com clopidogrel receberam clopidogrel hidrogenssulfato por gavagem oral na dose de 10 mL/kg de peso corporal (equivalente a 1 mL/100 g de peso corporal e a uma dose de 7,81 mg/kg) uma vez ao dia durante 3 dias consecutivos. Os ratos do grupo controle receberam volume igual de CMC-Na a 0,5%. A dose e a duração do tratamento de 3 dias foram escolhidas com base em um modelo em rato previamente descrito para administração oral de clopidogrel em curto prazo. Após a última gavagem no dia 3, a alimentação foi suspensa por 12 h, enquanto a água foi fornecida ad libitum. Os ratos foram anestesiados em câmara de indução com 3% de isoflurano em oxigênio, e a anestesia foi mantida com 1,5%–2,0% de isoflurano administrado por meio de cone nasal. A profundidade anestésica adequada foi confirmada pela ausência de reflexos corneano e de retirada plantar. A coleta de sangue foi realizada por punção cardíaca terminal sob anestesia profunda. Permanecendo ainda profundamente anestesiados, os ratos foram eutanasiados por exsanguinação seguida de toracotomia bilateral. A morte foi confirmada pela ausência de respiração espontânea e atividade cardíaca por pelo menos 5 minutos, juntamente com a ausência de reflexos corneano e de retirada plantar. O estômago foi então rapidamente removido, aberto ao longo da curvatura maior e levemente lavado com solução salina gelada.

A linhagem de células epiteliais da mucosa gástrica humana GES-1 foi obtida da iCell Bioscience Inc. (Xangai, China; n.º do catálogo iCell-h062) e foi autenticada pelo fornecedor por meio de perfis de repetições em tandem curtas. As células foram cultivadas em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de soro bovino fetal (SBF) e 1% de penicilina-estreptomicina em incubadora umidificada a 37 °C com 5% de CO₂. Células de passagens iniciais, entre as passagens 3 e 10, foram utilizadas nos experimentos. Quando a confluência celular atingiu aproximadamente 80%–90%, as células foram repassadas numa razão de divisão de 1:3. Células na fase logarítmica de crescimento foram utilizadas nos experimentos subsequentes. Para o ensaio CCK-8, as células foram semeadas em placas de 96 poços a 6 × 103 células/poço. Para as análises de apoptose e ciclo celular, as células foram semeadas em placas de 6 poços a aproximadamente 5 × 105 células/poço e deixadas aderirem antes do tratamento com clopidogrel.

Produtos Químicos e Soluções

Clopidogrel hidrogenossulfato (n.º do catálogo C874834; pureza ≥ 99%) foi utilizado nos experimentos com animais e células. Uma solução estoque de clopidogrel foi preparada dissolvendo-se 100 mg do pó de clopidogrel em dimetil sulfoxido (DMSO) para obter uma solução estoque de 1 M. A solução estoque foi posteriormente diluída para as concentrações de trabalho necessárias antes do uso. A solução estoque de 1 M foi diluída seriamente com DMSO para preparar soluções de dosagem 1000× nas concentrações de 10, 100, 200, 400, 600, 800 e 1000 mM. Imediatamente antes do tratamento, cada solução de dosagem 1000× foi adicionada ao meio de cultura completo na proporção de 1:1000 (v/v) para obter concentrações finais de clopidogrel de 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mM, respectivamente. O grupo controle veicular recebeu um volume igual de DMSO sem clopidogrel. Assim, a concentração final de DMSO foi mantida em 0,1% (v/v) em todos os grupos. As células GES-1 cultivadas não reproduzem a bioativação mediada pelo citocromo P450 hepático do clopidogrel. Portanto, o tratamento direto com clopidogrel foi utilizado como um modelo exploratório de exposição ao composto original. A faixa de concentração foi escolhida para caracterizar as respostas celulares dependentes da concentração nas condições experimentais e não deve ser interpretada como equivalente às concentrações plasmáticas ou teciduais gástricas clinicamente alcançáveis.

Subcultura de Células

O meio completo foi preparado suplementando o meio de cultura basal com soro bovino fetal (FBS) e penicilina-estreptomicina. Quando a confluência celular atingiu aproximadamente 80%, o meio de cultura foi removido e as células foram lavadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato estéril (PBS). As células foram então digeridas com solução de tripsina–ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA) por aproximadamente 1–2 min. Após a dessanexação parcial das células, adicionou-se meio completo para encerrar a digestão. A suspensão celular foi centrifugada a 1.200 × g durante 3 min. Após a remoção do sobrenadante, o pellet celular foi ressuspenso em 1–2 mL de meio completo e semado em novas placas de cultura de acordo com os requisitos experimentais.

Ensaio de Viabilidade Celular CCK-8

Células GES-1 na fase de crescimento logarítmico foram semeadas em placas de 96 poços a 6 × 103 células/poço e cultivadas durante a noite para permitir a adesão celular. Após a aderência, as células foram tratadas com diferentes concentrações de clopidogrel (0, 0,01, 0,1, 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0 mM) por 24 h. O grupo controle recebeu a mesma concentração final de veículo. Após o tratamento, solução CCK-8 foi adicionada a cada poço e incubada a 37 °C de acordo com as instruções do kit. A absorbância em 450 nm foi medida utilizando um leitor de microplacas. A viabilidade celular foi calculada como uma porcentagem do grupo controle. Com base nos resultados da curva concentração-resposta, o tratamento com clopidogrel 0,1 mM por 24 h foi selecionado para as análises subsequentes de apoptose, ciclo celular, qPCR e Western blot.

Análise por Citometria de Fluxo

Células GES-1 foram semeadas em placas de 6 poços e tratadas com clopidogrel 0,1 mM por 24 h após a adesão celular. Após o tratamento, tanto as células em suspensão quanto as aderidas foram coletadas. As células aderidas foram digeridas com tripsina sem EDTA, lavadas duas vezes com PBS frio e ressuspendidas em tampão de ligação. As células foram coradas utilizando um Kit de Apoptose Annexina V-FITC/PI de acordo com as instruções do fabricante. Após incubação à temperatura ambiente no escuro, as células apoptóticas foram detectadas utilizando um citômetro de fluxo RaiseCyte 2L6C. Os dados foram adquiridos com o software de aquisição RaiseFlower e analisados com o software FlowJo (versão 10.8.1). As populações de células em apoptose precoce, apoptose tardia e apoptose total foram quantificadas utilizando o software FlowJo.

Análise Citométrica de Fluxo da Distribuição do Ciclo Celular

Células GES-1 foram semeadas em placas de 6 poços e tratadas com clopidogrel 0,1 mM por 24 h. Após o tratamento, as células foram coletadas, lavadas com PBS e fixadas em etanol 70% pré-resfriado a 4°C. As células fixadas foram então lavadas para remover o etanol residual e incubadas com solução de coloração de RNase A e iodeto de propídio, no escuro, de acordo com as instruções do fabricante. A distribuição do ciclo celular foi analisada usando um citômetro de fluxo. Os dados foram adquiridos com o software de aquisição e analisados com o software FlowJo. As distribuições do ciclo celular foram ajustadas usando o modelo de Watson, e as porcentagens de células nas fases G0/G1, S e G2/M foram calculadas.

PCR Quantitativa em Tempo Real (qPCR)

O RNA total foi extraído de células GES-1 e amostras de tecido gástrico de rato utilizando um kit de extração de RNA, conforme as instruções do fabricante. Para as amostras de tecido, os tecidos da mucosa gástrica foram coletados rapidamente, homogeneizados em condições de baixa temperatura e submetidos à extração de RNA. A concentração e pureza do RNA foram determinadas pela medição da absorbância em 260 e 280 nm. Quantidades iguais de RNA foram transcritas reversamente em DNA complementar (cDNA) utilizando um kit de transcrição reversa com remoção de DNA genômico. A PCR quantitativa em tempo real foi realizada utilizando uma mistura mestra de PCR baseada em SYBR Green. Cada reação foi realizada em um volume total de 20 µL contendo 10 µL da mistura mestra 2×, 1 µL de cDNA, 0,4 µL do iniciador direto, 0,4 µL do iniciador reverso e 8,2 µL de água ddH₂O livre de RNase. As condições de ciclagem térmica foram as seguintes: desnaturação inicial a 95°C por 10 min, seguida por 40 ciclos de desnaturação a 95°C por 10 s, pareamento a 60°C por 30 s e extensão a 72°C por 30 s. Os níveis de expressão de CHOP, ATF5, Bcl-2 e Bax foram determinados. O gene GAPDH foi utilizado como gene de referência interno. A expressão gênica relativa foi calculada utilizando o método 2−ΔΔCt. As sequências dos iniciadores estão listadas na Tabela Suplementar 1.

Western Blot

Proteínas totais foram extraídas de células GES-1 e amostras de tecido gástrico de rato. Para amostras celulares, as células GES-1 tratadas foram lavadas com PBS frio e lisadas usando tampão de lise RIPA (ensaio de radioimunoprecipitação) contendo um inibidor de protease. Para amostras de tecido, os tecidos da mucosa gástrica foram homogeneizados em tampão RIPA sob condições de baixa temperatura e, em seguida, centrifugados para coletar o sobrenadante. As concentrações de proteína foram determinadas utilizando um ensaio de proteína BCA. Um total de 20 µg de proteína por poço foi separado por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio (SDS-PAGE) e transferido para membranas de polivinilideno fluoreto (PVDF). Após o bloqueio com albumina sérica bovina (BSA), as membranas foram incubadas durante a noite a 4°C com anticorpos primários contra CHOP (1:1000), ATF5 (1:1000), Bcl-2 (1:1000), Bax (1:1000) e β-actina (1:5000). Após lavagem, as membranas foram incubadas com os anticorpos secundários conjugados à peroxidase do rabo-de-cavalo correspondentes (1:10000). As bandas proteicas foram visualizadas usando um reagente de quimioluminescência aprimorada e capturadas com um sistema de imagem de quimioluminescência. As intensidades das bandas foram quantificadas utilizando software de análise de imagem e normalizadas em relação à β-actina.

Avaliação Histopatológica

Amostras de tecido gástrico foram coletadas de ratos Sprague–Dawley após tratamento com clopidogrel e fixadas em formalina tamponada neutra a 10%. As amostras foram desidratadas, clareadas, emblocadas em parafina e seccionadas com espessura de 4 µm. Cortes em parafina foram corados com hematoxilina e eosina. Alterações histopatológicas foram avaliadas qualitativamente ao microscópio óptico com base na morfologia da mucosa, integridade epitelial, edema e infiltração de células inflamatórias. Imagens representativas foram capturadas. Nenhum sistema de pontuação histológica foi aplicado.

Imunohistoquímica

Seções de tecido gástrico embutido em parafina foram desparafinizadas em xilol e reidratadas através de uma série graduada de etanol. A recuperação de antígeno induzida por calor foi realizada em tampão citrato. A atividade peroxidásica endógena foi bloqueada com peróxido de hidrogênio a 3% durante 10 min, e a ligação inespecífica foi bloqueada com soro normal de cabra durante 30 min à temperatura ambiente. Em seguida, as seções foram incubadas durante a noite a 4°C com anticorpos primários contra CHOP, ATF5, Bcl-2 e Bax. Após lavagem com PBS, as seções foram incubadas com o anticorpo secundário conjugado à peroxidase de rábano-picante correspondente. Os sinais imunorreativos foram visualizados utilizando solução cromogênica DAB, seguida de contra-coloração com hematoxilina. As seções foram desidratadas, clareadas, montadas e examinadas ao microscópio óptico. Imagens representativas foram capturadas, e a área de coloração positiva foi quantificada utilizando software de análise de imagem.

Coloração por Imunofluorescência

Seções de tecido gástrico embebido em parafina foram desparafinizadas, reidratadas e submetidas à recuperação de antígeno induzida por calor em tampão citrato. Após bloqueio com soro de cabra normal por 30 min, as seções foram incubadas durante a noite a 4°C com anticorpos primários contra CHOP (1:50), ATF5 (1:100), Bcl-2 (1:50) e Bax (1:200). Após lavagem com PBS, as seções foram incubadas com os respectivos anticorpos secundários fluorescentes (1:500) por 1 h à temperatura ambiente no escuro e, em seguida, contra-coloridas com DAPI. As imagens foram capturadas usando um microscópio de fluorescência com aumento de ×200. Três campos aleatórios, não sobrepostos, de cada animal foram analisados usando o software Image-Pro Plus 6.0, e a intensidade de fluorescência foi expressa como IOD/Área. Três animais por grupo foram incluídos na análise.

Ensaio Imunoenzimático (ELISA)

As amostras de sangue foram coletadas de ratos Sprague–Dawley após o tratamento e deixadas coagular à temperatura ambiente. O soro foi separado por centrifugação e armazenado a −80°C até a análise. Os níveis séricos de IL-1β, IL-6 e TNF-α foram medidos utilizando kits de ELISA de acordo com as instruções do fabricante. A absorbância foi medida usando um leitor de microplacas, e as concentrações de citocinas foram calculadas com base nas curvas padrão.

Análise Estatística

As análises estatísticas foram realizadas utilizando software de análise estatística. Os dados são apresentados como média ± DP. A normalidade e a homogeneidade da variância foram avaliadas utilizando o teste de Shapiro–Wilk e o teste de Levene, respectivamente. As comparações entre dois grupos foram realizadas utilizando o teste t de Student. As comparações entre múltiplos grupos foram realizadas utilizando análise de variância unidirecional seguida pelo teste pós-hoc de Dunnett. Um valor de P < 0,05 foi considerado estatisticamente significante. Todos os experimentos com células foram realizados com pelo menos três réplicas biológicas independentes.

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Resultados

O clopidogrel reduz a viabilidade celular de GES-1 e aumenta a apoptose In Vitro

Primeiro investigamos se o clopidogrel afeta a viabilidade celular e a apoptose em células GES-1. Ensaios CCK-8 mostraram que o tratamento com clopidogrel reduziu significativamente a viabilidade das células GES-1 (Figura 1A,B), indicando diminuição da viabilidade celular. Com base na redução geral da viabilidade celular ao longo da faixa de ...

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Discussão

O clopidogrel é amplamente utilizado para a prevenção e tratamento de doenças cardiovasculares; no entanto, seu uso clínico está associado a riscos de sangramento e complicações gastrointestinais, incluindo úlceras pépticas, sangramento e perfuração19. Portanto, compreender as alterações moleculares associadas à lesão gástrica induzida por clopidogrel é importante para melhorar a prevenção e o manejo desses efeitos adversos. No presente estudo, investigamos os efeitos do clopidogrel sobre células ...

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Divulgações

Conflito de Interesse:

Os autores declaram que não possuem interesses financeiros concorrentes conhecidos ou relações pessoais que poderiam ter parecido influenciar o trabalho relatado neste estudo.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo projeto “Pesquisa Fundamental sobre a Via de Sinalização CHOP/ATF5/Bcl-2 na Apoptose de Células Epiteliais da Mucosa Gástrica Induzida por Clopidogrel” (Número do Projeto 2023BWKY009).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Kit de Detecção de Apoptose por Anexina V-FITC/PIElabscienceE-CK-A211Kit para detecção de apoptose
Anticorpo contra ATF5Proteintech67066-1-APAnticorpo primário
Kit de Ensaios de Proteína BCASolarbioPC0020Ensaio de concentração proteica
Anticorpo contra BaxProteintech50599-1-APAnticorpo primário
Anticorpo contra Bcl-2Proteintech26593-1-APAnticorpo primário
β-actina AnticorpoProteintech66009-1-IgAnticorpo primário
Tampão BloqueadorBeyotimeP0252Solução bloqueadora para Western blot
Kit de Contagem Celular CCK-8KeyGen BiotechKGA317Ensaio de viabilidade celular
Kit de Síntese de cDNATransGen BiotechAU341Kit para síntese de cDNA de primeira fita com remoção de DNA genômico
Kit de Detecção do Ciclo CelularLianke BiotechnologyCCS012Kit para análise do ciclo celular
Anticorpo contra CHOPProteintech15204-1-APAnticorpo primário
Clopidogrel Hidrogenossulfato (Pureza ≥99%)MacklinC874834Fármaco experimental
Kit Cromogênico DABBeyotimeP0201MSubstrato para imunohistoquímica
Dissulfóxido de Dimetila (DMSO)MedChemExpressHY-Y0320CSolvente
Reagente de Quimioluminescência Aprimorado (ECL)MeilunbioMA0186Substrato quimioluminescente
Soro Bovino Fetal (FBS)Gibco10099-141Suplemento para cultura celular
Linha Celular Epitelial Gástrica Humana GES-1iCell BioscienceiCell-h062Linha celular epitelial gástrica humana
Kit de Coloração com Hematoxilina e Eosina (H&E)BeyotimeC0105SColoração histológica
Anticorpo Secundário Conjugado com Peroxidase do Rabo-de-Cavalo (HRP)ProteintechRGAM001/RGAR001Anticorpo secundário
Solução de Peróxido de HidrogênioAbsinABS9333-100mLReagente bloqueador de peroxidase endógena
Kit ELISA para IL-1βMEIMIANMM-0047R2Ensaio de citocina sérica
Kit ELISA para IL-6MEIMIANMM-0190R2Ensaio de citocina sérica
Leitor de MicroplacasBeijing Liuyi BiotechnologyWD-2102BMedição de absorbância
Solução de Penicilina-EstreptomicinaSolarbioP1400Solução antibiótica
Tampão Salino Fosfato (PBS)ServicebioG4202-500MLPBS 1×
Membrana de Difluoreto de Polivinilideno (PVDF)MilliporeIPVH00010Membrana para Western blot
Diluente para Anticorpos PrimáriosBeyotimeP0023ADiluente para anticorpos
Marca-dor de Peso Molecular ProteicoYeasenWJ103Escala proteica pré-colorida
Mistura Mestra para PCR em Tempo Real Quantitativa (SYBR Green)CWBioCW3008Reagente para qPCR
Tampão de Lise para Ensaio de Imunoprecipitação por Radioimunoensaio (RIPA)SolarbioR0010Tampão para extração proteica
RNase ALianke BiotechnologyCCS012Reagente para análise do ciclo celular
Meio RPMI-1640ServicebioG4535-500MLMeio basal para cultura celular
Ratos Sprague-DawleyHangzhou Ziyuan Laboratory Animal Technology Co., Ltd.N/AClasse SPF
Kit ELISA para TNF-αMEIMIANMM-0180R2Ensaio de citocina sérica
Kit de Extração de RNA TotalTransGen BiotechER501-01Kit de extração de RNA
Solução de Tripsina-EDTASolarbioT1300Reagente de dissociação celular

Referências

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