Este estudo descreve detalhadamente um método de modelagem para espondilose cervical em ratos e uma estratégia de intervenção com acupotomia, fornecendo um protocolo operacional visualizado para pesquisas relacionadas.
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Artigo de método
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Este estudo descreve detalhadamente um método de modelagem para espondilose cervical em ratos e uma estratégia de intervenção com acupotomia, fornecendo um protocolo operacional visualizado para pesquisas relacionadas.
A espondilose cervical (EC) é uma doença degenerativa crônica. Alterações degenerativas nos discos intervertebrais da coluna cervical, juntamente com alterações patológicas subsequentes, afetam os tecidos e estruturas circundantes, levando a manifestações clínicas como dor no pescoço, rigidez, mobilidade limitada e, ocasionalmente, dormência e sintomas irradiados nos membros superiores. Dentre essas, a compressão da raiz nervosa é a mais comum. Portanto, este estudo estabeleceu um modelo de rato de EC induzida por compressão da raiz nervosa cervical. A terapia com acupotomia tem demonstrado potencial no tratamento clínico da EC ao liberar aderências no tecido mole local e aliviar a compressão nervosa. No entanto, atualmente há uma falta de protocolos procedimentais visualizados em experimentos com animais. Este estudo fornece uma descrição detalhada de um método confiável para o estabelecimento de um modelo de rato de EC e do protocolo correspondente de intervenção com acupotomia. Neste procedimento, detalhamos o processo de indução do modelo, os passos da manipulação com acupotomia, a localização terapêutica, técnicas de contenção do rato e precauções críticas. Além disso, este estudo utilizou eletromiografia (EMG) para confirmar o estabelecimento bem-sucedido do modelo de EC e avaliou a intervenção por meio de limiares mecânicos de retirada, análise da marcha e histopatologia da raiz nervosa. Esta pesquisa não apenas fornece uma referência para o estabelecimento do modelo de rato de EC e intervenção com acupotomia, mas também oferece um framework experimental sistemático e viável para estudos futuros que investiguem os mecanismos de ação.
A espondilose cervical (EC) é uma doença espinhal degenerativa comum. Seu processo patológico central origina-se da degeneração dos discos intervertebrais, o que desencadeia uma série de alterações patológicas secundárias, incluindo estreitamento do espaço intervertebral, formação de osteófitos e hipertrofia do ligamento1,2. Essas alterações patológicas resultam em diversos sintomas clínicos, como dor e incômodo no pescoço e ombros, e dormência irradiada nos membros superiores. Em casos graves, podem ocorrer comprometimentos neurológicos, incluindo disfunção motora e até tetraplegia2,3. Notavelmente, a incidência de espondilose cervical tem aumentado gradualmente nos últimos anos, com idade de início cada vez mais jovem, impondo uma carga socioeconômica substancial4. A degeneração dos discos intervertebrais cervicais e a proliferação osteofítica podem envolver estruturas ósseas adjacentes e tecidos moles, resultando em estenose do canal espinhal cervical ou dos forames intervertebrais e, consequentemente, compressão de estruturas próximas, incluindo raízes nervosas cervicais, medula espinhal e artérias vertebrais1,2,3,4. Dentre essas, a compressão das raízes nervosas cervicais é a mais frequente, correspondendo a aproximadamente 60%–70% de todos os casos de EC5,6,7. Embora múltiplas abordagens terapêuticas estejam disponíveis na prática clínica, incluindo fisioterapia, intervenção farmacológica e cirurgia, os tratamentos não cirúrgicos tornaram-se a opção preferida para a maioria dos pacientes devido ao alto custo, trauma significativo e resultados pós-operatórios incertos dos procedimentos cirúrgicos4. Na prática médica contemporânea, medicamentos anti-inflamatórios não esteroides e agentes neurotróficos são comumente utilizados. Embora esses medicamentos possam aliviar a dor e retardar a progressão da doença até certo ponto, estão associados a reações adversas, como lesão do sistema digestivo e dano renal8,9.
A acupotomia é uma modalidade terapêutica característica desenvolvida com base nas teorias tradicionais chinesas de acupuntura combinadas com técnicas cirúrgicas minimamente invasivas modernas. Ela exerce seus efeitos por meio da dissecação e liberação de aderências do tecido mole, regulação de fatores inflamatórios locais e melhoria da microcirculação regional10,11,12. Nos últimos anos, a eficácia clínica da acupotomia para espondilose cervical tem sido amplamente reconhecida, demonstrando potencial promissor no alívio da compressão nervosa, redução da dor e melhoria da função motora cervical13,14. No entanto, quando aplicada em experimentos com animais, as intervenções com acupotomia enfrentam desafios, como localização imprecisa e dificuldade em controlar a profundidade da manipulação. Enquanto isso, para transformar essas observações clínicas em conclusões sólidas baseadas em evidências, o estabelecimento de modelos animais estáveis e reprodutíveis é um pré-requisito essencial. O método de sutura de náilon intravertebral induz compressão mecânica direta pela inserção de suturas de náilon no forame intervertebral, simulando com precisão o processo fisiopatológico da compressão clínica da raiz nervosa15. Essa abordagem de modelagem também apresenta vantagens, como um ciclo de modelagem curto e segmentos de compressão controláveis15. No entanto, seu procedimento cirúrgico depende amplamente da experiência individual, e atualmente faltam descrições operacionais detalhadas e visualizadas.
Este estudo apresenta um protocolo experimental completo, detalhado e visualizado, abrangendo o estabelecimento de um modelo de ratos de espondilose cervical e todo o procedimento de intervenção com acupotomia. Como agentes anestésicos podem afetar a medição do limiar de retirada mecânica e, consequentemente, interferir nos resultados experimentais16,17,18,19, neste estudo foi adotado um dispositivo específico para contenção de ratos. Este artigo fornece uma descrição detalhada do processo de indução do modelo em ratos, da manipulação passo a passo da acupotomia, da localização precisa dos sítios de tratamento, dos métodos de contenção e fixação dos ratos e de outros cuidados experimentais essenciais. Foram adotadas múltiplas dimensões de avaliação, incluindo a medição do limiar de retirada mecânica, gravações eletrofisiológicas, análise da marcha e observação histopatológica da raiz nervosa. Este estudo tem como objetivo fornecer um protocolo visualizado para a indução do modelo e intervenção com acupotomia em um modelo de ratos de espondilose cervical, oferecendo assim suporte metodológico para investigações mecanicistas e para a avaliação da eficácia da terapia com acupotomia no tratamento da EC.
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Todos os procedimentos experimentais foram revisados, aprovados e rigorosamente monitorados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da Beijing MDKN Biotech Company (número de aprovação: MDKN-2025-096). Todos os protocolos foram conduzidos em estrita conformidade com o Guia para Cuidados e Uso de Animais de Laboratório emitido pelos Institutos Nacionais de Saúde (NIH). Os reagentes e equipamentos utilizados neste estudo estão listados na Tabela de Materiais.
1. Animais experimentais e grupos
2. Estabelecimento do modelo de CS
OBSERVAÇÃO: Retire a comida e a água de todos os ratos por 12 h antes do modelamento. Pese e registre o peso corporal. Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos por autoclavação a vapor sob alta pressão (Figura 2A).
3. Procedimento de contenção
4. Tratamento com acupotomia
5. Teste do limiar de retirada mecânica (MWT)
OBSERVAÇÃO: Realize a medição no dia anterior à cirurgia de estabelecimento do modelo, no 3º dia e no 14º dia após a cirurgia, utilizando um estimulador mecânico de dor plantar para ratos e camundongos.
6. Registro de eletromiografia (EMG)
OBSERVAÇÃO: Realize o EMG de estado de repouso no Dia 3 após o estabelecimento do modelo, utilizando um sistema de aquisição e análise de sinal biológico.
7. Análise da marcha em ratos
OBSERVAÇÃO: Realize a análise da marcha no primeiro dia após a conclusão da intervenção com acupotomia (dia 15 pós-operatório após a cirurgia do modelo). O sistema de análise da marcha é composto por uma esteira equipada com uma correia transparente, uma câmera digital de alta velocidade posicionada sob a correia e uma estação de trabalho computadorizada.
8. Coloração HE dos tecidos da raiz nervosa
OBSERVAÇÃO: Após os testes comportamentais no 15º dia pós-operatório após a cirurgia do modelo, colete amostras de tecido da raiz nervosa para coloração com HE.
9. Análise estatística
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As avaliações do limiar de retirada mecânica (MWT) demonstraram valores basais comparáveis em todos os grupos antes da indução do modelo. No 3º dia após a modelagem e a operação simulada, nenhuma diferença significativa foi observada entre o grupo simulado e o grupo controle (p > 0,05). Em contraste, tanto o grupo modelo quanto o grupo de acupotomia exibiram uma redução acentuada no MWT em relação ao grupo simulado (p < 0,01, Figura 4). Após a conclusão do tratamento,...
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A seleção de um modelo animal apropriado é um pré-requisito para elucidar a patogênese da espondilose cervical (EC) e para avaliar rigorosamente intervenções terapêuticas. Atualmente, o método de sutura de náilon intravertebral é amplamente adotado devido às suas vantagens de relativa simplicidade, ciclo de modelagem curto e alta reprodutibilidade e confiabilidade15,20. Nesta abordagem, um material compressivo é implantado no canal espinhal de ratos para exercer ...
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Todos os autores declararam não haver conflitos de interesse potenciais.
Este estudo foi apoiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Fundamental da China (número do convênio: 2023YFC3502703) e pelo Projeto Chave do Fundo Conjunto de Inovação e Desenvolvimento da Fundação de Ciências Naturais da Província de Hubei (número do convênio: 2024AFD271).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| seringa de 0,5 mL | Hebei Yunsheng Biotechnology Co., Ltd | SN-04442 | |
| seringa de 1 mL | Shanghai Zhiyu Medical Equipment Co., LTD | ZSQ-1 | |
| Sutura 4-0 com Agulha, Monofilar (4×12) | GLASS | JZZSX193 | |
| álcool 75% | Shandong Anjie Gaoke Disinfection Technology Co. LTD | 75-500ml | |
| Agulha de Acupotomia | Beijing Huaxia Blue Chip Biotechnology Co., Ltd. | HY0440 | |
| Lâmina aderente | CITOTEST | 188105 | |
| Sistema de Aquisição e Análise de Sinais Biológicos | Techman | BL-420N | |
| Sistema de Aquisição e Análise de Sinais Biológicos (Software) | Techman | BL-420N Versão 3.0.0.237 | |
| Lâmina de cobertura | Citotest Labware Manufacturing Co.,Ltd | 10212432C | |
| Desidratador | DIAPATH | Donatello | |
| Balança eletrônica | Mettler-Toledo | ME203E/02 | |
| Estufa elétrica de secagem por jato de ar quente | Labotery | GEL-70 | |
| Máquina de inclusão | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Líquido Transparente e Descerificador Ecológico | Servicebio | G1128-1L | |
| Pinceta de Aço Inoxidável Preta com Proteção ESD (Ponta Curva) | solomen | ESD-15 | |
| Etanol | SCRC | 100092683 | |
| Bola de algodão sem gordura | Caoxian Hualu Sanitary Material Co. LTD | TZMQ-500 | |
| Kit de Coloração Constante Hematoxilina-Eosina (HE) | Servicebio | G1076 | |
| Pinça Hemostática | solomen | B0557 | |
| IBM SPSS Statistics | IBM Corporation | Versão 22.0 | |
| Sistema de imagem | Nikon | NIKON DS-U3 | |
| Iodóforo | Shandong Anjie Gaoke Disinfection Technology Co. LTD | DF-500 | |
| Isóflurano | RWD life science | R510-22-10 | |
| Luvas de látex | Beijing Ruijing Latex Products Co. LTD | RJJC-S | |
| Dispositivo Mecânico para Teste de Puncionamento da Pata | Kew basis | KW-CT-1 | |
| Pinça cirúrgica | AIZANCHENG | AZN00008 | |
| Pinça hemostática tipo mosquito | Servicebio | QX1310D | |
| Borracha neutra | SCRC | 10004160 | |
| Solução salina normal | SHIMEN | SLYS-500ml | |
| Tesoura oftálmica | solomen | B0754 | |
| Líquido de parafina | Macklin | 8012-95-1 | |
| Fixador de Paraformaldeído (Neutro) | Servicebio | G1101 | |
| Fatiador de patologia | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| Penicilina G Sódica para Injeção | Jilin Huamu Animal Health Product Co., Ltd. | Nº de Aprovação de Medicamento Veterinário 070011248 | |
| Solução de poli-L-lisina | Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd. | R23126-50ml | |
| Depilador para roedores | solomen | B1564 | |
| Sistema de Imagem e Análise da Marcha de Roedores | Clever | TreadScan; BCamCapture | |
| Sistema de Imagem e Análise da Marcha de Roedores (Software) | Clever | TreadScan Versão 4.00; BCamCapture Versão 3.00 | |
| Ratos SD | Beijing Sibefei Biotechnology Co., Ltd | A102 | |
| Máquina de Anestesia para Pequenos Animais | YuYAN | ABM | |
| Sterilizador a vapor (autoclave) | Yamato | SQ810C | |
| Lâmina cirúrgica | solomen | B1177 | |
| Máscara cirúrgica | winner | WJKZ-1 | |
| Alicate cirúrgico | solomen | B0772 | |
| Tesoura cirúrgica | GLASS | JZZSX-ZC544R | |
| Espalhador de tecidos | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | |
| Sistema de Polimento de Água Ultrapura | Aiken water El | AK-RO-C2 | |
| Fixador universal de tecidos (neutro) | Servicebio | G1101-15ML | |
| Microscópio óptico ereto | Nikon | NIKON ECLIPSE E100 | |
| Xilol | SCRC | 10023418 |
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