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Relato de caso

Relato de Caso de um Pedigre com Neuropatia Motora Hereditária Distal Causada por uma Variante Homozigótica c.1124G>A no Gene VRK1 (Vaccinia-Related Kinase 1)

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DOI:

10.3791/72503

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14 de agosto de 2026

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1Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, 2The First Clinical Medical College, Yunnan University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este estudo relata um pedigree consanguíneo chinês com neuropatia motora hereditária distal de início na idade adulta (dHMN) causada por uma variante homozigótica c.1124G>A no gene da quinase relacionada à vacínia 1 (VRK1). Os achados ampliam o espectro fenotípico clínico e genético da dHMN relacionada ao VRK1 na população chinesa.

Resumo

Este estudo teve como objetivo analisar os fenótipos clínicos, as características neurofisiológicas e a patogenicidade de variantes gênicas em uma família com neuropatia motora hereditária distal (dHMN) causada por variantes no gene VRK1, e fornecer evidências para apoiar o diagnóstico clínico e a aconselhamento genético dessa doença. Relatamos uma família consanguínea chinesa com dHMN causada por uma variante homozigótica c.1124G>Uma variante no VRK1 gene. Foram coletados os dados clínicos e eletrofisiológicos do propositus. Realizou-se sequenciamento do exoma completo (WES) e validação por meio de sequenciamento de Sanger para identificar o sítio da variante, e a interpretação da patogenicidade foi conduzida de acordo com as diretrizes do Colégio Americano de Genética Médica e Genômica/Associação para Patologia Molecular (ACMG/AMP). O propositus era um homem de 24 anos que apresentava dois anos de evolução com fraqueza progressiva e atrofia dos membros inferiores distais, acompanhadas de membros superiores esguios e ausência de distúrbio sensitivo. O exame eletrofisiológico mostrou redução da amplitude do potencial de ação muscular composto (CMAP) nos nervos motores de ambos os membros superiores e inferiores, indicando dano neurogênico periférico, enquanto a condução nervosa sensitiva era normal. O teste genético detectou uma variante homozigótica c.1124G>Uma variante (p.Trp375Ter) no VRK1 gene. Seus pais e irmãs mais velhas eram portadoras heterozigotas, e o heredograma estava de acordo com herança autossômica recessiva. De acordo com as diretrizes da ACMG, essa variante foi classificada como patogênica (evidências: PVS1, PM2, PP1). O VRK1 homozigoto c.1124G>Uma variante causa dHMN de início na vida adulta, ao invés de hipoplasia pontocerebelar tipo 1A (PCH1A), conforme anotado em alguns bancos de dados genéticos. Este pedigree apresenta fenótipos distintivos, incluindo membros superiores esguios e amplitudes de CMAP difusamente diminuídas em ambos os membros superiores e inferiores, expandindo assim o espectro clínico e genético da dHMN relacionada ao VRK1 na população chinesa.

Introdução

A neuropatia motora hereditária distal (dHMN) constitui um grupo geneticamente heterogêneo de distúrbios herdados do sistema nervoso periférico, definido patologicamente pela degeneração dependente do comprimento dos neurônios motores inferiores e de seus axônios. Clinicamente, os pacientes apresentam fraqueza progressiva e atrofia dos músculos distais dos membros, enquanto a função sensorial permanece amplamente preservada na maioria dos casos1. As manifestações iniciais afetam tipicamente os membros inferiores distais, incluindo fraqueza na flexão dos dedos dos pés e atrofia dos músculos gastrocnêmio e intrínsecos do pé, com progressão gradual para envolver os músculos interósseos da mão e os músculos thenar e hipotenar à medida que a doença avança2. Os padrões de herança variam entre os subtipos, com formas autossômicas dominantes e autossômicas recessivas descritas. Até o momento, mais de 50 genes patogênicos foram associados à dHMN, mas a causa genética subjacente permanece não identificada em mais da metade dos indivíduos afetados3.

Dada a acentuada heterogeneidade genética e a extensa sobreposição fenotípica com outras condições neuromusculares, o diagnóstico de dHMN baseado exclusivamente na avaliação clínica é frequentemente pouco confiável4. Abordagens diagnósticas convencionais em etapas sucessivas, que partem da fenotipagem clínica para o sequenciamento de genes candidatos, são ineficientes e apresentam baixa taxa de sucesso diagnóstico, especialmente em casos esporádicos ou fenotipicamente atípicos1,2. Painéis gênicos direcionados oferecem uma alternativa mais econômica, mas estão limitados por listas pré-definidas de genes e podem não detectar variantes patogênicas raras ou novas. O sequenciamento completo do genoma oferece a cobertura genômica mais abrangente, mas é limitado pelo alto custo, tempo prolongado de análise e grande volume de variantes de significado incerto em ambientes clínicos rotineiros5. Para o presente estudo, empregamos um enfoque diagnóstico integrado que combina avaliação clínica sistemática, exame neurofisiológico, sequenciamento do exoma completo (WES) e análise de segregação familiar. Os testes neurofisiológicos ajudam a confirmar o envolvimento exclusivamente motor dos nervos periféricos e a delimitar a distribuição da lesão nervosa, reduzindo assim o diagnóstico diferencial. O WES permite a investigação simultânea de todos os genes conhecidos associados ao dHMN, a detecção de possíveis novas variantes patogênicas e a subsequente análise de segregação familiar, o que auxilia na filtragem de variantes incidentais benignas e fortalece as evidências sobre a patogenicidade das variantes candidatas, estabelecendo um equilíbrio pragmático entre taxa de sucesso diagnóstico, custo e interpretabilidade.

O gene da quinase relacionada à vaccínia 1 (VRK1) codifica uma quinase serina/treonina que participa nas vias de transdução de sinal nuclear e reparo de danos ao DNA, e sua função fisiológica é essencial para manter a homeostase e viabilidade neuronais6. Variantes patogênicas em VRK1 dão origem a um amplo espectro clínico: hipoplasia pontocerebelar tipo 1A de início na infância (PCH1A), caracterizada por microcefalia, hipotonia grave e atraso profundo no desenvolvimento motor; dHMN de início na idade adulta com envolvimento predominantemente distal dos membros; e apresentações mais raras, incluindo paraplegia espástica hereditária (HSP) e fenótipos semelhantes à esclerose lateral amiotrófica (ALS)7,8,9. Especificamente, a variante nonsense homozigótica c.1124G>A (p.Trp375Ter) em VRK1 foi descrita em múltiplos pedigrees independentes de dHMN com herança autossômica recessiva consistente, reforçando sua associação causal estabelecida com dHMN10. Essa variante introduz um códon de terminação prematuro na região codificadora da extremidade C-terminal de VRK1 e é predita para causar perda da função proteica, seja pela produção de uma proteína truncada ou pela ativação da degradação mediada por mRNA nonsense. Embora o mecanismo patológico preciso ainda não tenha sido validado funcionalmente para essa variante específica, hipotetiza-se que a atividade quinase VRK1 prejudicada possa interromper o reparo do DNA neuronal e as cascatas de sinalização intracelular, contribuindo assim para a degeneração dos neurônios motores e o desenvolvimento de dHMN.

Na prática clínica, o teste genético de VRK1 deve ser priorizado nos seguintes cenários: pacientes com suspeita clínica de dHMN apresentando fraqueza motora distal dependente do comprimento e atrofia com sensibilidade preservada, especialmente aqueles com histórico familiar autossômico recessivo ou início da doença na idade adulta; indivíduos de famílias consanguíneas que apresentam neuropatia motora distal inexplicada; pacientes com manifestações sobrepostas do sistema nervoso central e periférico não atribuíveis a outras doenças genéticas conhecidas; e casos de dHMN ou doença de Charcot-Marie-Tooth tipo 2 (CMT2) negativos para variantes patogênicas comuns em genes11,12. Devem-se reconhecer várias limitações importantes dessa abordagem diagnóstica. Primeiro, a dHMN relacionada a VRK1 apresenta sobreposição fenotípica substancial com outros distúrbios neuromusculares, incluindo atrofia muscular espinhal (AME), CMT2, HSP e esclerose lateral amiotrófica em estágio inicial, o que pode levar a classificação diagnóstica incorreta. Segundo, a interpretação de variantes raras em VRK1 permanece desafiadora, pois a maioria delas carece de validação funcional e depende fortemente de ferramentas computacionais de predição, resultando em classificações de patogenicidade incerta para um subconjunto de variantes. Terceiro, por se tratar de um estudo com uma única genealogia, a generalização dos nossos achados é limitada, e as correlações genótipo-fenótipo exigem confirmação adicional em coortes maiores de pacientes.

Atualmente, os relatos de dHMN associada ao VRK1 em populações chinesas ainda são escassos, e a heterogeneidade fenotípica completa e as características clínicas dessa condição ainda não foram totalmente delineadas. Neste estudo, relatamos uma família consanguínea chinesa com dHMN causada por uma variante homozigótica c.1124G>A no gene VRK1. Ao integrar achados clínicos, eletrofisiológicos e genéticos, caracterizamos as características fenotípicas e genotípicas dessa linhagem, fornecendo dados de referência para apoiar o diagnóstico clínico preciso e aconselhamento genético para a dHMN relacionada ao VRK1.

APRESENTAÇÃO DO CASO:

O probando (III₁) era um homem de 24 anos de Bijie, Província de Guizhou, nascido de pais primos em primeiro grau. O heredograma familiar de três gerações é mostrado na Figura 1 e é compatível com um padrão de herança autossômica recessiva. II₁ e II₂ (os pais do probando) eram ambos portadores heterozigotos da variante VRK1 c.1124G>A e eram assintomáticos. O probando (III₁) era homozigoto para a variante e apresentava sintomas clínicos. III₂ e III₄ (as irmãs mais velhas do probando) eram portadoras heterozigotas sem fenótipo clínico. III₃ (a terceira irmã mais velha do probando) foi adotada na infância e relatou fraqueza nas extremidades inferiores e atrofia muscular semelhantes, mas não houve confirmação genética disponível.

Manifestações clínicas

Queixa principal: Fraqueza e atrofia progressivas de ambos os membros inferiores há 2 anos.

Histórico da doença atual: Dois anos antes, o paciente desenvolveu fraqueza indolor nos membros inferiores distais sem fatores desencadeantes evidentes. Relatou quedas frequentes ao caminhar em terreno plano, mas era capaz de agachar-se e levantar-se sem ajuda. O paciente e sua família observaram adelgaçamento progressivo das pernas abaixo dos joelhos. Desde a infância, relatou baixa tolerância ao exercício, com dificuldade para correr e pular. Não havia alterações de sensibilidade, dor ou distúrbios térmicos nos membros, nem fraqueza evidente nos membros superiores ou sintomas bulbares. Sua inteligência era normal, e trabalhava de forma independente como cabeleireiro.

Exame neurológico

Força muscular (escala MRC): Flexão do quadril 5/5, extensão do joelho 4+/5, dorsiflexão do tornozelo 4/5, flexão plantar do tornozelo 3+/5 bilateralmente; músculos proximais dos membros superiores 5/5, extensão do punho 4+/5, flexão dos dedos 4/5, músculos intrínsecos da mão 4/5 bilateralmente.

Tônus muscular: Normal em todos os quatro membros; sem aumento ou diminuição do tônus.

Volume muscular: Observou-se atrofia evidente dos músculos distais dos membros inferiores (gastrocnêmio, tibial anterior e músculos intrínsecos do pé) (Figura 2A). Os membros superiores apresentavam-se esguios, com leve atrofia dos músculos intrínsecos das mãos (Figura 2B).

Fasciculações: Nenhuma fasciculação visível foi observada nos músculos dos membros ou do tronco.

Reflexos tendinosos: Os reflexos dos membros superiores estavam diminuídos; os reflexos tendinosos dos membros inferiores (reflexos patelar e aquileu) estavam ausentes bilateralmente.

Sinais patológicos: Os sinais bilaterais de Babinski e de Chaddock foram negativos.

Exame sensorial: A sensibilidade superficial (dor, tato, temperatura) e a sensibilidade profunda (vibração, posição) estavam preservadas em todos os membros.

Coordenação: O teste dedo-nariz e o teste calcanhar-joelho-tíbia foram normais bilateralmente.

Nervos cranianos: Pupilas iguais e reativas à luz; movimentos oculares completos; simetria facial; elevação normal do palato; movimentação normal da língua sem atrofia ou fasciculação; ausência de disfagia ou disartria.

Marcha: Marcha em escada bilateralmente.

Exames laboratoriais complementares: A creatina quinase sérica (CK), o nível de vitamina B₁₂ e os testes de função tireoidiana (TSH, FT3, FT4) estavam todos dentro dos valores de referência normais.

Neuroimagem: A ressonância magnética (RM) craniana e espinhal não foi realizada neste paciente.

Diagnóstico diferencial

PCH1A: Excluído. O paciente apresentava doença de início na idade adulta, sem microcefalia, hipotonia, displasia cerebelar ou atraso no desenvolvimento, o que era incompatível com o fenótipo clássico de PCH1A na infância.

SMA: Excluído. O paciente apresentava início na idade adulta com envolvimento puramente distal e força normal nos membros proximais, sem o padrão típico de fraqueza predominantemente proximal observado na SMA.

CMT2: Descartado pela neurofisiologia. O paciente apresentava envolvimento exclusivamente motor dos nervos, com potenciais de ação normais dos nervos sensitivos, e, portanto, não preenchia os critérios diagnósticos para CMT2.

ELA: Excluída. Não houve envolvimento de neurônios motores superiores, nem sintomas bulbares, nem fasciculações nos músculos inervados pelo cervical ou bulbo; o curso crônico progressivo com envolvimento puramente distal era atípico para ELA.

HSP: Excluído. O paciente não apresentava espasticidade, hiperreflexia nem sinais patológicos, com envolvimento exclusivo do neurônio motor inferior.

Doença de Kennedy (atrofia muscular espinal e bulbar, SBMA): Excluída. Não havia envolvimento bulbar, nem fasciculações periorais, nem manifestações endocrinológicas; o padrão de herança não era compatível com transmissão ligada ao cromossomo X.

Diagnóstico, Avaliação e Plano

Diagnóstico

1. dHMN, confirmado pela variante patogênica homozigota c.1124G>A (p.Trp375Ter) no gene VRK1 (herança autossômica recessiva).

2. Neuropatia periférica axonal puramente motora, envolvendo predominantemente os membros inferiores distais.

Avaliação

O paciente apresentou fraqueza motora distal progressiva lenta e atrofia muscular com sensibilidade preservada, compatível com o fenótipo clássico de início na idade adulta da dHMN relacionada ao VRK1.

Achados neurofisiológicos indicaram lesão axonal motora difusa com condução sensitiva normal, sustentando uma neuropatia motora pura.

A gravidade da doença era leve a moderada na apresentação atual: o paciente permanecia ambulatório e capaz de realizar suas atividades diárias de forma independente, sem envolvimento bulbar ou respiratório.

O heredograma mostrou herança autossômica recessiva, com portadores heterozigotos permanecendo assintomáticos.

Plano de manejo e acompanhamento

1. Tratamento sintomático: Prescrever órteses tornozelo-pé para melhorar a estabilidade da marcha e prevenir lesões por quedas; encaminhar à medicina da reabilitação para programas individualizados de treinamento de força e alongamento, com o objetivo de manter a amplitude de movimento articular e prevenir contraturas.

2. Acompanhamento regular: Agende avaliações neurológicas anuais, incluindo estudos repetidos de condução nervosa, para monitorar a progressão da doença.

3. Aconselhamento genético: Ofereça aconselhamento genético detalhado ao probando e aos membros da família sobre o risco de recorrência, opções de planejamento reprodutivo e testes genéticos presintomáticos para parentes em risco.

4. Educação do paciente: Recomende a evitação de medicamentos neurotóxicos e fadiga excessiva; ofereça apoio psicológico para lidar com a ansiedade relacionada à doença.

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Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Provincial de Medicina Tradicional Chinesa de Yunnan (número de aprovação: YYLW-2026-006). O consentimento informado por escrito foi obtido do proposito e de todos os membros da família participantes antes da inscrição.

1. Preparação do participante e avaliação clínica

  1. O probando e os membros da família disponíveis foram incluídos após a obtenção do consentimento informado por escrito.
  2. Informações detalhadas sobre dados demográficos, histórico da doença, histórico familiar e consanguinidade foram coletadas utilizando um questionário padronizado.
  3. Um exame neurológico sistemático foi realizado, incluindo avaliações da força muscular, tônus muscular, reflexos tendinosos, função sensorial, coordenação, marcha e função dos nervos cranianos.
  4. A força de todos os principais grupos musculares foi documentada utilizando a escala do Medical Research Council (MRC).
  5. Fotografias clínicas dos membros foram obtidas após o recebimento do consentimento escrito do participante.
    NOTA: Todas as avaliações clínicas foram realizadas por um neurologista certificado por conselho especializado em distúrbios neuromusculares, para garantir a consistência diagnóstica.

2. Exame neurofisiológico

  1. Preparação do paciente
    1. O participante foi orientado a evitar cafeína e exercícios intensos por pelo menos 2 h antes do exame.
    2. A temperatura da sala de exame foi mantida entre 24–26 ºC, e a temperatura da pele dos membros foi mantida acima de 32 ºC usando uma lâmpada de aquecimento, quando necessário.
    3. O participante foi posicionado em decúbito dorsal em uma sala de exame silenciosa e com pouca iluminação.
  2. Estudo da velocidade de condução nervosa
    1. A pele nos locais dos eletrodos foi limpa com cotonetes com álcool para reduzir a impedância.
    2. Eletrodos de registro de superfície foram posicionados sobre o ponto motor do músculo-alvo, e o eletrodo de referência foi colocado distalmente sobre o tendão correspondente.
    3. Os eletrodos de estimulação foram posicionados ao longo do trajeto do nervo em marcos anatômicos padrão.
    4. Estudos de condução nervosa motora foram realizados nos nervos mediano, ulnar, tibial e fibular comum bilaterais. Foram registradas a latência distal, a amplitude do potencial de ação muscular composto (CMAP) e a velocidade de condução motora.
    5. Estudos de condução nervosa sensitiva foram realizados nos nervos mediano, ulnar, fibular superficial e sural bilaterais, utilizando técnicas ortodrômicas ou antidrômicas, conforme apropriado. Foram registradas a amplitude do potencial de ação do nervo sensitivo (SNAP) e a velocidade de condução sensitiva.
    6. A faixa de filtro foi ajustada para 20 Hz–10 kHz nos estudos motores e 20 Hz–2 kHz nos estudos sensitivos. Velocidades de varredura de 2 ms/divisão e 1 ms/divisão foram utilizadas para os estudos motores e sensitivos, respectivamente.
  3. Eletroneuromiografia com agulha
    1. Um eletrodo de agulha concêntrico foi inserido em cada músculo-alvo em condições assépticas.
    2. A atividade espontânea em repouso foi avaliada, incluindo ondas agudas positivas, potenciais de fibrilação e potenciais de fasciculação.
    3. A morfologia do potencial de unidade motora (MUP) foi avaliada durante contração voluntária leve. Foram medidos duração, amplitude e politasia.
    4. O padrão de recrutamento foi avaliado durante contração voluntária máxima.
    5. Os músculos tibial anterior, gastrocnêmio medial, abdutor do hálux, interósseo dorsal do primeiro dedo, deltoide e reto femoral foram examinados bilateralmente. Os músculos esternocleidomastoideo e paravertebrais de T10 também foram examinados.
      NOTA: Todos os exames neurofisiológicos foram realizados por um eletromiografista experiente. A impedância da pele foi mantida abaixo de 5 kΩ para garantir a qualidade da gravação. A reprodutibilidade de todas as formas de onda foi confirmada em pelo menos duas estimulações consecutivas.

3. Coleta de amostra de sangue periférico e extração de DNA genômico

  1. Sangue venoso periférico (3–5 mL) foi coletado de cada participante em um tubo com anticoagulante etilenodiaminotetraacético (EDTA).
  2. As amostras de sangue foram armazenadas imediatamente a 4 ºC após a coleta e processadas em até 24 horas.
  3. O DNA genômico foi extraído de leucócitos do sangue periférico utilizando um kit de extração de DNA genômico.
  4. A concentração e pureza do DNA foram medidas usando um espectrofotômetro.
  5. A integridade do DNA foi avaliada por eletroforese em gel de agarose a 1%.
    NOTA: Foram aceitas amostras de DNA com razão A260/A280 entre 1,8 e 2,0 e concentração ≥50 ng/µL. Amostras que não atenderam aos critérios de controle de qualidade foram reextraídas.

4. Sequenciamento do exoma completo

  1. Preparação da biblioteca
    1. O DNA genômico (1 μg) foi fragmentado em fragmentos de 150–200 pb por sonicação.
    2. Reparo de extremidades, adição de cauda de adeninas (A-tailing) e ligação de adaptadores foram realizados conforme o protocolo do kit de preparação da biblioteca.
    3. As regiões exônicas foram enriquecidas utilizando um kit de captura de exoma inteiro humano, conforme o protocolo do fabricante.
    4. A biblioteca capturada foi amplificada por reação em cadeia da polimerase (PCR), e os produtos resultantes foram purificados.
  2. Sequenciamento
    1. O sequenciamento em pareamento foi realizado em uma plataforma de alto rendimento com comprimento de leitura de 150 pb.
    2. Buscou-se uma profundidade média de sequenciamento de ≥100 Χ em todo o exoma-alvo, com ≥98% das bases-alvo cobertas em profundidade ≥10Χ e ≥95% cobertas em profundidade ≥20Χ.
    3. NOTA: Antes do sequenciamento, foi confirmada uma concentração da biblioteca de ≥2 nM e uma distribuição de tamanho do inserto de 250–350 pb. Após o sequenciamento, os escores Q30, o conteúdo de GC e a profundidade de cobertura foram avaliados para confirmar a qualidade dos dados.

5. Análise bioinformática e filtragem de variantes

  1. Realizou-se a análise primária de dados, incluindo chamada de bases, avaliação da qualidade e remoção de adaptadores.
  2. As leituras limpas foram alinhadas ao genoma de referência humano GRCh37 (hg19) utilizando software de alinhamento de sequências.
  3. Realizou-se a chamada de variantes para identificar variantes de nucleotídeo único (SNVs) e pequenas inserções e deleções (índels).
  4. As variantes foram anotadas utilizando bancos de dados públicos, incluindo o Genome Aggregation Database (gnomAD), o Projeto 1000 Genomas, o ClinVar e o Online Mendelian Inheritance in Man (OMIM).
  5. As variantes foram filtradas e priorizadas utilizando os seguintes critérios.
    1. Foram mantidas variantes localizadas em regiões exônicas ou de sítios de splice canônicos.
    2. Foram excluídas variantes comuns com frequência do alelo minoritário (MAF) de >0,01 em bancos de dados populacionais.
    3. Foram priorizadas variantes nonsense, frameshift, de sítio de splice e missense previstas como deletérias.
    4. Os genes candidatos foram comparados com listas conhecidas de genes associados a distúrbios neuromusculares. Genes compatíveis com padrão de herança autossômica recessiva foram ainda mais priorizados.
    5. O transcrito VRK1 NM_003384.3 foi utilizado como sequência de referência para a nomenclatura das variantes.

6. Validação por sequenciamento Sanger e análise de segregação familiar

  1. Foram projetados primers de PCR que flanqueiam o local da variante candidata utilizando software de design de primers.
  2. A região genômica-alvo do DNA de cada membro da família foi amplificada por meio de PCR.
  3. Os produtos de PCR foram purificados e foi realizada sequenciamento Sanger bidirecional.
  4. Os cromatogramas de sequenciamento foram alinhados com a sequência de referência utilizando software de alinhamento de sequências.
  5. O genótipo de cada membro da família foi verificado e foi avaliada a segregação conjunta da variante com o fenótipo da doença na genealogia.
    NOTA: Foram confirmados cromatogramas limpos, com picos únicos e sem ruído de fundo. A amplificação por PCR e o sequenciamento foram repetidos para amostras que geraram resultados ambíguos.

7. Classificação da patogenicidade de variantes e confirmação diagnóstica

  1. A variante verificada foi classificada de acordo com os padrões e diretrizes de 2015 do Colégio Americano de Genética Médica e Genômica (ACMG).
  2. Os fenótipos clínicos, achados neurofisiológicos, resultados dos testes genéticos e dados de segregação familiar foram integrados para estabelecer o diagnóstico molecular final.
  3. Foi oferecida à família aconselhamento genético sobre risco de recorrência, opções reprodutivas e prognóstico a longo prazo.

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Resultados

Descobertas genéticas

O WES foi realizado no probando, com uma profundidade média da região alvo de 112 ×; 98,7% das bases-alvo foram cobertas com profundidade ≥10 × e 96,2% com profundidade ≥20 ×. Após filtragem e priorização das variantes, identificou-se uma variante nonsense homozigota c.1124G>A (p.Trp375Ter) no gene VRK1 (transcrito NM_003384.3, montagem do genoma GRCh37/hg19) como variante patogênica candidata.

O sequenciamento de S...

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Discussão

Neste estudo, aplicamos um fluxo de trabalho diagnóstico integrado que combina fenotipagem clínica, exame neurofisiológico, sequenciamento do exoma (WES) e análise de segregação familiar para identificar uma variante patogênica homozigótica VRK1 c.1124G>A em uma família chinesa consanguínea com dHMN de início na fase adulta. Esta linhagem amplia o espectro fenotípico das doenças relacionadas ao VRK1 e fornece dados de referência para o diagnóstico de dHMN na população chinesa.

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelo Projeto de Construção da Especialidade Nacional em Medicina Chinesa com Vantagem (Encefalopatia) de 2026 (Yuncaishe [2025] nº 219) e pelo Programa de Pesquisa Básica do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Yunnan (Auxílio nº 202401AZ070001-057).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Reagentes &e Consumíveis
Tubo a vácuo para coleta de sangue com anticoagulante EDTA (5 mL)BD Biosciences (Becton, Dickinson and Company)367861
Kit de Extração de DNA Genômico (formato com coluna de centrifugação) para sangue periféricoQIAGEN; Kit Mini QIAamp DNA Blood51106
Kit de Amplificação de Sonda Dependente de Ligações Múltiplas (MLPA)MRC HollandConjunto personalizado de sondas para o gene alvo
Kit de Amplificação por PCR (contendo polimerase Taq, dNTPs e tampão de reação)Takara Bio; Kit PCR LA TaqRR002A
Pó de agarose (grau eletroforese)Biowest111860
Kit de Reação de Sequenciamento Sanger (BigDye Terminator v3.1)Thermo Fisher Scientific; Applied Biosystems4337455
Kit de Purificação de Produto de SequenciamentoThermo Fisher Scientific; Kit de Purificação BigDye XTerminator4376484
tampão de eletroforese TAEGrau comercial / preparado em laboratório—
Tubos PCR em fita de 8, tubos de centrífuga e outros consumíveis de rotinaAxygen—
Instrumentos &e Equipamento
Analisador genético por eletroforese capilar (plataforma de sequenciamento Sanger)Applied Biosystems, Thermo Fisher Scientific3500 Dx
Ciclador térmico com gradiente (instrumento de PCR)Bio-Rad LaboratoriesC1000 Touch
Espectrofotômetro ultramicro (para quantificação de ácidos nucleicos)NanoDrop One, Thermo Fisher ScientificND-ONE-W
Sistema de eletroforese em gel de agarose horizontalBeijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.DYY-6C
Sistema de documentação e análise de géisBio-Rad LaboratoriesGelDoc Go
Centrífuga refrigerada de alta velocidade para bancadaEppendorf5424 R
Sistema de velocidade de condução nervosa / eletromiografia (VCN/EMG)Natus MedicalKeypoint 9033A07
Banho metálico / banho de água com temperatura constanteDLAB Scientific—
Software de Análise
software de análise de dados de MLPA (Coffalyser.Net)MRC Hollandv140
Análise de picos de sequenciamento Sanger e software de alinhamento de sequênciasApplied Biosystems, Thermo Fisher ScientificAnálise de Sequenciamento v6.0
Software de design de iniciadoresPremier BiosoftPrimer Premier 6
Ferramentas de alinhamento de sequências e interpretação de variantesNCBI BLAST (online), banco de dados ClinVar—

Referências

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