É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de investigação

Estudo de Coorte Retrospectivo dos Níveis de miR-486-3p no Sangue Periférico em Pacientes com Infarto Cerebral Agudo e Síndrome da Apneia Obstrutiva do Sono

42 visualizações

⸱

DOI:

10.3791/72643

⸱

28 de agosto de 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, 2The Second Clinical Medical College, Xuzhou Medical University

Neste artigo

Resumo

O miR‑486‑3p está subregulado em pacientes com infarto cerebral agudo e síndrome da apneia obstrutiva do sono, correlaciona-se negativamente com a gravidade da doença e marcadores inflamatórios e prediz um prognóstico ruim em 1 ano, sustentando seu potencial como biomarcador diagnóstico e prognóstico.

Resumo

O infarto cerebral agudo (ICA) complicado com síndrome da apneia obstrutiva do sono (SAOS) confere alto risco de recorrência de acidente vascular cerebral e morte, embora biomarcadores eficazes para essa condição comórbida ainda sejam limitados. Este estudo de coorte retrospectiva incluiu 270 pacientes com ICA entre novembro de 2020 e dezembro de 2023, classificados no grupo ICA (n = 100, índice de apneia-hipopneia [IAH] < 5) e no grupo ICA com SAOS (n = 170, IAH ≥ 5), sendo este último subdividido em subgrupos leve (5 ≤ IAH < 15, n = 60), moderado (15 ≤ IAH < 30, n = 75) e grave (IAH ≥ 30, n = 35). A expressão sérica de miR-486-3p foi medida por RT-qPCR, e marcadores inflamatórios, incluindo fator de necrose tumoral-α (TNF-α), proteína C-reativa (PCR) e fator induzível por hipóxia-1α (HIF-1α), foram quantificados por ELISA. O valor diagnóstico do miR-486-3p foi avaliado por meio de análise da curva ROC (receiver operating characteristic), e sua significância prognóstica foi determinada por análise de sobrevida de Kaplan-Meier e modelos de regressão de Cox. O miR-486-3p foi significativamente menor no grupo comórbido e demonstrou alta capacidade diagnóstica (AUC = 0,927). Notavelmente, observou-se uma tendência clara dependente da dose nos subgrupos de gravidade da SAOS, com redução progressiva do miR-486-3p e aumento progressivo de TNF-α e PCR do estágio leve ao grave da SAOS. Análises de correlação de Spearman revelaram que o miR-486-3p apresentou correlação negativa com IAH, escore NIHSS, TNF-α e PCR. No acompanhamento de 1 ano, pacientes com baixa expressão de miR-486-3p apresentaram desfechos funcionais significativamente piores em comparação com aqueles com alta expressão. A regressão multivariada de Cox confirmou o miR-486-3p como fator protetor independente para o prognóstico em 1 ano. Esses achados sugerem que o miR-486-3p pode atuar como um novo biomarcador diagnóstico e prognóstico em pacientes com ICA e SAOS, possivelmente por meio de seu papel regulador na inflamação sistêmica, e justificam sua validação adicional em coortes prospectivas maiores.

Introdução

A síndrome da apneia obstrutiva do sono (SAOS) é uma condição comum caracterizada por interrupções repetidas na respiração durante o sono1. O SAOS está frequentemente associado a comorbidades como distúrbios metabólicos, cardiovasculares, renais, pulmonares e neuropsiquiátricos2. Além de suas associações gerais com doenças cardiovasculares e metabólicas, o SAOS representa uma ameaça específica e grave no acidente vascular cerebral isquêmico agudo, complicando até 70% dos casos e aumentando os riscos de declínio neurológico, mortalidade e recorrência de acidente vascular cerebral3,4,5. O infarto cerebral agudo (ICA) constitui a forma mais prevalente de acidente vascular cerebral. Embora tenham sido feitos progressos significativos no tratamento do ICA nos últimos anos, a maioria dos pacientes ainda sofre de incapacidade grave ou mesmo morte6. A interação sinérgica entre ICA combinado com SAOS agrava os danos isquêmicos e a inflamação sistêmica, elevando substancialmente os riscos de recorrência de acidente vascular cerebral, incapacidade e mortalidade. Consequentemente, identificar biomarcadores confiáveis para o diagnóstico precoce e o manejo dessa condição comórbida de alto risco é de importância fundamental.

Os microRNAs (miRNAs) têm demonstrado grande potencial como biomarcadores nos últimos anos. Dentre eles, o miR-486-3p possui grande importância nas doenças neurovasculares. Pesquisas anteriores mostraram que a expressão do miR-486-3p é inibida na apneia obstrutiva do sono (OSA)7. Além disso, o tratamento com exossomos do tipo glicoproteína do vírus da raiva-miR-486-3p pode aliviar distúrbios neurocomportamentais, edema cerebral, danos à barreira hematoencefálica e neurodegeneração8, indicando que o miR-486-3p desempenha um papel na lesão cerebral. Após o ACI, as microglías no tecido cerebral lesionado são ativadas, promovendo a secreção de citocinas inflamatórias5. A SAOS provoca sintomas de hipóxia intermitente, levando à ativação do sistema nervoso simpático e ao estresse oxidativo, desencadeando assim uma reação inflamatória sistêmica em cascata9. O miR-486-3p está fortemente relacionado à inflamação10. Essas evidências sugerem que o miR-486-3p pode atuar como uma ligação molecular entre a hipóxia relacionada à SAOS, a inflamação sistêmica e a recuperação pós-AVC.

No entanto, seu perfil de expressão, precisão diagnóstica e significado prognóstico em pacientes com ACI combinado com SAOS não foram sistematicamente investigados, e permanece desconhecido se ela se correlaciona com a gravidade do SAOS ou com mediadores inflamatórios de maneira dose-dependente. Para preencher essas lacunas, este estudo avaliou o valor diagnóstico do miR-486-3p para SAOS em pacientes com ACI, examinou sua relação dose-dependente com a gravidade do SAOS e marcadores inflamatórios (TNF-α, PCR e HIF-1α) e avaliou sua utilidade prognóstica para desfechos funcionais em um ano. Até onde sabemos, este é o primeiro estudo abrangente a demonstrar que o miR-486-3p pode atuar como um novo biomarcador diagnóstico e prognóstico para a comorbidade ACI-SAOS, potencialmente por meio da regulação da inflamação sistêmica.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Afiliado da Universidade Médica de Xuzhou (número de aprovação: XYFY2024-KL238-01) e foi isento do requisito de obter consentimento informado adicional dos pacientes. Os reagentes e o equipamento utilizados estão listados na Tabela de Materiais.

Pacientes e espécimes
Este estudo foi um estudo de coorte retrospectivo. De novembro de 2020 a dezembro de 2023, um total de 270 pacientes submetidos à IAC no Hospital Afiliado da Universidade Médica de Xuzhou foram recrutados consecutivamente. O processo de seleção dos pacientes é resumido na Figura Suplementar 1. Pacientes elegíveis foram identificados por meio da triagem diária de todas as novas admissões na unidade de acidente vascular cerebral. O início dos sintomas nas 72 horas anteriores à admissão foi verificado mediante revisão dos registros médicos de emergência e confirmado por um neurologista certificado por meio do histórico do paciente e entrevista com a família. O tamanho da amostra foi calculado com base na capacidade de detectar uma diferença significativa nos níveis de miR-486-3p entre os grupos. Assumindo um tamanho de efeito de 0,5, um α bilateral de 0,05 e um poder (1-β) de 0,80, foi necessário um mínimo de 64 pacientes por grupo. Os tamanhos finais dos grupos refletem o recrutamento real e a maior prevalência de SAOS na população com acidente vascular cerebral, e não uma alocação predeterminada. Pacientes com IAC combinada com SAOS foram acompanhados quanto ao seu prognóstico por 1 ano.

Os critérios de inclusão foram: (1) Acidente vascular cerebral isquêmico agudo com início dos sintomas nas últimas 72 h antes da admissão, confirmado por ressonância magnética. (2) Capacidade de compreender e preencher os questionários do estudo e avaliações neurológicas. (3) A gravidade do AVC foi avaliada pela Escala de Acidente Vascular Cerebral do National Institutes of Health (NIHSS) na admissão. Quando o escore NIHSS é <5, é classificado como AVC leve; quando o escore NIHSS está entre 5 e 20, é considerado AVC moderado. Os principais critérios de exclusão incluíram histórico de tumores malignos, deficiência física grave pré-existente ou transtornos psiquiátricos, insuficiência cardíaca, pulmonar ou renal grave, cirurgia importante ou trauma nos últimos 3 meses, infecções ativas ou doenças autoimunes; acidente vascular cerebral prévio nos últimos 6 meses; terapia imunossupressora; e diagnóstico ou tratamento prévio de SAOS (incluindo terapia com pressão positiva contínua nas vias aéreas).

Para confirmação por RNM, todos os pacientes realizaram RNM cerebral padrão em um sistema de 3,0 T, incluindo as seguintes sequências: ponderada em T1, ponderada em T2, recuperação de inversão com supressão de líquido (FLAIR), imagem de difusão (DWI) e mapeamento do coeficiente de difusão aparente (ADC). A infarto agudo foi definido pela presença de sinal hiperalintenso na DWI com sinal hipointenso correspondente no ADC. Todas as RNM foram interpretadas por dois neurorradiologistas experientes, cegos em relação aos dados clínicos, com as discrepâncias resolvidas por consenso. A pontuação na escala NIHSS foi realizada na admissão por neurologistas certificados, antes de qualquer tratamento trombolítico ou endovascular.

O sangue venoso em jejum foi coletado entre 24 h e 48 h após o início do acidente vascular cerebral, após um jejum noturno de pelo menos 8 h. As coletas de sangue foram realizadas entre 6:00 e 8:00 para minimizar variações circadianas. Um total de 5 mL de sangue venoso periférico foi coletado em tubos a vácuo revestidos com EDTA. Dentro de 2 h após a coleta, as amostras de sangue foram centrifugadas a 1.500 × g por 15 min a 4 °C, utilizando uma centrífuga refrigerada. O sobrenadante sérico foi cuidadosamente alíquotado em tubos microcentrífugos livres de RNase de 1,5 mL e armazenado imediatamente a −80 °C até a extração de RNA. Ciclos repetidos de congelamento-descongelamento foram estritamente evitados; todas as alíquotas foram submetidas a no máximo um ciclo de congelamento-descongelamento antes da análise.

Agrupamento dos pacientes
Os participantes foram agrupados com base em seus escores de IAH obtidos pela polissonografia. Todos os registros foram realizados no laboratório de sono do hospital entre 22h e 6h, com duração mínima de 7 h. Os canais fisiológicos monitorados incluíram: eletroencefalografia (EEG; seis canais), eletrooculografia (EOG; dois canais), eletromiografia (EMG; região submentoneana e tibiais anteriores bilaterais), eletrocardiografia (ECG; derivação única), fluxo aéreo nasal (termistor e transdutor de pressão), esforço respiratório torácico e abdominal (plestimografia por indução respiratória) e oximetria de pulso (SpO2). O técnico de estudo do sono calculou o IAH. A pontuação dos estágios do sono e dos eventos respiratórios foi realizada manualmente por um técnico de sono certificado, de acordo com o manual de pontuação da American Academy of Sleep Medicine (AASM) de 2012, utilizando o software Somnolyzer 24×7. De acordo com os critérios diagnósticos amplamente aceitos da American Academy of Sleep Medicine, um IAH igual ou superior a 5 eventos por hora é o limiar padrão para o diagnóstico de SAOS. Assim, os participantes com IAH < 5 foram classificados como grupo ACI (n = 100), enquanto aqueles com IAH ≥ 5 foram classificados como grupo ACI combinado com SAOS (n = 170). Entre os indivíduos com IAH ≥ 5 (grupo ACI combinado com SAOS, n = 170), os pacientes foram ainda estratificados em três subgrupos de gravidade com base em critérios estabelecidos: SAOS leve (5 ≤ IAH < 15, n = 60), SAOS moderado (15 ≤ IAH < 30, n = 75) e SAOS grave (IAH ≥ 30, n = 35). Essa estratificação permitiu a avaliação da relação dose-dependente entre a carga hipóxica, a expressão de miR‑486‑3p e os marcadores inflamatórios. Pacientes com tratamento prévio de SAOS (por exemplo, CPAP) não foram incluídos no estudo, a fim de evitar interferência na medição basal do IAH.

Avaliação do prognóstico
O ponto temporal de 1 ano permite que os efeitos agudos se resolvam e que a carga hipóxica cumulativa da SAOS se manifeste, fornecendo uma janela robusta para avaliar seu impacto prognóstico. O prognóstico clínico de pacientes com AVE isquêmico combinado com SAOS foi avaliado pela Escala de Rankin Modificada (mRS) após o início da doença. Todas as avaliações pela mRS foram realizadas por neurologistas certificados que passaram por treinamento padronizado antes do estudo, utilizando o formulário estruturado de entrevista mRS. A confiabilidade entre avaliadores foi avaliada com um coeficiente kappa >0,85. A avaliação de acompanhamento foi realizada por meio de uma consulta agendada em ambulatório. Para pacientes incapazes de comparecer pessoalmente, foi realizada uma entrevista telefônica estruturada por uma enfermeira pesquisadora treinada, utilizando um roteiro padronizado. Todos os avaliadores estavam cegos quanto aos níveis de miR-486-3p e ao estado de SAOS dos pacientes. Para manter a consistência entre as avaliações ambulatoriais e por telefone, ambos os formatos utilizaram o mesmo questionário estruturado, e todos os avaliadores realizaram um exercício de calibração pré-estudo. Pacientes com escores de 0–2 foram incluídos no grupo de bom prognóstico, e aqueles com escores de 3–6 foram incluídos no grupo de mau prognóstico. Nenhum paciente foi perdido durante o acompanhamento. O SAQLI, ESS, TNF-α e HIF-1α foram avaliados como variáveis prognósticas, em vez de serem utilizados para definir os grupos prognósticos. O NIHSS, SAQLI e ESS foram aplicados por equipe de pesquisa treinada. O SAQLI e o ESS foram aplicados como questionários administrados por entrevistador em uma sala silenciosa.

Índice de pontuação
A NIHSS é uma escala quantitativa para acidente vascular cerebral11, em que pontuações mais altas indicam maior gravidade do AVC. A SAQLI é um questionário sobre qualidade de vida para SAOS numa escala de 1 a 7, em que pontuações mais altas indicam pior qualidade de vida, abrangendo atividades diárias, interações sociais, estados emocionais, sintomas e sintomas relacionados ao tratamento12. A ESS é utilizada para avaliar a sonolência diurna auto-relatada pelos pacientes, com uma pontuação variando de 0 a 24, e uma pontuação > 10 indica sonolência diurna13.

Extração de RNA e transcrição reversa
O RNA total foi extraído de 200 µL de soro utilizando o reagente TRIzol. Resumidamente, as amostras de soro foram misturadas com 800 µL de TRIzol, incubadas à temperatura ambiente por 5 min e centrifugadas a 12.000 × g durante 15 min a 4 °C. Adicionou-se clorofórmio (200 µL), a mistura foi agitada vigorosamente por 15 s, incubada por 3 min e centrifugada a 12.000 × g durante 15 min a 4 °C. A fase aquosa foi transferida para um tubo novo e o RNA foi precipitado com 500 µL de isopropanol, incubado a −20 °C por 1 h e centrifugado a 12.000 × g durante 10 min a 4 °C. O pellet de RNA foi lavado com etanol 75%, seco ao ar e dissolvido em 20 µL de água livre de RNase. A concentração e pureza do RNA foram avaliadas utilizando um espectrofotômetro de microvolume, sendo aceito para análises subsequentes uma razão A260/A280 entre 1,8 e 2,0. A integridade do RNA foi verificada por eletroforese em gel de agarose.

A transcrição reversa foi realizada utilizando 500 ng de RNA total com o Kit de Transcrição Reversa em um volume de reação total de 20 µL, usando primers hexaméricos aleatórios de acordo com o protocolo do fabricante. A reação de transcrição reversa foi realizada a 25 °C por 10 min, 42 °C por 60 min e 70 °C por 5 min. O cDNA resultante foi armazenado a −20 °C até o uso.

RT-qPCR
A expressão de miR-486-3p foi detectada utilizando um kit de PCR em tempo real baseado em SYBR Green para quantificação de microRNAs em um sistema de PCR quantitativo em tempo real (qPCR). A mistura de reação continha 10 µL de Master Mix SYBR Green 2×, 2 µL de molde de cDNA (diluído 1:5), 1 µL de cada par de primers (10 µM) e água livre de nucleases até um volume final de 20 µL. As sequências dos primers são as seguintes (de 5'-3'): miR-486-3p-sentido: TCGGCAGCGGGGCAGCUCAGU, antissentido: CTCAACTGGTGTCGTGGA; e U6-sentido: CTCGCTTCGGCAGCACA, antissentido: AACGCTTCACGAATTTGCGT. As condições de ciclagem da qPCR foram: 95 °C por 2 min, seguido por 40 ciclos de 95 °C por 30 s, 60 °C por 30 s e 72 °C por 60 s. Cada amostra foi analisada em triplicata, e um controle sem molde foi incluído em cada corrida. A especificidade da amplificação foi confirmada por análise da curva de dissociação de 60 °C a 95 °C. O limiar de ciclo (Ct) foi determinado automaticamente pelo software QuantStudio 6 Pro (v1.5) utilizando a configuração de limiar padrão. O nível de miR-486-3p foi calculado pelo método 2-ΔΔCT e normalizado em relação ao U6. O gene U6 foi validado como gene de referência estável em nossas amostras de soro utilizando o algoritmo NormFinder para garantir consistência entre os grupos. Os coeficientes de variação entre ensaios e dentro de ensaios foram <5%.

ELISA
As concentrações séricas de proteína C-reativa (PCR), TNF-α e HIF-1α foram detectadas utilizando o kit de ELISA. Os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, as amostras de soro foram descongeladas em gelo e diluídas 1:2 com o tampão de diluição fornecido. Amostras e padrões foram adicionados a placas de 96 poços pré-revestidas (100 µL/poço) e incubados por 2 h a 37 °C. Após quatro lavagens com 300 µL de tampão de lavagem, adicionou-se 100 µL de anticorpo de detecção conjugado com biotina e incubou-se por 1 h a 37 °C. Após nova etapa de lavagem, adicionou-se 100 µL de estreptavidina conjugada com peroxidase do rabo-de-cavalo e incubou-se por 30 min a 37 °C no escuro. O substrato cromogênico (tetrametilbenzidina, 100 µL) foi adicionado e incubado por 15 min a 37 °C, protegido da luz. A reação foi interrompida com 50 µL de solução de parada, e a absorbância foi medida a 450 nm utilizando um leitor de microplacas. As concentrações foram calculadas a partir de curvas-padrão geradas com concentrações conhecidas de proteínas recombinantes. Cada amostra foi medida em duplicata, e o valor médio foi utilizado para análise. Amostras de controle de qualidade fornecidas pelo fabricante foram incluídas em cada placa; os resultados foram aceitos somente quando os valores de controle de qualidade estavam dentro da faixa especificada pelo fabricante.

Controle de qualidade e reprodutibilidade
Todos os ensaios laboratoriais foram realizados conforme as diretrizes MIQE (Informações Mínimas para Publicação de Experimentos de PCR em Tempo Real Quantitativa) para RT-qPCR e as normas apropriadas de relato para ELISA. Os principais instrumentos foram calibrados de acordo com as programações dos fabricantes. Amostras controle negativo e positivo foram incluídas em cada lote de ensaios de RT-qPCR e ELISA para monitorar a variabilidade entre placas. Todos os dados foram registrados e gerenciados usando o Microsoft Excel, e o autor correspondente fornecerá protocolos experimentais detalhados e dados brutos mediante solicitação razoável.

Análise estatística
Os dados foram analisados utilizando o SPSS 23.0 e um software estatístico e de geração de gráficos. A distribuição normal foi avaliada pelo teste de Shapiro–Wilk. As variáveis contínuas são apresentadas como média ± DP ou mediana (IIQ) e foram comparadas pelo teste t ou teste U de Mann–Whitney, conforme apropriado. As variáveis categóricas foram comparadas pelo teste χ2. As correlações foram examinadas por meio de análises de Pearson ou Spearman, com base na distribuição dos dados. O valor preditivo foi determinado utilizando a curva ROC e verificado com validação cruzada de 5 dobras. O valor de corte ótimo para o miR-486-3p foi determinado maximizando o índice de Youden. Foram utilizadas análises de correlação de Pearson e Spearman para avaliar as correlações. Para a análise prognóstica, os pacientes foram estratificados pela expressão mediana de miR‑486‑3p; curvas de Kaplan–Meier com o teste log-rank foram utilizadas para comparar os desfechos de sobrevida entre os grupos. As variáveis com P < 0,1 na regressão de Cox univariada foram incluídas no modelo multivariado de Cox. Considerou-se estatisticamente significativo P < 0,05.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

Características basais nos grupos ACI e ACI combinado com SAOS
Conforme mostrado na Tabela 1, o grupo ACI era composto por 68 homens e 32 mulheres, com idade média de 62,84 ± 12,65 anos, e o grupo ACI combinado com SAOS incluía 116 homens e 54 mulheres, com idade média de 61,31 ± 11,25 anos. O grupo ACI combinado com SAOS apresentou valores significativamente mais elevados de IAH, escores NIHSS e níveis de PCR. No entanto, os dois grupos apresentaram distribuições comparáveis de idad...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

Pacientes com SAOS apresentam colapsos e obstruções repetidos das vias aéreas, levando à hipóxia intermitente (HI) e sonolência diurna excessiva (SDE), o que pode causar dano neuronal14A SAO é altamente prevalente após AVC, afetando aproximadamente 72% dos pacientes, e agravada significativamente o risco cardiovascular.15A ACI constitui um espectro de déficits neurológicos decorrentes da isquemia cerebral localizada e hipóxia secundária à perfusão inadequada‌

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Este estudo foi financiado por ‘Pesquisa sobre Tecnologias de Prevenção e Tratamento de Acidente Vascular Cerebral’ (nº WKZX2023CZ0143).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Scanner de RM 3,0 TSiemens Healthineers, AlemanhaMAGNETOM SkyraImagem cerebral para confirmação de infarto cerebral agudo
Placas microplacas de ELISA de 96 poçosShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., ChinaXBS-PLATEReação antígeno-anticorpo para detecção por ELISA
Diretrizes Clínicas da AASM para Distúrbios Respiratórios do SonoAcademia Americana de Medicina do Sonodiretriz completa de 2020Critérios padronizados de diagnóstico de AHI e estratificação da gravidade de SAOS
Índice de Qualidade de Vida da Apneia do Sono de Calgary (SAQLI) versão chinesa validadaUniversidade de Calgaryedição traduzida de 2021Avaliação da qualidade de vida em pacientes com ACI complicada por SAOS
Tubos de coleta de sangue a vácuo com EDTA-K2 5 mLBD Biosciences, EUA367863Coleta de sangue venoso periférico para separação de soro
Escala de Sonolência de Epworth (ESS) versão chinesa validadaUniversidade Johns Hopkinsedição revisada de 2018Avaliação da sonolência diurna em pacientes com acidente vascular cerebral
GraphPad Prism 9GraphPad Software, EUAVersão 9.4.1Gráficos de dispersão, gráficos de caixa, visualização da curva ROC
Kit ELISA para PCR humanaShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, ChinaXBS-H001Detecção quantitativa de proteína C-reativa sérica
HIF-1 humanoα Kit ELISAShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, ChinaXBS-H007Detecção quantitativa do fator induzível por hipóxia-1 séricoα
TNF humanoα Kit ELISAShenzhen Xinbosheng Biological Co., Ltd., Shenzhen, ChinaXBS-H003Detecção quantitativa de TNF séricoα fator inflamatório
IBM SPSS Statistics 23.0IBM, Armonk, NY, EUAVersão 23.0Todas as análises estatísticas (teste t, correlação, ROC, Kaplan–Meier, regressão de Cox
Espectrofotômetro de Placa de MicrotitulaçãoThermo Fisher Scientific (Waltham, MA, EUA)Multiskan FCLeitura da absorbância em placas de ELISA a 450 nm
miR-486-3p & Primeres de qPCR para U6Sangon Biotech, Xangai, ChinaSíntese personalizadaAmplificação de genes alvo e de referência para qPCR
miScript SYBR Green PCR KitQiagen GmbH, Hilden, Alemanha218073Amplificação por PCR quantitativa em tempo real de miR-486-3p e U6
Escala de Acidente Vascular Cerebral do NIH (NIHSS) - Versão Chinesa ValidadaInstituto Nacional de Transtornos Neurológicos e Derrames (NINDS), EUAEdição clínica padrãoAvaliação de gravidade neurológica basal para pacientes com AVC isquêmico
Software de Classificação do Sono PSGBMC Medical Co., Ltd., Chinav3.2Pontuação automatizada preliminar de eventos respiratórios durante o sono
Sistema de PCR em Tempo Real QuantStudio 6 ProApplied Biosystems, Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, EUA)QuantStudio 6 ProAmplificação por RT-qPCR, aquisição da curva de dissociação, registro dos valores de Ct
Software QuantStudio de PCR em Tempo RealApplied Biosystems, EUAv1.7Exportação de dados brutos de qPCR, análise dos valores de Ct
Centrífuga de Bancada RefrigeradaXiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., Hunan, ChinaTDZ5-WSSeparação de soro a partir de sangue total (2700 × g 4 °C)
RevertAid RT Reverse Transcription KitThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUAK1691Transcrição reversa de miARN sérico em cDNA
Tubos microcentrífugos de 1,5 mL livres de RNaseAxygen, EUAMCT-150-CAliquotagem e armazenamento do soro separado
Reagente TRIzol para Isolamento de RNAInvitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA15596026Extração de RNA total de amostras de soro humano
Congelador de Temperatura Ultra-baixaHaier Biomedical, Shandong, ChinaDW-86L388Armazenamento prolongado de amostras de soro a −80 °C
Monitor de Polissonografia YH-600BBMC Medical Co., Ltd., Pequim, ChinaYH-600BMonitoramento do sono durante a noite e cálculo do IAH para o diagnóstico de SAOS

Referências

  1. Lv R, et al. Pathophysiological mechanisms and therapeutic approaches in obstructive sleep apnea syndrome. Signal Transduct Target Ther. 2023;8(1):218.
  2. Gleeson M, McNicholas WT. Bidirectional relationships of comorbidity with obstructive sleep apnoea. Eur Respir Rev. 2022;31(164):210256.
  3. Seiler A, et al. Prevalence of sleep-disordered breathing after stroke and TIA: a meta-analysis. Neurology. 2019;92(7):e648-e654.
  4. Zhou Y, et al. Correlation between obstructive sleep apnea and hypoperfusion in patients with acute cerebral infarction. Front Neurol. 2024;15:1363053.
  5. Du W, Fan L, Du J. Neuroinflammation-associated miR-106a-5p serves as a biomarker for the diagnosis and prognosis of acute cerebral infarction. BMC Neurol. 2023;23(1):248.
  6. Tang Y, et al. Analysis of carotid vulnerable plaque MRI high-risk features and clinical risk factors associated with concomitant acute cerebral infarction. BMC Cardiovasc Disord. 2023;23(1):173.
  7. Santamaria-Martos F, et al. Circulating microRNA profile as a potential biomarker for obstructive sleep apnea diagnosis. Sci Rep. 2019;9(1):13456.
  8. Sheng B, et al. Exosome-mediated delivery of miR-486-3p alleviates neuroinflammation via. SIRT2-mediated inhibition of mitophagy after subarachnoid hemorrhage. Stroke Vasc Neurol. 2025;10(3):335-346.
  9. May AM, Mehra R. Obstructive sleep apnea: role of intermittent hypoxia and inflammation. Semin Respir Crit Care Med. 2014;35(5):531-544.
  10. Verjans R, et al. Functional screening identifies microRNAs as multicellular regulators of heart failure. Sci Rep. 2019;9(1):6055.
  11. Kwah LK, Diong J. National Institutes of Health Stroke Scale (NIHSS). J Physiother. 2014;60(1):61.
  12. Tanellari O, et al. Study on quality of life of patients with obstructive sleep apnea: pilot study. Medicina (Kaunas). 2025;61(7):1234.
  13. Hajikarim-Hamedani A, Rassa S, Tarjoman T, Shafiei M. Assessment of sleep patterns in migraine sufferers using the Epworth Sleepiness Scale. J Headache Pain. 2025;26(1):58.
  14. Liu X, et al. The relationship between inflammation and neurocognitive dysfunction in obstructive sleep apnea syndrome. J Neuroinflammation. 2020;17(1):229.
  15. Dharmakulaseelan L, Boulos MI. Sleep apnea and stroke: a narrative review. Chest. 2024;166(4):857-866.
  16. Song XD, Li SX, Zhu M. Plasma miR-409-3p promotes acute cerebral infarction via. suppressing CTRP3. Kaohsiung J Med Sci. 2021;37(4):324-333.
  17. Wu Z, et al. Integrated analysis of competitive endogenous RNA networks in acute ischemic stroke. Front Genet. 2022;13:833545.
  18. Li K, Wei P, Qin Y, Wei Y. MicroRNA expression profiling and bioinformatics analysis of dysregulated microRNAs in obstructive sleep apnea patients. Medicine (Baltimore). 2017;96(34):e7917.
  19. Sriram S, Mehkri Y, Quintin S, Lucke-Wold B. Shared pathophysiology: understanding stroke and Alzheimer's disease. Clin Neurol Neurosurg. 2022;218:107306.
  20. Small C, Mehkri Y, Panther E, Felisma P, Lucke-Wold B. Coronavirus disease 2019 and stroke: pathophysiology and management. Can J Neurol Sci. 2023;50(4):495-502.
  21. Tamin S, et al. Association between laryngopharyngeal reflux and obstructive sleep apnea in adults. PeerJ. 2022;10:e13303.
  22. Fabbri M, et al. Measuring subjective sleep quality: a review. Int J Environ Res Public Health. 2021;18(3):1082.
  23. Song R, Baker TL, Watters JJ, Kumar S. Obstructive sleep apnea-associated intermittent hypoxia-induced immune responses in males, pregnancies, and offspring. Int J Mol Sci. 2024;25(3):1852.
  24. Liu X, et al. Effects of Kudiezi injection on serum inflammatory biomarkers in patients with acute cerebral infarction. Dis Markers. 2018;2018:7936736.
  25. Liang Z, et al. Effects of remote ischemic postconditioning on the proinflammatory neutrophils of peripheral blood in acute cerebral infarction. Aging (Albany NY). 2023;15(10):4481-4497.
  26. Imani MM, et al. Serum and plasma tumor necrosis factor alpha levels in individuals with obstructive sleep apnea syndrome: a meta-analysis and meta-regression. Life (Basel). 2020;10(6):87.
  27. Bian F, Kang S, Cui H, Wang F, Luan T. The clinical efficacy of compound Danshen injection on acute cerebral infarction and on the changes in the CRP, D-dimer, and IL-6 levels. Am J Transl Res. 2021;13(7):8126-8133.
  28. Tie YX, Fu YY, Xu Z, Peng Y. Relationship between C-reactive protein levels and obstructive sleep apnea syndrome. Genet Mol Res. 2016;15(2): DOI:10.4238/gmr.15027808.
  29. Dutt N, Janmeja AK, Mohapatra PR, Singh AK. Quality of life impairment in patients of obstructive sleep apnea and its relation with the severity of disease. Lung India. 2013;30(4):289-294.
  30. Feng X, et al. Test-retest reliability of Epworth Sleepiness Scale score in patients with untreated obstructive sleep apnea. Nat Sci Sleep. 2024;16:2299-2309.
  31. Lapin BR, Bena JF, Walia HK, Moul DE. The Epworth Sleepiness Scale: validation of one-dimensional factor structure in a large clinical sample. J Clin Sleep Med. 2018;14(8):1293-1301.
  32. Zolotoff C, et al. Obstructive sleep apnea, hypercoagulability, and the blood-brain barrier. J Clin Med. 2021;10(14):3099.
  33. Meliante PG, et al. Molecular pathology, oxidative stress, and biomarkers in obstructive sleep apnea. Int J Mol Sci. 2023;24(6):5478.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Explorar mais artigos

Marcadores InflamatóriosRT-qPCREnsaio ELISABiomarcador PrognósticoRecorrência de AVCInflamação Sistêmica
Fale conosco
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de Uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.