Este protocolo compara os lasers de diodo, túlio e érbio para desinfecção intracanal em um modelo de canal radicular Enterococcus faecalis ex vivo, avaliando a eficácia antibacteriana e a temperatura da superfície radicular externa, a fim de identificar parâmetros de irradiação seguros e eficazes.
Artigo de investigação
Túlio, Érbio e Lasers de Diodo para Descontaminação Intracanal: Anti-Enterococcus faecalis Atividade e Segurança Térmica Ex Vivo
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11 de setembro de 2026
Neste artigo
Resumo
Resumo
A irrigação assistida por laser surgiu como um promissor coadjuvante na desinfecção de canais radiculares; no entanto, as evidências que comparam diretamente diferentes sistemas a laser sob condições experimentais padronizadas ainda são limitadas. Este estudo ex vivo comparou a eficácia antibacteriana e a segurança térmica de um laser de diodo de 808 nm, um laser de túlio de 1940 nm e um laser de érbio de 2940 nm para descontaminação intracanal contra Enterococcus faecalis. Espécimes padronizados de canais radiculares humanos infectados foram tratados utilizando parâmetros de irradiação clinicamente relevantes. A eficácia antibacteriana foi avaliada pela redução de unidades formadoras de colônia (UFC) e análise da curva de crescimento bacteriano, enquanto a segurança térmica foi avaliada pela medição das variações de temperatura na superfície externa da raiz durante a irradiação a laser. Os três sistemas a laser demonstraram maior atividade antibacteriana do que os controles tratados com soro fisiológico. O laser de érbio obteve a maior taxa média de inibição (99,0%) em 30 mJ durante 30 s, mantendo o aumento da temperatura na superfície externa da raiz abaixo do limite de segurança térmica aceito de 10 °C. O laser de túlio produziu atividade antibacteriana comparável, mas excedeu o limite de segurança térmica em seus parâmetros mais altos de irradiação. O laser de diodo demonstrou menor eficácia antibacteriana e maiores aumentos de temperatura em comparação com os lasers de túlio e de érbio nas condições testadas. Dentro das limitações deste modelo ex vivo, o laser de érbio de 2940 nm demonstrou o equilíbrio mais favorável entre eficácia antibacteriana e segurança térmica, representando uma abordagem coadjuvante promissora para desinfecção intracanal.
Introdução
A principal causa da pulpite e da periodontite apical é a infecção bacteriana do sistema de canais radiculares1. De acordo com um estudo, Enterococcus faecalis foi identificado como o principal isolado bacteriano em pacientes com infecção crônica ou recorrente após tratamento endodôntico2,3. Esta bactéria possui diversos fatores de virulência, incluindo a formação de biofilme; ela pode penetrar nos túbulos dentinários a profundidades de até 800 µm e sobreviver em condições com limitação de nutrientes2,3. Essas propriedades contribuem para sua resistência aos desinfetantes intracanal padrão utilizados durante a terapia de canal, bem como aos mecanismos naturais de defesa do organismo. Portanto, a incapacidade de eliminar completamente todos os E. faecalis remanescentes do sistema de canais radiculares é uma causa significativa de falha no tratamento endodôntico4.
O tratamento atual de canal combina a desbridagem mecânica por meio de instrumentação com irrigação química para ajudar a eliminar microrganismos do sistema de canais radiculares5. Embora a instrumentação mecânica seja altamente eficaz na redução das populações bacterianas, muitas áreas dentro da anatomia complexa do canal radicular permanecem inacessíveis apenas à instrumentação5. Portanto, os irrigantes químicos desempenham um papel importante na desinfecção do sistema de canais radiculares. Estudos demonstraram, no entanto, que mesmo os agentes químicos mais potentes não conseguem eliminar completamente os biofilmes bacterianos6. Além disso, alguns agentes químicos utilizados durante o tratamento endodôntico podem comprometer a integridade estrutural da dentina6,7. Para melhorar a eficácia da desinfecção e alcançar a remoção mais completa dos biofilmes bacterianos do sistema de canais radiculares, diversos métodos de ativação dos irrigantes químicos têm sido investigados. Dentre estes, a irrigação ativada por laser surgiu como uma das alternativas mais promissoras8. Os lasers de diodo, de túlio e de érbio também foram avaliados quanto ao seu potencial de produzir efeitos fototérmicos e fotomecânicos capazes de romper paredes celulares bacterianas e biofilmes9.
A interação entre cada um desses tipos de laser e os tecidos com os quais interagem varia significativamente de acordo com o comprimento de onda. Os lasers de diodo, que normalmente emitem luz em comprimentos de onda entre 808 e 980 nm, são absorvidos por cromóforos nos tecidos biológicos, resultando em uma reação fototérmica na qual as proteínas são desnaturadas e as bactérias são eliminadas10. Os lasers de túlio operam em 1940 nm e apresentam alta absorção pela água. Portanto, demonstrou-se que os lasers de túlio são particularmente adequados para ambientes úmidos, incluindo canais radiculares preenchidos com solução irrigadora11. Devido à sua alta absorção pela água, os lasers de túlio podem aquecer e vaporizar rapidamente o fluido quando utilizados em canais radiculares irrigados. A vaporização gera ondas de choque que podem ajudar a romper biofilmes bacterianos. Os lasers de érbio, especialmente aqueles que operam em 2940 nm, possuem o maior coeficiente de absorção pela água entre os lasers odontológicos12. Em canais irrigados, essa propriedade pode gerar vaporização explosiva e ondas de choque que desprendem mecanicamente e matam bactérias, ao mesmo tempo que potencialmente limitam a transferência de calor para a dentina circundante13.
Embora o interesse pela tecnologia a laser na prática endodôntica continue aumentando, muito ainda permanece desconhecido quanto aos parâmetros clínicos ideais para diferentes sistemas a laser. Os métodos atuais para uso clínico baseiam-se tipicamente em experiência empírica ou em diretrizes recomendadas pelos fabricantes, com apoio limitado por evidências científicas14. Além disso, a maioria dos estudos até o momento avaliou os efeitos antimicrobianos dos lasers; no entanto, um aspecto importante da terapia a laser recebeu relativamente pouca atenção: o risco de lesão térmica aos tecidos periodontais. Aceita-se geralmente que um aumento na temperatura da superfície externa da raiz superior a 10°C pode resultar em dano permanente ao ligamento periodontal e ao osso circundante15. Aparentemente, não há comparação direta publicada entre diferentes sistemas a laser que avalie de forma sistemática tanto a eficácia antimicrobiana quanto a segurança térmica sob condições experimentais controladas.
O objetivo principal deste estudo ex vivo foi investigar e comparar a eficácia antimicrobiana e a segurança térmica de três sistemas a laser — um laser de diodo de 808 nm, um laser de túlio de 1940 nm e um laser de érbio de 2940 nm — para eliminação do biofilme de E. faecalis das paredes do canal radicular. Para identificar combinações de parâmetros que promovam a eliminação bacteriana eficaz mantendo a segurança térmica, este estudo avaliou parâmetros de irradiação clinicamente relevantes. Espera-se que esses resultados ajudem os clínicos a selecionar abordagens seguras e eficazes com assistência de laser para desinfecção endodôntica.
Protocolo
Este estudo foi conduzido de acordo com os padrões éticos do Hospital Municipal Quarto de Xangai, Escola de Medicina da Universidade Tongji, e foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (Número de Aprovação 2026013-001). Os dentes humanos extraídos utilizados neste estudo foram coletados de pacientes submetidos à extração dentária por razões ortodônticas ou periodontais. O consentimento informado por escrito foi obtido de todos os participantes antes da coleta das amostras. Nenhuma intervenção clínica adicional foi realizada com o objetivo deste estudo. O estudo foi conduzido de acordo com os requisitos institucionais para o uso de dentes humanos extraídos.
Preparação e Critérios de Seleção dos Espécimes
Um total de 141 dentes permanentes com raiz única (incisivos mandibulares e pré-molares) recém-extraídos foi recebido do Departamento de Estomatologia, vinculado ao Hospital Municipal Quarto de Xangai da Universidade Tongji. Todos os dentes foram removidos por razões ortodônticas ou periodontais. O consentimento informado foi obtido de cada paciente. Foram incluídos neste estudo dentes com raízes de pelo menos dez milímetros, conforme determinado por uma sonda periodontal, dentes íntegros sem lesões cariosas ou trincas, formação radicular completa e curvatura radicular inferior a dez graus de acordo com o método de Schneider. Foram excluídos deste estudo dentes com múltiplos canais, calcificação do canal, reabsorção interna ou tratamento endodôntico prévio. Após a extração, todos os cálculos visíveis e remanescentes de tecido mole foram removidos utilizando um escalador periodontal. Os dentes foram então armazenados em solução salina a 0,9% a 4°C até o uso, para prevenir desidratação, e todos os experimentos foram realizados dentro de três meses após a extração. Os espécimes foram alocados aos grupos experimentais utilizando uma sequência predefinida de alocação alternada. Especificamente, os espécimes foram alocados sequencialmente a cada grupo de maneira alternada até que o tamanho amostral necessário para cada grupo fosse alcançado. Nenhum cálculo formal de poder a priori foi realizado. O tamanho da amostra foi determinado com base em estudos ex vivo comparáveis anteriores, no número de combinações de parâmetros de irradiação avaliadas e na disponibilidade de dentes extraídos elegíveis.
Preparação e Esterilização do Canal Radicular
A coroa de cada dente foi removida na junção cemento-esmalte utilizando uma serra diamantada de baixa velocidade com refrigeração contínua por água, a fim de obter um segmento radicular padronizado de 10 mm. O comprimento de trabalho foi determinado com 1 mm antes do forame apical, utilizando uma lima K tamanho 10. Os canais radiculares foram preparados utilizando o sistema rotatório de níquel-titânio ProTaper Universal, conforme instruções do fabricante, seguindo a sequência S1, S2, F1, F2 e F3, até alcançar o tamanho apical F3. Durante a instrumentação, os canais foram irrigados com aproximadamente 2 mL de hipoclorito de sódio a 5,25% após a utilização de cada lima rotatória, resultando em um volume total de irrigação de aproximadamente 10 mL por canal. Uma irrigação final foi realizada com 5 mL de EDTA a 17% durante 1 minuto, seguida por 5 mL de solução salina estéril. O forame apical foi selado com resina composta fluída para criar um sistema de canal fechado. As raízes preparadas foram esterilizadas em autoclave a 121°C por 20 minutos, armazenadas em solução salina tamponada com fosfato estéril (PBS) a 4°C e inoculadas com bactérias dentro de 24 horas após a esterilização.
Estirpe Bacteriana e Condições de Cultivo
E. faecalis ATCC 29212 foi utilizada para estabelecer o modelo de canal radicular infectado. A estirpe foi cultivada em ágar infusão cérebro-coracão (BHI) a 37°C por 24 h em condições aeróbicas. Uma única colônia foi transferida para caldo BHI e incubada a 37°C por 18–24 h. A suspensão bacteriana foi ajustada para aproximadamente 1,5 × 108 UFC/mL, equivalente ao padrão McFarland 0,5, utilizando um valor de densidade óptica a 600 nm (OD600) entre 0,08 e 0,10.
Estabelecimento de E. faecalis Modelo de Canal Radicular Infectado
Para estabelecer um modelo de biofilme em canal radicular infectado, a superfície externa de cada raiz esterilizada foi revestida com duas camadas de esmalte incolor para unhas, a fim de impedir a penetração bacteriana através do cemento. A região apical foi revestida após o forame apical ter sido selado com resina composta fluída, enquanto a abertura do canal permaneceu sem revestimento para permitir a inoculação bacteriana. Utilizando uma micropipeta estéril, 10 µL do E. faecalis a suspensão foi transferida para cada canal radicular individual para preencher todo o comprimento do canal sem derramar. As amostras inoculadas foram então colocadas individualmente em placas de cultura estéreis de 24 poços, com 1,5 mL de caldo BHI adicionado a cada poço. As amostras foram cultivadas em 37°C em condições aeróbicas por 21 dias. O meio de crescimento foi removido e substituído por caldo BHI estéril fresco a cada 2 dias para fornecer nutrientes para o crescimento bacteriano contínuo e para remover detritos celulares acumulados. Nenhuma inoculação adicional com E. faecalis foi realizada durante a troca do meio. Após a conclusão do período de incubação, todas as amostras viáveis foram lavadas uma vez com PBS para remover bactérias planctônicas fracamente aderidas antes dos testes experimentais. Duas amostras selecionadas aleatoriamente foram utilizadas para visualizar a formação de biofilme maduro e a penetração bacteriana nos túbulos dentinários por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os espécimes foram fixados em glutaraldeído 2,5% em 4°C por 24 h, lavadas três vezes com PBS, desidratadas em série crescente de etanol (30%, 50%, 70%, 80%, 90% e 100%), com cada etapa durando 10 min, em seguida divididas longitudinalmente, secas ao ar, montadas em suportes de alumínio, metalizadas com ouro por pulverização catódica e examinadas por MEV.
Grupos Experimentais e Protocolos de Irradiação com Laser
As 135 amostras de raízes infectadas foram divididas em três grupos experimentais principais de acordo com o sistema a laser utilizado: o Grupo de Laser de Diodo de 808 nm, o Grupo de Laser de Túlio de 1940 nm e o Grupo de Laser de Érbio de 2940 nm. Havia 45 amostras em cada grupo a laser, que foram posteriormente subdivididas de acordo com os parâmetros de irradiação. O laser de diodo foi operado com potências médias de 1,0, 1,5 ou 2,0 W, e cada ajuste de potência foi aplicado por 10, 20 ou 30 s, resultando em nove subgrupos com três amostras por subgrupo. O laser de túlio foi operado com potências médias de 1,5, 2,5 ou 3,5 W, e cada ajuste de potência foi aplicado por 10, 20 ou 30 s, também resultando em nove subgrupos com três amostras por subgrupo. O laser de érbio operou em modo de pulso supercurto com uma frequência fixa de 15 Hz. Energias de pulso de 10, 20 ou 30 mJ foram aplicadas por 10, 20 ou 30 s, gerando nove subgrupos com três amostras por subgrupo. Tanto o laser de diodo de 808 nm quanto o laser de túlio de 1940 nm foram operados em modo contínuo.
No total, seis amostras adicionais foram incluídas, com três amostras atribuídas a cada um dos grupos controle negativo e controle positivo. O grupo controle negativo foi tratado com solução salina estéril, enquanto o grupo controle positivo foi tratado com hipoclorito de sódio a 5,25% (NaOCl) durante 30 s.
Para os grupos com laser, seguiu-se um protocolo padronizado de irradiação. A fibra óptica foi introduzida no canal radicular até o comprimento de trabalho e movimentada em movimento espiral lento e contínuo, da direção apical para a coronal, durante todo o período de irradiação. Foram utilizadas fibras ou pontas de entrega específicas para cada laser, em vez de uma única fibra intercambiável. O laser de diodo de 808 nm foi aplicado por meio de uma fibra emissora terminal de 200 µm, o laser de túlio de 1940 nm por uma fibra emissora terminal de 200 µm, e o laser de érbio de 2940 nm por uma ponta radial de 400 µm. A fibra ou ponta de entrega foi retirada a uma velocidade aproximada de 1 mm/s. Após atingir o orifício do canal, foi retornada ao comprimento de trabalho, e o movimento espiral de apical para coronal foi repetido até que a duração de irradiação estipulada fosse completada.
Para os lasers de túlio e érbio, os canais foram mantidos preenchidos com solução salina estéril durante a irradiação, a fim de simular a ativação a laser assistida por água. Cerca de 10 µL de solução salina estéril foram introduzidos em cada canal para preenchê-lo até o nível do orifício canalicular antes da irradiação. A solução salina foi reposta antes de cada ciclo de irradiação, quando necessário, para manter o canal preenchido com líquido durante todo o tratamento. Para o grupo do laser de diodo, os canais foram secos com pontas de papel estéreis antes da irradiação, pois o laser de diodo de 808 nm apresenta absorção relativamente baixa na água e foi utilizado para produzir um efeito fototérmico antibacteriano direto dentro do canal. Em contraste, os lasers de túlio em 1940 nm e de érbio em 2940 nm possuem absorção significativamente maior na água e, portanto, foram aplicados em canais preenchidos com solução salina para facilitar efeitos fototérmicos e fotomecânicos mediados pela água. O tratamento a laser foi repetido uma vez ao dia durante três dias consecutivos.
Medição da Temperatura da Superfície Radicular Externa
As alterações de temperatura em tempo real na superfície radicular externa foram medidas durante o primeiro dia de irradiação a laser. Cada espécime radicular foi fixado verticalmente em um suporte universal à temperatura ambiente (22°C ± 1°C). Um termopar do tipo K conectado a um termômetro digital foi colocado em contato firme com o terço médio da superfície radicular externa, perpendicular ao eixo longo da raiz. A sonda do termopar foi posicionada com uma braçadeira ajustável e fixada à superfície radicular com fita adesiva resistente ao calor para manter um contato firme e constante durante toda a medição. A sonda do termopar foi calibrada antes de cada sessão de medição utilizando água em ebulição (100°C) e uma mistura de gelo e água (0°C). As leituras de temperatura foram registradas em intervalos de 50 ms durante todo o período de irradiação (10, 20 ou 30 s). Tanto a temperatura basal quanto a temperatura máxima registrada durante ou imediatamente após a irradiação a laser foram medidas para cada espécime. O aumento de temperatura da temperatura basal até a temperatura de pico foi calculado como ΔT. Um ΔT superior a 10°C foi considerado o limiar para possível dano aos tecidos periodontais.
Avaliação Microbiológica: Contagem de Colônias e Taxa de Inibição
Para determinar o efeito antibacteriano dos tratamentos a laser, amostras foram coletadas após cada tratamento a laser. O canal foi secado com pontas de papel estéreis. Um novo arquivo estéril tamanho 40 Hedström foi utilizado para cada espécime para obter fragmentos de dentina das paredes do canal, evitando assim a contaminação cruzada entre as amostras. Cada fragmento de dentina foi transferido para um tubo microcentrífugo separado contendo 1 mL de PBS estéril. Os tubos foram agitados vigorosamente em vórtex por 30 s para liberar as bactérias dos fragmentos de dentina. Diluições seriadas de 10 vezes, variando de 10−1 a 10−6, foram preparadas transferindo-se 100 µL da suspensão bacteriana para 900 µL de PBS estéril em cada etapa de diluição. Alíquotas (30 µL) de cada diluição foram espalhadas em placas separadas de ágar infusão cerebral-coração, as quais foram incubadas a 37°C por 24 h. As colônias foram contadas e registradas como unidades formadoras de colônia (UFC). Cada diluição foi plaqueada em triplicata, e a contagem média de colônias das três placas foi utilizada para análise. As placas foram codificadas antes da contagem, e o pesquisador responsável pela contagem das colônias estava cego quanto às atribuições de tratamento.
Aqui, C é a contagem média de UFC do grupo controle negativo (solução salina) e T é a contagem média de UFC do grupo experimental.
Análise da Curva de Crescimento Bacteriano
O efeito de diversos tratamentos a laser sobre a cinética de crescimento bacteriano foi investigado por meio da construção de curvas de crescimento. No terceiro dia após o tratamento a laser final, os canais foram lavados com 5 mL de solução salina estéril. O conteúdo dos canais foi coletado utilizando pontas de papel estéreis, que foram então transferidas para um tubo de centrífuga contendo 5 mL de caldo BHI. O tubo foi agitado em vórtex para suspender as bactérias no caldo. A suspensão bacteriana foi ajustada para 1 × 106 UFC/mL. A concentração bacteriana foi ajustada com base em medições de OD600, utilizando uma curva de calibração previamente estabelecida para E. faecalis ATCC 29212, e posteriormente verificada por contagem de colônias viáveis. Uma alíquota de 200 µL da suspensão foi adicionada a cada poço de uma microplaca estéril de 96 poços. Adicionalmente, 20 µL de óleo mineral estéril foram adicionados a cada poço para minimizar a evaporação. A microplaca foi colocada em um espectrofotômetro/incubadora mantido a 37°C, e a OD600 foi medida a cada hora durante 24 h. Antes de cada medição de OD600, a microplaca foi submetida a agitação orbital a aproximadamente 300 rpm por 10 s para garantir uma suspensão bacteriana homogênea. Cada amostra foi testada em cinco poços replicados.
Análise Estatística
Todos os dados numéricos são apresentados como média ± desvio padrão (DP). As análises estatísticas foram realizadas utilizando o SPSS Versão 26.0. A distribuição dos dados foi avaliada pelo teste de Shapiro–Wilk. A análise de variância (ANOVA) foi utilizada para comparar mais de dois grupos, seguida pelo teste de diferença significativa honesta (HSD) de Tukey para comparações aos pares. As comparações entre dois grupos foram realizadas utilizando o teste t para amostras independentes. A homogeneidade da variância foi avaliada pelo teste de Levene antes da aplicação dos testes paramétricos. Quando o pressuposto de homogeneidade da variância foi violado, a correção de Welch foi aplicada, conforme apropriado. A significância estatística foi definida como P < 0,05. Os gráficos foram gerados utilizando o GraphPad Prism Versão 9.0.
Resultados
Atividade antibacteriana de diferentes tratamentos a laser contra E. faecalis
A eficácia antibacteriana dos três sistemas a laser contra E. faecalis foi avaliada por meio da contagem de UFC após três tratamentos consecutivos. Os resultados são apresentados na Figura 1 e na Figura Suplementar 1. O grupo controle negativo com solução salina estéril demonstrou crescimento bacteriano acentuado, com uma média de valor cinza da contagem de colônias de 396618,7 ± 67787,5. O grupo controle positivo com NaOCl a 5,25% alcançou uma taxa média geral de inibição de 47,2% ± 3,0%, com valores individuais de inibição de 46,8%, 43,1% e 51,7%.
Figura 1: Eficácia antibacteriana de tratamentos a laser contra Enterococcus faecalis. Taxas de inibição bacteriana após três dias consecutivos de tratamento com sistemas a laser de diodo 808 nm, túlio 1940 nm e érbio 2940 nm, utilizando diferentes parâmetros de irradiação. O hipoclorito de sódio (NaOCl), 5,25%, foi utilizado como controle positivo, e a solução salina estéril como controle negativo, com 0% de inibição. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (DP) de n = 3 amostras independentes por grupo de tratamento. As barras de erro representam o DP. * indica P < 0,05, ** indica P < 0,01 e *** indica P < 0,001. Clique aqui para visualizar uma versão ampliada desta figura.
Todos os grupos tratados com laser demonstraram taxas de inibição mais altas do que o grupo controle positivo de NaOCl a 5,25%. Observou-se atividade antibacteriana aumentada com o aumento da potência do laser ou da energia do pulso e com tempos de irradiação mais longos. Por exemplo, no grupo do laser de diodo de 808 nm, a taxa média de inibição aumentou de 53,1% ± 6,5% a 1,0 W por 10 s para 80,2% ± 2,6% a 2,0 W por 30 s. Uma diferença estatisticamente significativa foi observada entre os grupos tratados com 1,0 W por 30 s e 2,0 W por 30 s (P < 0,01).
O laser de túlio de 1940 nm demonstrou maior atividade antibacteriana do que o laser de diodo na maioria das condições testadas. A 1,5 W durante 10 s, a taxa média de inibição foi de 78,8% ± 1,9%. A 2,5 W durante 30 s, a taxa de inibição aumentou para 91,6% ± 0,4%. A maior taxa de inibição no grupo do laser de túlio foi observada a 3,5 W durante 30 s, atingindo 97,4% ± 0,8%. Esse valor foi significativamente maior do que os do grupo controle positivo de NaOCl a 5,25% (P < 0,001) e do laser de diodo de 808 nm a 2,0 W durante 30 s (P < 0,001).
O laser de érbio a 2940 nm demonstrou a maior atividade antibacteriana entre os três sistemas a laser. A 10 mJ por 10 s, a taxa média de inibição atingiu 84,3% ± 1,5%. A 20 mJ por 30 s, a taxa de inibição foi de 96,5% ± 2,0%. A maior taxa de inibição foi observada a 30 mJ por 30 s, atingindo 99,0% ± 0,6%. Esse valor foi significativamente maior do que os do grupo controle positivo com NaOCl a 5,25% (P < 0,001), do laser de túlio a 1940 nm a 2,5 W por 30 s (P < 0,01) e de todos os grupos tratados com laser de diodo a 808 nm (P < 0,001).
Os resultados demonstram que os três sistemas a laser exibiram atividade antibacteriana contra E. faecalis, sendo os parâmetros crescentes de irradiação geralmente associados a taxas de inibição mais elevadas. Entre as condições testadas, o laser de erbio em 2940 nm alcançou a maior inibição antibacteriana, seguido pelo laser de túlio em 1940 nm e pelo laser de diodo em 808 nm, corroborando a hipótese do estudo de que a desinfecção intracanal assistida por laser pode reduzir efetivamente a carga bacteriana nas condições experimentais testadas.
Impacto dos Tratamentos a Laser na Cinética de Crescimento Bacteriano
A recuperação bacteriana após o tratamento foi avaliada mediante a medição da DO600 ao longo de 24 h. Os resultados são apresentados na Figura 2 e na Figura Suplementar 2. O grupo controle com solução salina estéril exibiu um padrão típico de crescimento bacteriano, composto por uma fase de latência de aproximadamente 4 h, seguida por crescimento exponencial rápido entre 4 e 12 h, e uma fase estacionária com valores máximos de DO600 variando de 1,167 a 1,245.
Figura 2: Curvas de crescimento de Enterococcus faecalis após tratamento a laser. Cinética de crescimento de Enterococcus faecalis recuperado de canais radiculares tratados ao longo de 24 h, medida como densidade óptica a 600 nm (OD600). São apresentadas curvas de crescimento representativas para o controle com solução salina estéril, controle com hipoclorito de sódio a 5,25% (NaOCl) e grupos selecionados de tratamento com laser de diodo a 808 nm, laser de túlio a 1940 nm e laser de érbio a 2940 nm. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (DP) de n = 3 amostras independentes, com cinco poços replicados tecnicamente por amostra. As barras de erro representam o DP. * indica P < 0,05, ** indica P < 0,01 e *** indica P < 0,001. Clique aqui para visualizar uma versão ampliada desta figura.
Os grupos com laser de diodo de 808 nm demonstraram supressão do crescimento bacteriano dependente de parâmetros. A 1,0 W durante 10 s, a curva de crescimento foi semelhante à do grupo com NaOCl 5,25%, com crescimento exponencial iniciando aproximadamente às 8 h. A 2,0 W durante 30 s, a fase de latência foi prolongada para aproximadamente 10 h, e o valor de OD600 às 14 h foi significativamente menor do que o do grupo com NaOCl 5,25% (0,559 ± 0,042 vs. 0,934 ± 0,042, P < 0,001).
Os grupos tratados com o laser de túlio de 1940 nm demonstraram maior supressão do crescimento bacteriano em comparação com os grupos tratados com o laser de diodo. A 1,5 W durante 10 s, o crescimento exponencial iniciou-se aproximadamente às 10 h. A 2,5 W durante 30 s, a fase de latência foi prolongada para cerca de 11 h, com valores de OD600 significativamente mais baixos do que os do controle com solução salina estéril e do laser de diodo de 808 nm a 2,0 W durante 30 s no ponto temporal correspondente (P < 0,001 para ambos). A 3,5 W durante 30 s, o crescimento bacteriano permaneceu acentuadamente suprimido, com os valores de OD600 mantendo-se em ou abaixo de aproximadamente 0,15 a partir das 12 h e essencialmente inalterados após esse momento.
Os grupos tratados com o laser de érbio em 2940 nm produziram a maior supressão do rebrotamento bacteriano. Com 10 mJ durante 10 s, nenhuma elevação exponencial no crescimento bacteriano foi observada até aproximadamente 10 h após o tratamento. O aumento da energia do pulso atrasou ainda mais o início do crescimento exponencial. Com 30 mJ durante 30 s, o crescimento exponencial foi atrasado até aproximadamente 12 h, período durante o qual a média da DO600 permaneceu abaixo de 0,20. Após 12 h, o valor de DO600 do grupo tratado com o laser de érbio em 2940 nm com 30 mJ durante 30 s foi significativamente menor do que o do grupo tratado com o laser de diodo em 808 nm com 2,0 W durante 30 s (0,120 ± 0,001 versus 0,274 ± 0,044, P < 0,001).
No geral, os três sistemas a laser atrasaram o crescimento bacteriano em comparação com os grupos controle, com supressão progressivamente maior observada à medida que os parâmetros de irradiação aumentaram. Nas condições testadas, o laser de erbio em 2940 nm produziu a maior inibição do crescimento bacteriano, seguido pelo laser de túlio em 1940 nm e pelo laser de diodo em 808 nm, corroborando a hipótese do estudo.
Avaliação da Segurança Térmica de Diferentes Tratamentos a Laser na Superfície Radicular Externa
Além da atividade antibacteriana, a segurança térmica dos três sistemas a laser foi avaliada mediante a medição do aumento da temperatura na superfície radicular externa (ΔT). Um aumento de temperatura superior a 10°C foi considerado o limiar para possível lesão do tecido periodontal. Os resultados são apresentados na Figura 3.
Figura 3: Alterações na temperatura da superfície radicular externa durante a irradiação a laser. Alterações na temperatura da superfície radicular externa (ΔT) após irradiação com sistemas a laser de diodo 808 nm, túlio 1940 nm e érbio 2940 nm, utilizando diferentes parâmetros de irradiação. A linha tracejada horizontal indica o limiar de 10 °C, comumente associado ao potencial de lesão do tecido periodontal. Os dados são apresentados como média ± desvio padrão (DP) de n = 3 amostras independentes. As barras de erro representam o DP. * indica P < 0,05, ** indica P < 0,01 e *** indica P < 0,001. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.
O laser de diodo de 808 nm provocou o maior aumento na temperatura da superfície radicular externa. Com potência de 1,0 W durante 10 s, o aumento médio de temperatura (ΔT) foi de 6,0°C ± 0,7°C. Aumentar o tempo de irradiação para 30 s, mantendo a mesma potência, elevou o ΔT médio para 10,4°C ± 0,9°C. A 2,0 W durante 30 s, o ΔT médio aumentou ainda mais para 14,8°C ± 3,8°C, ultrapassando o limite de segurança de 10°C em todas as amostras.
O laser de túlio de 1940 nm produziu aumentos moderados de temperatura. A 1,5 W durante 10 s, a ΔT média foi de 2,5°C ± 0,7°C. Aumentar a potência para 2,5 W e o tempo de irradiação para 30 s elevou a ΔT média para 8,8°C ± 0,9°C, com uma amostra atingindo 10,2°C. A 3,5 W durante 30 s, a ΔT média aumentou para 12,7°C ± 1,9°C, e todas as amostras ultrapassaram o limite de segurança de 10°C. O aumento de temperatura a 3,5 W durante 30 s foi significativamente maior do que aquele a 2,5 W durante 30 s (P < 0,01).
O laser de érbio de 2940 nm produziu o menor aumento na temperatura da superfície radicular externa em todos os parâmetros testados. A 10 mJ durante 10 s, a ΔT média foi de 0,8°C ± 0,1°C. Na configuração máxima testada de 30 mJ durante 30 s, a ΔT média foi de 3,6°C ± 1,0°C, com temperaturas medidas variando de 2,1°C a 5,0°C. Todos os aumentos de temperatura registrados permaneceram abaixo do limite de segurança de 10°C. O aumento de temperatura observado com o laser de túlio de 1940 nm a 3,5 W durante 30 s foi significativamente maior do que aquele observado com o laser de érbio de 2940 nm a 30 mJ durante 30 s (P < 0,01).
No geral, o laser de érbio de 2940 nm demonstrou os menores aumentos de temperatura na superfície radicular externa sob todas as condições testadas, enquanto o laser de diodo de 808 nm e os ajustes de maior potência do laser de túlio de 1940 nm produziram elevações de temperatura maiores, com algumas condições excedendo o limite de segurança pré-definido.
Disponibilidade de Dados:
Todos os dados brutos que sustentam os achados deste estudo são fornecidos como arquivos suplementares. Imagens representativas de unidades formadoras de colônia (UFC) e curvas completas de crescimento bacteriano estão disponíveis nas Figuras Suplementares 1 e 2, respectivamente. As medições individuais de temperatura na superfície radicular externa por espécime são fornecidas na Tabela Suplementar 1, e os dados brutos de atividade antibacteriana, incluindo valores de cinza da área da colônia e taxas de inibição calculadas para todos os grupos tratados, estão fornecidos na Tabela Suplementar 2. Esses arquivos suplementares contêm os dados primários que sustentam os resultados apresentados no manuscrito principal.
Arquivos Suplementares
Figura Suplementar 1. Placas representativas de unidades formadoras de colônia (UFC) após tratamento a laser de Enterococcus faecalis. Placas de ágar infusão cérebro-coracão (BHI) representativas mostrando unidades formadoras de colônia (UFCs) recuperadas de amostras de canal radicular após três tratamentos consecutivos. As amostras foram diluídas em série (10−3) antes da semeadura e incubadas por 24 h. Imagens representativas são mostradas para o controle negativo de solução salina estéril, controle positivo de hipoclorito de sódio a 5,25% (NaOCl), grupo tratado com laser de diodo de 808 nm (2,0 W, 30 s), grupo tratado com laser de túlio de 1940 nm (3,5 W, 30 s) e grupo tratado com laser de érbio de 2940 nm (30 mJ, 30 s). Clique aqui para baixar este arquivo.
Figura Suplementar 2. Curvas completas de crescimento de 24 h de Enterococcus faecalis após tratamento a laser. Cinética de crescimento de Enterococcus faecalis recuperado de canais radiculares tratados ao longo de 24 h, medida como densidade óptica a 600 nm (OD600). As suspensões bacterianas foram ajustadas para 1 × 106 unidades formadoras de colônia (UFC)/mL e incubadas em caldo cérebro-corpo (BHI) a 37°C. As curvas de crescimento são apresentadas para o controle negativo com solução salina estéril, o controle positivo com hipoclorito de sódio a 5,25% (NaOCl) e todos os grupos experimentais de tratamento a laser: laser de diodo de 808 nm (1,0, 1,5 e 2,0 W por 10, 20 e 30 s), laser de túlio de 1940 nm (1,5, 2,5 e 3,5 W por 10, 20 e 30 s) e laser de érbio de 2940 nm (10, 20 e 30 mJ a 15 Hz por 10, 20 e 30 s). Clique aqui para baixar este arquivo.
Tabela Suplementar 1. Medidas da temperatura da superfície radicular externa durante a irradiação a laser.
As temperaturas da superfície radicular externa antes e após a irradiação são relatadas para cada espécime tratado com o laser de diodo 808 nm, túlio 1940 nm ou érbio 2940 nm, sob as condições indicadas de potência ou energia de pulso e tempo de irradiação. A diferença de temperatura foi calculada como ΔT = temperatura após a irradiação − temperatura antes da irradiação. Três espécimes independentes foram avaliados para cada combinação de parâmetros. Clique aqui para baixar este arquivo.
Tabela Suplementar 2. Dados brutos da análise de unidades formadoras de colônia (UFC) para atividade antibacteriana após tratamento a laser.
São apresentados os valores de cinza da área da colônia e as taxas de inibição calculadas para cada espécime após tratamento com o laser de diodo 808 nm, túlio 1940 nm ou érbio 2940 nm, sob os parâmetros de irradiação indicados. A solução salina e o hipoclorito de sódio a 5,25% (NaOCl) foram utilizados como grupos controle negativo e positivo, respectivamente. A taxa de inibição foi calculada em relação ao grupo controle com solução salina. Três espécimes independentes foram analisados para cada condição de tratamento. Clique aqui para baixar este arquivo.
Discussão
O presente estudo ex vivo comparou a eficácia antibacteriana e a segurança térmica dos lasers de diodo 808 nm, de túlio 1940 nm e de érbio 2940 nm para eliminação de E. faecalis biofilmes de canais radiculares infectados. Os três sistemas a laser demonstraram maior inibição bacteriana do que o NaOCl a 5,25%; no entanto, sua eficácia antibacteriana e perfis térmicos diferiram substancialmente. O laser de érbio a 2940 nm obteve o equilíbrio geral mais favorável, combinando a maior atividade antibacteriana com o menor aumento da temperatura na superfície externa da raiz. O laser de túlio a 1940 nm também demonstrou forte eficácia antibacteriana, embora seus parâmetros de irradiação mais altos tenham excedido o 10°C limiar de segurança térmica. O laser de diodo de 808 nm apresentou atividade antibacteriana relativamente menor e segurança térmica menos favorável. Esses resultados indicam que o comprimento de onda do laser e os parâmetros de irradiação são fatores importantes no equilíbrio entre a desinfecção intracanal e a segurança dos tecidos periodontais16No entanto, as comparações diretas entre os diferentes sistemas a laser devem ser interpretadas com cautela, pois cada comprimento de onda possui indicações clínicas distintas, sistemas de entrega e mecanismos de ação específicos. O presente estudo comparou a eficácia antibacteriana em condições padronizadas ex vivo condições, mas a aplicação ideal de cada laser pode depender do cenário clínico específico, dos objetivos do tratamento e dos instrumentos disponíveis.
Os diferentes resultados entre os três sistemas a laser podem ser explicados principalmente por suas interações dependentes do comprimento de onda com a água, a dentina e os biofilmes bacterianos. O laser de diodo em 808 nm é pouco absorvido pela água e age principalmente por efeitos fototérmicos diretos. Os lasers de diodo podem eliminar bactérias por desnaturação proteica induzida pelo calor e pela ruptura das membranas bacterianas17. No entanto, sua eficácia depende da proximidade do contato ou da aproximação da fibra laser às bactérias-alvo, o que é desafiador na anatomia complexa do sistema de canais radiculares. Isso pode explicar por que o laser de diodo produziu apenas um grau moderado de inibição bacteriana, mesmo com potência de 2,0 W por 30 s. A análise da curva de crescimento mostrou que algumas bactérias sobreviveram após o tratamento com laser de diodo e mantiveram a capacidade de se reproduzir, sugerindo que o biofilme existente não foi completamente erradicado18. O laser de túlio em 1940 nm apresenta maior absorção pela água do que o laser de diodo e pode produzir efeitos tanto fototérmicos quanto fotomecânicos em canais cheios de fluido19. Essa maior absorção pela água pode explicar seu efeito antibacteriano mais forte; no entanto, também resulta em aumentos de temperatura mais acentuados em configurações de potência mais elevadas. Por exemplo, a irradiação com 3,5 W por 30 s produziu atividade antibacteriana acentuada, mas ultrapassou o limite recomendado de 10 °C para evitar danos aos tecidos periodontais11,20. Portanto, parece haver um compromisso entre alcançar uma desinfecção suficiente dos canais radiculares infectados e evitar aumentos excessivos de temperatura que possam danificar os tecidos circundantes. Esses sistemas a laser não devem ser considerados diretamente intercambiáveis, pois seus comprimentos de onda possuem cromóforos primários diferentes e mecanismos distintos de transferência de energia. O laser de diodo produz principalmente efeitos fototérmicos diretos, enquanto os lasers de túlio e de érbio interagem mais fortemente com a água intracanal e geram efeitos adicionais mediados pelo fluido. Assim, as diferenças observadas podem refletir tanto os parâmetros de irradiação quanto os mecanismos de ação distintos dos três sistemas a laser.
O laser de érbio 2940 nm demonstrou o perfil geral mais favorável, principalmente devido à sua forte absorção pela água21Quando ativado em um canal irrigado, a energia do laser é rapidamente absorvida por uma fina camada de água, produzindo cavitação, ondas de choque e movimentação do fluido, capazes de romper mecanicamente biofilmes, ao mesmo tempo que limitam a transferência de calor para a superfície externa da raiz.21,22. Esse mecanismo pode explicar por que o laser de érbio alcançou a maior taxa de inibição, mantendo todos os aumentos de temperatura relacionados à irradiação dentro do limite de segurança pré-definido. Assim, nas condições experimentais avaliadas neste estudo ex vivo, o laser de érbio demonstrou o equilíbrio mais favorável entre eficácia antibacteriana e segurança térmica dentre os sistemas a laser testados. No entanto, esses achados estão limitados aos testados ex vivo condições e não estabelecem a superioridade clínica do laser de érbio. Além disso in vivo e estudos clínicos são necessários antes que esses achados possam ser traduzidos em recomendações de tratamento clínico. A menor taxa de inibição observada com NaOCl a 5,25% também é notável. O NaOCl tem sido amplamente utilizado como irrigante padrão para eliminação bacteriana durante o tratamento endodôntico; no entanto, seu efeito antibacteriano pode ser limitado em biofilmes maduros e nos túbulos dentinários profundos devido à penetração restrita, neutralização química e à natureza protetora da matriz do biofilme.23,24Essas descobertas sugerem que os efeitos físicos produzidos pelos lasers, incluindo cavitação, ondas de choque e fluxo acústico, podem potencializar a eliminação bacteriana além da irrigação com hipoclorito de sódio isoladamente.8,25Portanto, os resultados deste estudo apoiam o uso da irrigação assistida a laser como um método adjuvante para desinfecção do canal radicular, e não como substituto aos protocolos convencionais de irrigação. Solução fisiológica e NaOCl foram incluídos como controles químicos negativo e convencional, respectivamente, porque o objetivo principal deste estudo foi comparar os três sistemas a laser em condições experimentais padronizadas. O estudo não foi concebido para comparar a irradiação a laser com protocolos contemporâneos de irrigação ativada por som, ultrassom ou outros métodos. Consequentemente, a ausência desses grupos comparadores limita a relevância clínica dos achados e deverá ser abordada em estudos futuros.
A segurança térmica continua sendo uma consideração importante para a aplicação clínica. A irradiação com laser de diodo por 30 s excedeu ou se aproximou do limite de 10°C sob diversos parâmetros de irradiação, sugerindo um risco potencial de dano aos tecidos periodontais26. Os lasers de túlio demonstraram efeitos antibacterianos maiores do que os lasers de diodo; no entanto, sua margem de segurança diminuiu em configurações de potência mais altas, especialmente a 3,5 W por 30 s. Em contraste, o laser de érbio em 2940 nm manteve aumentos de temperatura abaixo de 5°C, mesmo em sua configuração mais alta testada. Esses achados sugerem que a seleção cuidadosa de parâmetros é necessária quando se utilizam lasers de diodo ou de túlio, enquanto o laser de érbio demonstrou uma margem térmica de segurança mais ampla nas condições avaliadas neste estudo.
Este estudo apresenta várias limitações. Primeiro, utilizou um modelo ex vivo, que não consegue reproduzir completamente o ambiente biológico de uma infecção clínica. Em particular, a ausência de perfusão sanguínea e resfriamento fisiológico do tecido pode afetar a dissipação de calor e as alterações na temperatura da superfície radicular externa. Além disso, a ausência de respostas imunes do hospedeiro significa que os achados antibacterianos refletem apenas os efeitos diretos da irradiação a laser, não levando em conta a eliminação bacteriana mediada pelo sistema imunológico. Segundo, apenas uma espécie bacteriana, a E. faecalis, foi examinada, enquanto a maioria dos canais radiculares infectados contém biofilmes polimicrobianos27. Um modelo de espécie única não consegue reproduzir as interações interespecíficas, a estrutura heterogênea do biofilme ou a suscetibilidade antimicrobiana variável características das infecções polimicrobianas clínicas. Portanto, a eficácia antibacteriana observada contra E. faecalis não deve ser generalizada para toda a comunidade microbiana presente nos canais radiculares infectados. Terceiro, todos os experimentos foram realizados em condições laboratoriais estáticas, enquanto os dentes in vivo são influenciados pelos tecidos circundantes e pela perfusão sanguínea, o que pode afetar a dissipação de calor28. Por fim, apenas combinações selecionadas de comprimentos de onda e parâmetros de irradiação foram avaliadas. Os comprimentos de onda testados foram escolhidos para representar sistemas a laser com diferentes características de absorção pela água e mecanismos de ação antibacteriana, enquanto os parâmetros de irradiação foram selecionados para representar níveis de potência ou energia e durações de exposição clinicamente viáveis. Contudo, o número limitado de combinações de parâmetros restringe a generalização dos achados, e configurações adicionais devem ser avaliadas em estudos futuros. Embora a E. faecalis seja frequentemente utilizada como organismo representativo na pesquisa endodôntica devido à sua persistência e resistência aos desafios antimicrobianos, ela não deve ser considerada o único indicador de infecção endodôntica ou falha no tratamento. As infecções clínicas são tipicamente polimicrobianas, e estudos futuros utilizando modelos de biofilmes multiespecíficos são necessários para refletir melhor a complexidade da microbiota do canal radicular.
Em resumo, cada sistema a laser demonstrou maior atividade antibacteriana contra E. faecalis do que o NaOCl a 5,25% isoladamente. Nas condições experimentais avaliadas neste estudo ex vivo, o laser de érbio em 2940 nm demonstrou o equilíbrio mais favorável entre eficácia antibacteriana e segurança térmica. O laser de túlio em 1940 nm também demonstrou forte atividade antibacteriana; no entanto, configurações de potência mais altas aumentaram o risco de dano térmico aos tecidos. O laser de diodo em 808 nm apresentou eficácia antibacteriana inferior e segurança térmica menos favorável em comparação com os lasers de túlio e de érbio. Esses achados apoiam a investigação adicional da desinfecção assistida por laser de érbio em 2940 nm como uma abordagem complementar promissora para o tratamento endodôntico29.
Divulgações
Conflito de Interesse:
Os autores declaram que não possuem interesses conflitantes relacionados a este estudo. Não existem conflitos de interesse financeiros ou não financeiros, incluindo emprego, consultorias, propriedade de ações, honorários ou testemunhos periciais remunerados.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado pelo Programa de Pesquisa Médica da Comissão de Saúde do Distrito de Hongkou.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução salina 0,9% | Beyotime | ST341-500ml | Armazenamento, irrigação e controle negativo de dentes |
| Tubo microcentrífugo de 1,5 mL | Axygen | MCT-150-C | Coleta de amostras e diluição seriada |
| Placa de cultura de 24 poços | Corning | 3524 | Incubação de biofilme |
| Microplaca de 96 poços | Corning | 3599 | Ensaio de curva de crescimento bacteriano |
| Autoclave | Tuttnauer | 2540E | Sterilização de raízes preparadas |
| Ágar infusão cérebro-coragem (BHI) | BD Biosciences | 211065 | Cultura bacteriana e enumeração de UFC |
| Caldo infusão cérebro-coragem (BHI) | BD Biosciences | 237500 | Cultura bacteriana e análise de curva de crescimento |
| Esmalte incolor para unhas | Beyotime | C0187 | Impermeabilização da superfície externa da raiz |
| Serra de diamante (baixa velocidade) | Buehler | IsoMet Low Speed Saw | Seccionamento da coroa |
| Termômetro digital (compatível com termopar do tipo K) | OMEGA Engineering | HH802U | Medição da temperatura da superfície externa da raiz |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | American Type Culture Collection (ATCC) | ATCC 29212 | Estirpe bacteriana |
| Ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA), 17% | Sigma-Aldrich | E9884 | Enxágue final do canal |
| Resina composta fluída | 3M ESPE | 6031A2 | Impermeabilização do forame apical |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | Version 9.0 • RRID: SCR_002798 | Geração de gráficos |
| Arquivo Hedström, tamanho 40 | Dentsply Maillefer | 80603010042 | Coleta de fragmentos de dentina |
| Arquivo K, tamanho 10 | Dentsply Maillefer | 800-0210 | Determinação do comprimento de trabalho |
| Sistema a laser, fibra dopada com túlio em 1940 nm | Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent) | TN20 | Irradiação a laser |
| Sistema a laser, Er:YAG em 2940 nm | PointNix Co., Ltd. | Modular-beam | Irradiação a laser |
| Sistema a laser, diodo em 808 nm | elexxion AG | Claros Nano | Irradiação a laser |
| Micropipeta | Eppendorf | 3123000063 | Inoculação de amostras |
| Óleo mineral (esterilizado) | Sigma-Aldrich | M5904 | Prevenção da evaporação durante o ensaio de curva de crescimento bacteriano |
| Sistema de arquivo rotatório de níquel-titânio (preparação F3) | Dentsply Sirona | ProTaper Gold | Preparo do canal radicular |
| Fibra óptica para laser de fibra dopada com túlio em 1940 nm | Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent) | 400 µm de diâmetro | Irradiação a laser |
| Fibra óptica para laser Er:YAG em 2940 nm | PointNix Co., Ltd. | 600 µm de diâmetro | Irradiação a laser |
| Fibra óptica para laser de diodo em 808 nm | elexxion AG | elexxion longlife 200, 200 µm (Art. No. 10063) | Irradiação a laser |
| Broca periodontal | Hu-Friedy | PCPUNC156 | Medição do comprimento da raiz |
| Escalador periodontal | Hu-Friedy | SJ34-35 | Remoção de cálculo e tecido mole |
| Solução salina tamponada com fosfato (PBS) | Gibco / Thermo Fisher Scientific | 10010023 | Lavagem e diluição bacteriana |
| Pontas de pipeta (10 µL, 200 µL, 1000 µL) | Axygen | T-300 / T-200-Y / T-1000-B | Manuseio de líquidos |
| Estativa | Biosharp | BS-IT-01 | Fixação do espécime radicular |
| Microscópio eletrônico de varredura (MEV) | Hitachi High-Technologies | TM4000Plus | Imagem de biofilme |
| Incubadora com agitação | Thermo Fisher Scientific | MaxQ 4000 | Incubação de cultura em caldo |
| Hipoclorito de sódio (NaOCl), 5,25% | Sigma-Aldrich | 425044 | Irrigação do canal e controle positivo |
| Espetrofotômetro/incubadora (leitor de microplacas) | BioTek / Agilent Technologies | Epoch 2 | Medições da densidade óptica a 600 nm (OD600) |
| SPSS | IBM | Version 26.0 • RRID: SCR_002865 | Análise estatística |
| Pontas de papel estéreis | Dentsply Maillefer | Absorbent Paper Points, ISO 20, 0,02 de conicidade, 28 mm | Secagem do canal e coleta bacteriana |
| Termopar (tipo K) | OMEGA Engineering | 88000 | Medição de temperatura |
| Misturador vortex | Scientific Industries | Vortex-Genie 2 | Mistura de suspensões bacterianas |
Referências
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