Artigo de método

Uma Abordagem Modificada de Extração Dentária para Melhorar a Eficiência e a Consistência Procedimental em um Modelo de Cicatrização do Alvéolo Dentário Mandibular Murino

23 visualizações

⸱

DOI:

10.3791/72974

⸱

8 de setembro de 2026

 ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Oral Diseases & National Center for Stomatology & National Clinical Research Center for Oral Diseases, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, 2Department of Endodontics, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University

Neste artigo

Resumo

Descreve-se uma abordagem modificada para a extração do primeiro molar mandibular em camundongos, comparando-a com a abordagem convencional para avaliar a eficiência e reprodutibilidade do procedimento. A abordagem modificada melhora a consistência do procedimento e reduz os desafios técnicos no estabelecimento de um modelo de cicatrização do alvéolo dentário murino.

Resumo

O modelo de cicatrização do alvéolo dentário (TSHM) é um modelo animal amplamente utilizado para investigar os mecanismos moleculares subjacentes à regeneração óssea. Embora o modelo TSHM mandibular murino seja valioso para o estudo de processos patológicos específicos da mandíbula, o estabelecimento desse modelo permanece tecnicamente desafiador devido às características anatômicas e biomecânicas da região molar mandibular. Este protocolo descreve uma abordagem modificada para a extração do primeiro molar mandibular em camundongos e compara seu desempenho com a técnica convencional, visando melhorar a eficiência e a reprodutibilidade do procedimento. Em condições experimentais controladas, a abordagem modificada reduziu significativamente o tempo médio de extração de 29 para 10 minutos. Além disso, o grupo com a técnica modificada apresentou menos complicações relacionadas à extração, incluindo fraturas radiculares e do osso alveolar, indicando maior consistência procedural. A análise por microtomografia computadorizada (μCT) demonstrou ainda uma melhor preservação da arquitetura do alvéolo de extração durante os estágios iniciais da cicatrização. Esses resultados indicam que a abordagem modificada de extração melhora a eficiência e a reprodutibilidade do procedimento, ao mesmo tempo que reduz os desafios técnicos associados à extração dentária murina mandibular. Este protocolo pode facilitar o estabelecimento mais consistente de modelos de cicatrização do alvéolo dentário murino mandibular, especialmente para pesquisadores com experiência limitada em microcirurgia.

Introdução

O modelo de cicatrização do alvéolo dentário (TSHM) é um modelo clássico para o estudo da regeneração óssea1. Este modelo cria uma lesão desafiadora, porém subcrítica, no osso alveolar, permitindo uma cicatrização natural favorável sem intervenção adicional1. Os camundongos são amplamente utilizados como organismos modelo devido ao seu background genético, semelhanças no metabolismo ósseo com os humanos, custos relativamente baixos de criação e facilidade de manutenção2. Nas últimas décadas, os rápidos avanços na tecnologia de edição gênica tornaram os camundongos indispensáveis para investigar os mecanismos moleculares subjacentes à regeneração óssea3. Consequentemente, a extração de molares em camundongos transgênicos tem sido amplamente utilizada para estabelecer o TSHM com o objetivo de investigar os mecanismos regulatórios da regeneração óssea4,5,6.

A maioria dos estudos anteriores estabeleceu o modelo murino de TSHM utilizando a maxila4,5,6, porque a mandíbula é mecanicamente mais rígida e menos complacente do que a maxila7, o que aumenta a dificuldade técnica da extração dentária. Além disso, o campo cirúrgico para a extração dos molares superiores é relativamente mais acessível, e a maxila é mais fácil de estabilizar do que a mandíbula, tornando o procedimento tecnicamente menos exigente. Apesar desses desafios, a morfologia curva e alargada da raiz apical do primeiro molar mandibular do camundongo aumenta a retenção mecânica dentro do osso alveolar circundante8,9, complicando ainda mais a extração (Figura 1). Contudo, os modelos de extração mandibular permanecem indispensáveis para investigar processos patológicos específicos da mandíbula, incluindo osteomielite, osteonecrose associada a medicamentos da mandíbula, osseointegração de implantes e regeneração óssea com biomateriais10,11,12. Portanto, um método reprodutível e confiável para a extração dos molares mandibulares em camundongos é importante para estudos que exigem modelos de cicatrização do alvéolo dentário específicos da mandíbula.

Diagrama da anatomia do dente: seções mostrando esmalte, dentina e cemento; A, B, C indicam estágios.
Figura 1. Comparação esquemática da morfologia dentária em humanos e camundongos. 
(A) Ilustração esquemática de um dente humano adulto. (B) Ilustração esquemática do primeiro molar mandibular de um camundongo adolescente. (C) Ilustração esquemática do primeiro molar mandibular de um camundongo adulto. Os diagramas destacam as diferenças na morfologia radicular e na distribuição do cemento que contribuem para a retenção mecânica aumentada dos primeiros molares mandibulares de camundongos adultos dentro do osso alveolar. Esmalte, dentina e cemento são indicados pelas cores correspondentes apresentadas na legenda. As características anatômicas baseiam-se em descrições publicadas8,9,15. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Uma técnica previamente desenvolvida de extração dentária do nosso grupo de pesquisa utiliza seringas modificadas em elevadores dentários13. Embora este método permita a extração bem-sucedida do primeiro molar mandibular direito em camundongos, exige um alto nível de precisão técnica e apresenta uma curva de aprendizado acentuada, que demanda prática extensiva. Operadores inexperientes podem inadvertidamente causar lesões em estruturas anatômicas adjacentes. Além disso, a extração do primeiro molar mandibular esquerdo requer treinamento adicional em "imagem espelhada" para alcançar proficiência no procedimento. Esses desafios podem comprometer a integridade do alvéolo de extração, reduzir a consistência dos resultados de cicatrização entre os animais e limitar a acessibilidade do modelo para pesquisadores com pouca experiência em microcirurgia.

Este protocolo descreve uma abordagem modificada para a extração do primeiro molar mandibular em camundongos, com o objetivo de melhorar a acessibilidade e a reprodutibilidade do procedimento. O protocolo foi validado em camundongos machos C57BL/6 com oito semanas de idade para o estabelecimento de um TSHM do primeiro molar mandibular. A abordagem modificada foi comparada sistematicamente com a técnica convencional para avaliar a eficiência do procedimento, o sucesso da extração e as complicações relacionadas ao procedimento. Além disso, foram analisados os modos comuns de falha técnica encontrados durante a aquisição do método, a fim de fornecer orientações práticas para pesquisadores que estejam estabelecendo o TSHM mandibular murino.

Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética da Escola de Estomatologia de West China, Universidade de Sichuan (WCHSIRB-D-2025-188) e foram realizados de acordo com as diretrizes institucionais de cuidados com animais.

OBSERVAÇÃO: Utilize camundongos machos C57BL/6 com oito semanas de idade e pesando entre 22 e 29 g. Mantenha os animais com dieta padrão de ração e água fornecida ad libitum em condições padrão de alojamento (21°C–24°C, umidade de 40%–60% e ciclo claro-escuro de 12 horas). Utilize os materiais e instrumentos listados na Tabela de Materiais. Utilize 24 camundongos para a avaliação comparativa e apresentação de casos falhados. Utilize camundongos adicionais para treinamento do operador antes do experimento comparativo.

1. Preparação pré-cirúrgica

  1. Preparação do instrumento
    1. Prepare agulhas de seringa 25 G para uso como elevadores (opcional). Dobre a ponta biselada de cada agulha em aproximadamente 20°–40°13.
    2. Prepare pinças oftálmicas denteadas para uso como pinças dentárias. Inspeccione a ponta dentada com ampliação para confirmar que os dentes estão adequadamente alinhados e livres de deformações.
    3. Monte um afastador bucal utilizando uma borracha elástica e quatro agulhas de seringa 25 G. Prepare uma placa de espuma ou papelão como plataforma cirúrgica, fita adesiva para fixar as patas do camundongo e uma lanterna de cabeça para iluminar o campo cirúrgico.
    4. Prepare uma manta térmica para a recuperação pós-operatória e pré-aqueça-a a aproximadamente 38°C antes da cirurgia. Prepare bolas de algodão para hemostasia e uma quantidade adequada de solução salina para limpeza da cavidade oral.
    5. Prepare uma luva digital para cobrir o polegar e proteger o operador durante o procedimento de extração.
    6. Cubra a superfície operatória e a manta térmica com tecido não tecido estéril para manter um campo estéril.
  2. Preparação da anestesia
    1. Desinfete o abdômen do camundongo usando uma bola de algodão embebida em solução antisséptica de poviodine-iodo. Administre pentobarbital sódico a 1% (50 mg/kg) por via intraperitoneal14. Avalie a profundidade da anestesia utilizando o teste de compressão do dedo do pé e administre anestesia complementar conforme necessário.
      NOTA: Se o reflexo de compressão do dedo do pé retornar ou se o procedimento se aproximar da duração anestésica esperada, interrompa o procedimento e administre anestesia complementar de acordo com o protocolo veterinário institucional aprovado.
    2. Aplicar pomada oftálmica veterinária em ambos os olhos imediatamente após a anestesia para prevenir o ressecamento da córnea.
  3. Preparação de desinfecção e esterilização
    1. Desinfete a plataforma cirúrgica, a manta térmica, a fita adesiva, a luva digital e a área de trabalho circundante com etanol a 75%. Use cotonetes estéreis novos, tecido não tecido, borrachas elásticas e agulhas para cada camundongo. Esterilize as pinças denteadas e a solução salina utilizando o protocolo institucional padrão de esterilização a vapor antes do uso.
      CAUTELA: O etanol a 75% é inflamável. Utilize-o em local bem ventilado, longe de calor, faíscas, chamas abertas e outras fontes de ignição. Use equipamento de proteção individual apropriado. Deixe os instrumentos e superfícies tratados com etanol secarem completamente antes de iniciar o procedimento.
    2. Realize a higiene das mãos antes de iniciar o procedimento. Use roupa cirúrgica limpa, touca cirúrgica estéril, máscara cirúrgica e luvas estéreis.

2. Processo cirúrgico

  1. Fixação e limpeza do camundongo
    1. Coloque o camundongo em posição supina sobre a placa de fixação e prenda as patas com fita adesiva. Insira duas agulhas 25 G na placa de espuma ao nível do plano orbito-auricular e insira duas agulhas 25 G adicionais abaixo da mandíbula.
    2. Posicione a faixa de borracha sobre as agulhas e sobre os incisivos para manter a boca aberta. Retraia suavemente a língua e posicione-a no lado oposto ao local da extração para evitar obstrução do campo cirúrgico. Utilize o primeiro molar mandibular direito como exemplo representativo ao longo deste protocolo.
    3. Remova detritos alimentares e outros materiais estranhos da cavidade oral usando uma pequena bola de algodão umedecida com solução salina.
      NOTA: Aperte bem a bola de algodão para remover o excesso de solução salina e evitar que o líquido entre na cavidade oral, o que pode causar sufocamento.
  2. Eliminação da resistência distal e mesial (opcional)
    1. Use uma pinça com a mão esquerda para retrair o canto direito da boca e expor completamente o primeiro molar mandibular direito e os tecidos moles bucais e linguais adjacentes.
    2. Segure a pinça com a mão direita. Em seguida, segure uma agulha 25 G com a mão esquerda e insira cuidadosamente a agulha no ligamento periodontal bucal adjacente à raiz distal para criar um espaço no ligamento periodontal.
    3. Avance lentamente a agulha em direção à região periapical, girando-a mesial e lingualmente em direção ao molar para soltar a raiz do alvéolo.
    4. Insira uma agulha 25 G na furcação radicular pelo lado bucal e eleve-a na direção oclusal com a mão esquerda. Insira uma segunda agulha 25 G no ligamento periodontal lingual adjacente à raiz mesial com a mão direita para criar um espaço no ligamento periodontal, depois gire a agulha em direção distal e bucal.
    5. Retire ambas as agulhas do campo cirúrgico após concluir o pré-soltura do ligamento periodontal.
      NOTA: Realize o pré-soltura do ligamento periodontal apenas quando o dente apresentar mobilidade mínima e resistência acentuada após a oscilação inicial com a pinça.
  3. Oscilação e extração
    1. Estabilize a cabeça do camundongo usando os dedos indicador e médio da mão esquerda. Posicione o polegar, coberto com uma luva digital, contra os incisivos mandibulares para apoio, enquanto segura a pinça com a mão direita.
    2. Segure as pontas da pinça perpendicularmente ao plano oclusal e paralelamente ao eixo longo do dente. Posicione as pontas serrilhadas dentro da furcação radicular para obter tração estável.
      NOTA: Não segure diretamente a raiz do dente com a pinça, pois isso pode causar fratura radicular.
    3. Segure a coroa com a pinça e aplique movimentos suaves de oscilação bucal e lingual. Limite o ângulo de oscilação bucal a 30° e o ângulo de oscilação lingual a 50°. Realize um movimento de oscilação a cada 1–1,5 s.
    4. Mantenha a tração ao longo do eixo longo do molar, do ápice em direção à coroa, enquanto aplica um contra-aposição constante contra os incisivos mandibulares com a polpa do polegar esquerdo para estabilizar a mandíbula.
      NOTA: Mantenha um contra-aposição contínuo e estável, evitando compressão excessiva ou deslocamento dos incisivos e tecidos moles adjacentes.
    5. Continue os movimentos de oscilação até que o dente se torne gradualmente móvel e a superfície oclusal fique visivelmente elevada acima dos molares adjacentes. Mantenha as pontas da pinça paralelas ao eixo longo do dente durante todo o procedimento e, em seguida, extraia o dente assim que a mobilidade suficiente for alcançada.
      NOTA: Antes de aplicar a força final de extração, avalie a mobilidade do dente oscilando suavemente a coroa na direção bucal e lingual. Prossiga com a extração apenas quando a coroa puder ser deslocada com resistência mínima e a amplitude do movimento bucal e lingual atinja aproximadamente metade da largura da coroa. Reavalie imediatamente a profundidade da anestesia antes da extração completa. Administre anestesia complementar se necessário (Figura 2).

Comparação das técnicas de extração dentária, diagrama e resultados; métodos convencional e modificado com raízes extraídas.
Figura 2. Comparação dos métodos convencional e modificado de extração do primeiro molar mandibular em camundongos. 
(A) Ilustração esquemática do método convencional de extração, no qual uma agulha curvada de 25 G é inserida no ligamento periodontal e usada como alavanca para luxar o dente. (B) Ilustração esquemática do método modificado de extração, no qual pinças oftálmicas dentadas prendem a coroa e aplicam tração paralela ao eixo longo do dente. (C) Imagem representativa da ponta curvada da agulha de 25 G utilizada como elevador. (D) Imagem representativa das pinças oftálmicas dentadas utilizadas como pinças microcirúrgicas de extração. (E) Imagem intraoperatória representativa mostrando o alvéolo de extração imediatamente após a extração do primeiro molar mandibular; contornos tracejados indicam os alvéolos de extração. (F) Vista bucal de um primeiro molar mandibular extraído com sucesso. (G) Vista lingual do mesmo primeiro molar mandibular extraído. Barras de escala = 2 mm (C,D) e 400 µm (E–G). Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

3. Examinando os dentes extraídos e os alvéolos de extração

  1. Inspecione o dente extraído para confirmar a remoção completa e a integridade estrutural. Confirme que a morfologia da raiz está preservada, com uma raiz mesial mais longa, uma raiz distal mais curta e alargamento apical15. Verifique se não há fragmentos de osso alveolar aderidos ao dente extraído.
  2. Inspecione o alvéolo de extração para confirmar que está limpo e livre de fragmentos residuais de raiz (Figura 2).
    NOTA: Se houver suspeita de raiz retida ou fraturada durante a extração, evite manipulações repetidas, pois tentativas excessivas podem agravar defeitos no alvéolo. Inspecione o local da extração com ampliação para confirmar a presença de fragmentos residuais de raiz. Registre os casos com raízes retidas ou fraturadas como extrações falhadas e exclua-os da avaliação subsequente do modelo. Trate esses animais de acordo com o protocolo animal aprovado.

4. Cuidados pós-operatórios

  1. Aplicar algodão seco para obter hemostasia. Limpar a cavidade oral utilizando uma pequena bola de algodão umedecida com solução salina e, em seguida, reposicionar a língua.
    NOTA: Umedecer a bola de algodão com o volume mínimo de solução salina estéril necessário para umedecer sua superfície, sem produzir líquido livre.
  2. Administrar carprofeno (5 mg/kg, por via subcutânea) após a cirurgia para analgesia pós-operatória.
  3. Colocar o animal sobre uma manta térmica e monitorar continuamente até que recupere a consciência.
  4. Após a recuperação da anestesia, fornecer ração padrão amolecida ou dieta em gel no fundo da gaiola por 3 dias, com água disponível ad libitum. Retomar a dieta com ração padrão após a confirmação do comportamento normal de alimentação.
  5. Monitorar ingestão alimentar, peso corporal, atividade, comportamento de higiene, inchaço facial, sangramento oral e sinais de dor ou desconforto em intervalos predeterminados.

5. Treinamento de operadores

  1. Atribua aleatoriamente dois operadores, nenhum dos quais tenha experiência prévia com modelos de regeneração de tecidos duros em camundongos, ao grupo de extração convencional ou modificado. Treine os operadores separadamente sob a supervisão do mesmo instrutor, que deve ser proficiente nas abordagens de extração convencional e modificada.
  2. Durante a primeira semana, oriente cada operador a praticar o procedimento de extração atribuído em cadáveres de camundongos, a fim de familiarizar-se com o fluxo cirúrgico.
  3. Na segunda semana, supervise o treinamento em camundongos vivos para avaliar e aperfeiçoar a aplicação prática de cada técnica. Monitore cada procedimento para garantir anestesia adequada e prevenir complicações cirúrgicas não intencionais, incluindo lesões acidentais nos tecidos moles adjacentes causadas por manipulação inadequada do instrumento ou danos às estruturas alveolares. Confirme a competência do operador quando este for capaz de realizar independentemente três extrações bem-sucedidas consecutivas. Após concluir o treinamento supervisionado, prossiga para os experimentos comparativos de extração.

6. Preparação do espécime

  1. Eutanasiar os camundongos por dislocação cervical. Dissecar as mandíbulas da cabeça e remover os tecidos moles aderentes.
  2. Fixar as mandíbulas em solução de paraformaldeído 4% por 48 h. Armazenar os espécimes em PBS antes da varredura por µTC.

7. µCT e análises

  1. Digitalize os mandíbulos utilizando um µCT scanner. Defina os parâmetros de varredura para 80 kV, 500 µA, 10 µm resolução do vóxel e varredura camada por camada.
  2. Calibre o µCT sistema utilizando um fantoma de hidroxiapatita. Escaneie o fantoma e exporte as imagens reconstruídas usando o DataViewer.
    1. Analise as imagens do fantoma utilizando o CTAn. Estabeleça uma curva de calibração correlacionando os valores medidos de atenuação de TC dos insertos do fantoma com suas densidades minerais conhecidas, a fim de converter os valores de atenuação em DMO.
    2. Aplique parâmetros idênticos de aquisição e reconstrução a todas as amostras.
    3. Reconstrua todos os conjuntos de dados utilizando o fluxo de trabalho padronizado de reconstrução no CTAn associado ao µCT sistema. Aplique configurações idênticas de reconstrução, definição de ROI e critérios de análise quantitativa a todas as amostras. Realize o reconstrução tridimensional separadamente utilizando o Mimics Research para visualização representativa, seguindo a mesma definição de ROI utilizada na análise quantitativa com o CTAn.
  3. Defina a região de interesse (ROI) selecionando a região apical da raiz do primeiro molar mandibular extraído. Colete 100 cortes transversais consecutivos estendendo-se apicalmente a partir da junção cemento-esmalte do segundo molar adjacente.
    1. Delimite manualmente a ROI em cada corte ao longo da borda do osso alveolar recém-formado ao redor do alvéolo pós-extração. Realize o processamento de imagem subsequente e a análise quantitativa utilizando o CTAn com parâmetros de análise idênticos para todas as amostras.
  4. Realize a reconstrução tridimensional utilizando o Mimics Research. Calcule a incidência de fratura radicular e de defeitos na parede do alvéolo como a proporção de amostras mandibulares que apresentam cada condição em relação ao número total de amostras mandibulares.
  5. Realize todas as análises estatísticas e gere os gráficos utilizando o GraphPad Prism v10.1.2. Avalie a normalidade das variáveis contínuas utilizando o teste de Shapiro–Wilk.
    1. Defina o camundongo individual e seu respectivo alvéolo de extração como unidade experimental para todas as análises.
    2. Compare o tempo de extração, a DMO e a RA/TV entre grupos utilizando um teste t de Student não pareado bicaudal t teste. Compare a incidência de fratura radicular e defeitos da parede do alvéolo utilizando o teste exato de Fisher.
    3. Denote a significância estatística da seguinte forma: *, p < 0.05; **, p < 0,01; e ***, p < 0,001. Utilize "ns" para indicar ausência de diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos.

Resultados

As características anatômicas relevantes para a extração do primeiro molar mandibular são ilustradas na Figura 1, e as abordagens convencional e modificada para extração são mostradas esquematicamente na Figura 2A,B. Imagens representativas da agulha preparada e da pinça oftálmica dentada, dos alvéolos de extração frescos e do primeiro molar mandibular extraído são apresentadas na Figura 2C–G. O fluxo de trabalho procedural completo é resumido na Figura 3. Para comparar a eficiência e a consistência procedural das duas abordagens, dois operadores com experiência equivalente no manejo de camundongos foram aleatoriamente designados para realizar a extração do primeiro molar mandibular utilizando o método convencional ou o modificado. Todos os camundongos tinham 8 semanas de idade e eram machos da linhagem C57BL/6. O tempo de extração e as complicações relacionadas ao procedimento foram registrados imediatamente após a extração, enquanto os alvéolos de extração foram avaliados por µCT após 2 semanas de cicatrização. O tempo de extração foi registrado durante o procedimento e, portanto, não pôde ser avaliado de forma cega; os dentes extraídos e os conjuntos de dados de µCT foram codificados antes da avaliação, de modo que o avaliador permaneceu cego quanto ao método de extração.

Diagrama do processo de extração de dente de camundongo; anestesia, esterilização, extração, cuidados pós-operatórios.
Figura 3. Fluxo de trabalho dos procedimentos convencional e modificado de extração do primeiro molar mandibular murino. 
O fluxo de trabalho inicia-se com a preparação dos instrumentos, anestesia, desinfecção e esterilização, e fixação do camundongo. O protocolo então se divide nas abordagens convencional e modificada de extração. A abordagem convencional inclui a eliminação sequencial da resistência distal e mesial antes da extração do dente, enquanto a abordagem modificada inclui o pré-alargamento opcional do ligamento periodontal seguido por movimentos de balanceamento e extração do dente utilizando pinças oftálmicas denteadas. Ambas as abordagens concluem-se com a análise do dente extraído e do alvéolo dentário, seguida pelos cuidados pós-operatórios. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Imagens representativas de µTC obtidas imediatamente após a extração e após 2 semanas de cicatrização são mostradas na Figura 4A–D. A abordagem modificada reduziu significativamente o tempo médio de extração em comparação com a abordagem convencional (10 min vs. 29 min, p = 0,0006; Figura 4E). Fratura radicular ocorreu em 2/6 camundongos (33,3%) no grupo modificado e em 4/6 camundongos (66,7%) no grupo convencional, sem diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p = 0,5455; Figura 4F). Defeitos na parede do alvéolo foram observados em 0/6 camundongos no grupo modificado e em 4/6 camundongos (66,7%) no grupo convencional; essa diferença não foi estatisticamente significativa (p = 0,0606; Figura 4G). Após 2 semanas de cicatrização, a análise por µTC mostrou valores significativamente maiores de DMO e BV/TV no grupo modificado em comparação com o grupo convencional (p = 0,0188 e p = 0,0253, respectivamente; Figura 4H,I). Esses resultados demonstram tempos de extração mais curtos com a abordagem modificada e sugerem maior consistência na extração nas condições experimentais testadas.

Imagem odontológica e análise com seções histológicas e gráficos de barras comparando os métodos convencional (Conv) e modificado (Mod), mostrando os resultados de tempo de extração, incidência de fratura e densidade óssea.
Figura 4. Comparação das abordagens convencional e modificada para extração do primeiro molar mandibular murino e da cicatrização subsequente do alvéolo dentário. 
(A–D) Tomografia computadorizada micro-representativa (µCT) imagens dos alvéolos de extração imediatamente após a extração (A,B) e 2 semanas após a extração (C,D) utilizando a abordagem convencional (A,C) ou modificada (B,D). Os painéis 1–3 mostram as vistas sagital, coronal e transversal, respectivamente, e o painel 4 mostra a reconstrução tridimensional correspondente. Linhas tracejadas vermelhas delimitam os contornos originais da raiz. Linhas tracejadas brancas e setas vermelhas indicam defeitos na parede do alvéolo. Linhas contínuas laranja em A1, B1, C1 e D1 indicam as posições correspondentes das vistas em corte transversal. Linhas tracejadas azuis em C1, C2, D1 e D2 indicam a extensão do osso recém-formado dentro do alvéolo de extração. O osso recém-formado é destacado em vermelho nas reconstruções tridimensionais (C4,D4). (E–I) Comparação quantitativa do desempenho da extração e da cicatrização inicial do alvéolo, incluindo tempo de extração (E), incidência de fratura radicular (F), incidência de defeitos na parede do alvéolo (G), densidade mineral óssea (BMD; H) e fração de volume ósseo/volume tecidual (BV/TV; I). Para os resultados do procedimento (E–G), n = 6 camundongos por grupo; para µCT análise da cicatrização do alvéolo (H,I), n = 3 camundongos por grupo. O camundongo individual e o respectivo alvéolo de extração foram considerados a unidade experimental. Os resultados contínuos em E, H e I são apresentados como média ± DP e foram comparados utilizando um teste t de Student não pareado bicaudal t teste. Os resultados categóricos em F e G são apresentados como contagens brutas e porcentagens e foram comparados utilizando o teste exato de Fisher. Fratura radicular ocorreu em 4/6 camundongos (66,7%) no grupo convencional e em 2/6 camundongos (33,3%) no grupo modificado. Defeitos na parede do alvéolo ocorreram em 4/6 camundongos (66,7%) no grupo convencional e em 0/6 camundongos no grupo modificado. Significância estatística: *, p < 0.05; ***, p < 0.001. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

A extração bem-sucedida foi definida como a remoção completa do primeiro molar mandibular sem fragmentos residuais de raiz, preservando ao mesmo tempo a arquitetura do alvéolo ósseo para avaliação subsequente da cicatrização, conforme ilustrado na Figura 4A–D. Considerou-se a extração mal-sucedida quando a remoção incompleta do dente ou danos relacionados ao procedimento comprometeram a avaliação subsequente da cicatrização do alvéolo. Resultados representativos de falhas são mostrados na Figura 5A–F. A fratura da coroa é mostrada na Figura 5A, a fratura da raiz distal na Figura 5B e um defeito na raiz mesial na Figura 5C. Fragmentos residuais de raiz e fratura da ponta da raiz são mostrados na Figura 5D,E, respectivamente. Danos estruturais na região do canal do nervo alveolar inferior são mostrados na Figura 5F. Esses resultados insatisfatórios estiveram associados ao controle inadequado do ângulo ou profundidade da inserção da agulha, trajetórias de extração inadequadas, aplicação excessiva de força ou manipulação excessiva. A inclusão de resultados tanto bem-sucedidos quanto subótimos demonstra a variedade de resultados que podem ocorrer durante a implementação do protocolo e fornece critérios para interpretar o sucesso e a falha na extração.

Análise de fratura dentária, tomografia computadorizada, diagrama mostrando lesões na raiz e na coroa, avaliação de danos estruturais.
Figura 5. Exemplos representativos de extrações fracassadas do primeiro molar mandibular em camundongos. 
(A–F) Imagens de µCT representativas e reconstruções tridimensionais ilustrando complicações comuns relacionadas à extração. (A) Fratura da coroa. (B) Fratura da raiz distal. (C) Defeito da raiz mesial. (D) Fragmento radicular residual. (E) Fratura da ponta da raiz. (F) Danos às estruturas anatômicas circundantes. Linhas tracejadas vermelhas delimitam os contornos originais da raiz. Linhas tracejadas brancas delimitam defeitos ósseos ou estruturas anatômicas adjacentes. Setas vermelhas indicam os locais de lesão ou fragmentos radiculares retidos. Raízes fraturadas e dentes adjacentes são destacados em vermelho nas reconstruções tridimensionais mostradas nos painéis A, B, D e E. Os painéis C e F incluem vistas representativas em corte transversal das reconstruções tridimensionais. Todos os espécimes foram coletados 2 semanas após a extração dentária. Barras de escala = 200 µm. Abreviação: µCT, tomografia computadorizada microscópica. Clique aqui para visualizar uma versão maior desta figura.

Discussão

O estabelecimento bem-sucedido do MSTM exige a remoção completa do dente preservando a arquitetura alveolar circundante, pois lesões relacionadas à extração podem comprometer a regeneração óssea subsequente16. Portanto, a reprodutibilidade do procedimento de extração representa um determinante crítico da confiabilidade do modelo17. Neste estudo, uma abordagem modificada para extração do primeiro molar mandibular com pinça foi comparada sistematicamente com uma técnica convencional baseada em alavanca, sob condições padronizadas de treinamento. O método modificado demonstrou maior eficiência e reprodutibilidade procedural, evidenciada por um tempo de extração significativamente menor e menos complicações relacionadas à extração. Especificamente, após o mesmo período de treinamento de duas semanas, o tempo médio de extração reduziu-se de 29 min com a abordagem convencional para 10 min com a abordagem modificada. Além disso, nenhuma deficiência na parede do alvéolo dentário foi observada no grupo modificado, enquanto essa complicação ocorreu frequentemente no grupo convencional. Embora a incidência de fratura radicular não tenha diferido significativamente entre os grupos, a frequência menor observada com o método modificado sugere maior consistência procedural nas condições experimentais atuais. Adicionalmente, uma melhor preservação da arquitetura do alvéolo de extração esteve associada a uma cicatrização óssea inicial aprimorada após duas semanas. Em conjunto, esses achados indicam que a técnica modificada pode reduzir a variabilidade dependente do operador durante o estabelecimento do modelo.

A inspeção direta do dente extraído e do alvéolo é suficiente para a identificação rotineira de fraturas radiculares evidentes e defeitos alveolares graves. Neste estudo comparativo, a microtomografia computadorizada (µCT) foi utilizada como ferramenta objetiva de validação para identificar fragmentos radiculares retidos e defeitos sutis nas paredes do alvéolo, além de quantificar os resultados precoces da cicatrização alveolar. O desempenho aprimorado da abordagem modificada pode ser atribuído às diferenças na estratégia mecânica utilizada para a extração dentária. As técnicas convencionais de extração dos molares mandibulares murinos geralmente dependem de procedimentos de licação13,18, nos quais a força mecânica é introduzida por meio de instrumentos inseridos ao redor do molar e aplicada gradualmente para mobilizar o dente. No entanto, devido à morfologia alargada da raiz apical dos primeiros molares mandibulares murinos e à acessibilidade cirúrgica limitada9, tais procedimentos podem gerar estresse mecânico localizado no local de inserção e nas estruturas alveolares circundantes. Em contraste, a abordagem modificada transfere o ponto principal de aplicação de força da região radicular para a coroa, que é mais estável. Ao aplicar tração controlada paralelamente ao eixo longo do dente enquanto simultaneamente se estabiliza a mandíbula, essa estratégia pode facilitar a expansão gradual do alvéolo de extração e reduzir a concentração de estresse descontrolada. Importante ressaltar que essa modificação também simplifica a etapa principal de controle da força durante a extração, potencialmente reduzindo a barreira técnica para pesquisadores com pouca experiência em microcirurgia.

Apesar dessas vantagens, várias considerações técnicas permanecem importantes para a implementação bem-sucedida deste protocolo, pois o resultado ainda depende da técnica do operador. Primeiro, mantenha a direção da força aplicada paralela ao eixo longo do dente para melhorar a fixação da coroa e minimizar a concentração desnecessária de tensão e a fratura radicular associada à aplicação de força fora do eixo. Segundo, evite a profundidade excessiva de inserção da pinça dentada ou manipulação excessiva, pois qualquer uma dessas ações pode comprometer a integridade do alvéolo de extração. Terceiro, durante a etapa opcional de pré-alongamento do ligamento periodontal, insira a agulha paralelamente ao eixo longo da raiz do dente para minimizar lesões no osso alveolar circundante, conforme relatado anteriormente pelos autores13. Portanto, embora a abordagem modificada melhore a acessibilidade do procedimento, treinamento adequado e manipulação padronizada permanecem essenciais para obter resultados consistentes.

Várias limitações devem ser consideradas ao interpretar esses resultados. Primeiro, o tamanho da amostra para a avaliação por µCT foi relativamente pequeno. Portanto, as diferenças observadas na cicatrização óssea precoce devem ser interpretadas como evidência de apoio ao aprimoramento do estabelecimento do modelo, e não como evidência definitiva de uma cicatrização melhorada. Segundo, apenas dois operadores foram incluídos neste estudo. Consequentemente, a avaliação da variabilidade entre operadores foi limitada e pode ter introduzido um viés relacionado ao operador. Terceiro, o protocolo foi validado apenas nos primeiros molares mandibulares direitos de camundongos machos com oito semanas de idade. Não foram realizadas comparações quantitativas do sucesso da extração, complicações relacionadas ao procedimento e cicatrização do alvéolo em diferentes grupos etários. Assim, se as vantagens observadas podem ser generalizadas para animais de diferentes idades ou sexos requer investigação adicional.

Em resumo, este estudo apresenta uma abordagem otimizada para a extração do primeiro molar mandibular de camundongos e valida seu desempenho por meio de comparação direta com a técnica convencional. O método modificado facilita o estabelecimento mais reprodutível de modelos murinos de cicatrização da alvéolo dentário mandibular, ao mesmo tempo que reduz a barreira técnica inicial para iniciantes. Esses achados fornecem orientações práticas para pesquisadores que estabelecem modelos de cicatrização do alvéolo dentário mandibular.

Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi financiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (número do convênio 82571084) e pelo Programa de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (número do convênio 2024JDKXJ0001).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Agulhas descartáveis de seringa 25 GBeyotimeFS802-30pcsAgulhas descartáveis de seringa utilizadas para o afastador bucal e opcionalmente para o pré-alargamento do ligamento periodontal
Solução de paraformaldeído a 4%SolarbioP1110Solução de paraformaldeído a 4% utilizada para fixação de espécimes
Etanol a 75%Ouse Medical Devices StoreN/AEtanol grau médico a 75% utilizado para desinfecção da superfície
Camundongos C57BL/6Charles River213Camundongos machos C57BL/6 com 8 semanas de idade pesando entre 22–29 g
CarprofenoSolarbioC5350Analgésico pós-operatório administrado por via subcutânea em dose de 5 mg/kg
Bolas de algodãoOuning Medical DevicesN/ABolas de algodão estéreis utilizadas para limpeza bucal e hemostasia
CTAn v1.18.4.0+SkyScanN/ASoftware utilizado para análise de imagens de μTC
DataViewer v1.5.6.2SkyScanN/ASoftware utilizado para visualização e exportação de imagens de μTC reconstruídas
Protetores digitaisLeSu OfficeMEKU-1/2/3BProtetores digitais utilizados para proteção do polegar durante a extração
Placa de espumaDongguan Lijianglong Industrial Co., Ltd.N/APlaca de espuma utilizada como plataforma cirúrgica e de fixação
Dieta em gelReadyDietechJ10001Dieta pós-operatória fornecida no fundo da gaiola por 3 dias, quando utilizada
GraphPad Prism v10.1.2GraphPadRRID: SCR_002798Software utilizado para análise estatística e geração de gráficos
Lâmpada de cabeçaBazhou Pengen Protective Equipment FactoryN/ALâmpada de cabeça utilizada para iluminar o campo cirúrgico
Manta térmicaShijiazhuang Jianuan Electrical Appliances Co., Ltd.N/AManta térmica pré-aquecida a aproximadamente 38 °C para recuperação pós-operatória
Fantoma de hidroxiapatitaQRMQRM-70127Fantoma de calibração utilizado para converter valores de atenuação de TC em densidade mineral óssea
Dispositivo de ampliaçãoOlympus CorporationSZX10Dispositivo utilizado para inspecionar as pontas da pinça dentada e o alvéolo de extração com ampliação
MáscaraSenlun Medical Devices Specialty StoreN/AMáscara cirúrgica
Scanner de microtomografia computadorizadaBruker SkyScanSkyScan 1276Scanner de μTC utilizado com 80 kV, 500 μA e resolução de vóxel de 10 μm
Mimics Research v21.0MaterialiseRRID: SCR_015802Software utilizado para reconstrução tridimensional
Pentobarbital de sódioSigma-AldrichP3761Salm de pentobarbital de sódio utilizado como solução anestésica a 1%
Solução salina tamponada com fosfatoSolarbioP1010Pó de solução salina tamponada com fosfato 0,01 M, pH 7,2–7,4
Solução antisséptica de poviodona-iodoBelkon Pharmacy Flagship StoreN/ASolução de poviodona-iodo utilizada para desinfecção abdominal
ElásticosFoshan Puli Rubber Products FactoryN/AElásticos utilizados para montar o afastador bucal
Solução salinaThermo FisherBR0053GComprimidos salinos utilizados para preparar a solução para limpeza bucal
Dieta padrão em raçãoJiangsu Xietong Pharmaceutical and Biotechnology Engineering Co., Ltd.XTC01WC-001Ração padrão utilizada para hospedagem rotineira e amolecida para alimentação pós-operatória
Esterilizador a vaporInstalação institucionalN/AEquipamento utilizado para esterilizar as pinças dentadas e a solução salina
Hastes flexíveis estéreisKangbailai Medical Devices StoreN/AHastes flexíveis estéreis de uso único
Luvas estéreisSenlun Medical Devices Specialty StoreN/ALuvas estéreis de látex
Tecido não tecido estérilShandong Xinhua Infection Control Supplies Hangzhou StoreN/ATecido não tecido estéril utilizado para cobrir a superfície cirúrgica e a manta térmica
Capote cirúrgico estérilSenlun Medical Devices Specialty StoreN/ACapote cirúrgico estéril
Trajes cirúrgicosSenlun Medical Devices Specialty StoreN/ATrajes cirúrgicos limpos usados durante o procedimento
Fita adesivaThermo Fisher15947Fita adesiva utilizada para fixar as patas do camundongo
Pinça oftálmica dentadaBeyotimeFS229Pinça oftálmica dentada utilizada como pinça dental
Pomada oftálmica veterináriaDechra Veterinary Products143-16Pomada oftálmica aplicada após anestesia para prevenir a dessecação da córnea

Referências

  1. Chavez MB, et al. Bone sialoprotein is critical for alveolar bone healing in mice. J Dent Res. 2023;102(2):187-196.
  2. Guan B, Liu L, Liu Y. Application and characterisation of four genetically engineered animal models (mouse/zebrafish/rhesus monkey/drosophila) in acute myeloid leukemia. Gene. 2025;963:149607.
  3. Varshney GK, Burgess SM. Crispr-based functional genomics tools in vertebrate models. Exp Mol Med. 2025;57(7):1355-1372.
  4. Phanrungsuwan A, Donnelly B, Millán JL, Foster BL. Targeted alkaline phosphatase therapy enhances alveolar bone healing in X-linked hypophosphatemia in mice. J Periodontal Res. 2026;61(3):309-322. doi:10.1111/jre.70044.
  5. Mohamed FF, et al. Dentoalveolar defects and impaired alveolar bone healing in a neural crest-directed conditional knockout mouse model of hypophosphatasia. Bone. 2025;198:117538.
  6. Oka H, et al. Subset of the periodontal ligament expressing leptin receptor contributes to part of hard tissue-forming cells. Sci Rep. 2023;13(1):3442.
  7. Chen S, Rittel D, Shemtov Yona K. The normal stiffness of the edentulous alveolar process. Bone Rep. 2021;14:101066.
  8. Lungová V, et al. Tooth-bone morphogenesis during postnatal stages of mouse first molar development. J Anat. 2011;218(6):699-716.
  9. Iwama H, et al. Acellular extrinsic fiber cementum is invariably present in the superficial layer of apical cementum in mouse molar. J Histochem Cytochem. 2024;72(2):109-120.
  10. Hadad H, et al. Rodents as an animal model for studying tooth extraction-related medication-related osteonecrosis of the jaw: Assessment of outcomes. Arch Oral Biol. 2024;159:105875.
  11. Mouraret S, et al. A pre-clinical murine model of oral implant osseointegration. Bone. 2014;58:177-184.
  12. Yu F, Liu L, Xia L, Fang B. Establishment of a C57BL/6 mandibular critical-size bone defect model. J Craniofac Surg. 2021;32(7):2562-2565.
  13. Yu C, Yu F, Li F, Ye L. The establishment of a murine mandibular molar extraction socket healing model. J Vis Exp. 2023;(191). doi:10.3791/64855.
  14. University of Michigan Unit for Laboratory Animal Medicine. Guidelines on anesthesia and analgesia in mice. Updated January 23, 2026. Available at: https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice/. Accessed August 5, 2026.
  15. Qiu Y, et al. Investigation of the furcation morphology of permanent mandibular first molars by using micro-computed tomography. BMC Oral Health. 2024;24(1):1150.
  16. Vieira AE, et al. Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: Micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization. PLoS One. 2015;10(5):e0128021.
  17. Jiang J, Mou J, Wang S, Liu J. Protocol for establishing a mouse model of bilateral maxillary first molar extraction to study alveolar bone healing. STAR Protoc. 2026;7(1):104366.
  18. Liang B, Zhang W, Xue Y. Observation and analysis of tooth extraction wound healing process of maxillary first molars in C57BL/6 mice. Chin J Pract Stomatol. 2019;12(232):e6.

Reimpressões e permissões

Etiquetas

Extra o Dent ria MandibularModelo MurinoRegenera o sseaConsist ncia da Extra oMicrotomografia ComputadorizadaFratura do Osso AlveolarComplica es da Extra oArquitetura do Alv olo

Este artigo foi publicado

Vídeo em breve

Fale conosco
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de Uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.