Este estudo laboratorial foi aprovado pelo comitê de ética institucional da Universidade de Saúde e Tecnologia Kocaeli (número de aprovação 31/22) e foi conduzido de acordo com os princípios éticos descritos na Declaração de Helsinque e nas diretrizes PRILE 202128 (Arquivo Suplementar 1 e Arquivo Suplementar 2). O consentimento informado para o uso dos dentes extraídos foi obtido dos doadores. O modelo de espécime, o preparo do sulco e a pontuação seguiram um protocolo descrito8. Todos os materiais, instrumentos e softwares utilizados neste protocolo estão listados na Tabela de Materiais.
Cálculo do tamanho da amostra
O tamanho da amostra foi baseado em uma investigação anterior que utilizou o mesmo modelo de ranhura artificial e sistema de pontuação26. Nesse estudo, uma análise de poder a priori (tamanho do efeito = 0,6, α = 0,05, poder = 0,95) indicou n = 12/cada grupo, que os autores aumentaram para 15 para compensar possíveis perdas. Para aumentar a precisão, o presente estudo utilizou n = 20/cada grupo, totalizando 400 ranhuras. Este cálculo levou em conta o efeito principal da técnica de remoção; nenhuma análise a priori separada foi realizada para a interação técnica × selador. Uma análise de sensibilidade post hoc baseada na distribuição qui-quadrado da estatística de Scheirer-Ray-Hare (statsmodels 0.14.6) mostrou que as 200 ranhuras analisadas em cada região proporcionaram 80% de poder (α = 0,05) para detectar uma interação com tamanho do efeito w = 0,24 (4 graus de liberdade) e um efeito principal do selador de w = 0,20 (1 grau de liberdade), de modo que efeitos menores que esses, abaixo do tamanho médio de efeito de Cohen de w = 0,3, podem ter escapado à detecção.
Critérios de seleção da amostra
Duzentos incisivos centrais superiores humanos extraídos foram utilizados. Após a extração, os dentes foram desinfetados em NaOCl a 2%, enxaguados com água destilada e armazenados em solução de timol até o uso. Foram incluídos dentes com um canal radicular único e retilíneo e ápice intacto, sendo confirmado radiograficamente um único canal. Foram excluídos dentes com curvatura, calcificação, tratamento prévio, reabsorção ou tamanho apical inicial igual ou superior a #30. As coroas foram seccionadas em um comprimento padrão, com um comprimento de trabalho de 18 mm. A randomização foi realizada em duas etapas, utilizando um gerador online de sequência aleatória (random.org): os 200 dentes foram inicialmente alocados aos dois cimentos obturadores (n = 100 cada), e os dentes de cada cimento foram então alocados às cinco técnicas de remoção (n = 20/cada grupo), de modo que a alocação fosse estratificada por cimento. As sequências aleatórias foram geradas e aplicadas por um pesquisador que não realizou a avaliação, e os espécimes foram identificados com códigos para manter os observadores cegos tanto ao cimento quanto à técnica de remoção.
ATENÇÃO: Dentes humanos extraídos representam um potencial risco biológico. Manipule todas as amostras com equipamento de proteção individual apropriado, incluindo luvas, máscara e proteção ocular.
Preparação da amostra
Após a patência ser confirmada com um arquivo K tamanho ISO 10, os canais foram alargados para o tamanho 40/0,04 no comprimento de trabalho utilizando um sistema rotatório de instrumentação endodôntica sob irrigação com hipoclorito de sódio a 3% (NaOCl), seguido por uma lavagem com 5 mL de NaOCl a 3% e 5 mL de ácido etilenodiaminotetraacético (EDTA) a 17%. Todas as soluções de NaOCl foram preparadas a partir de uma solução estoque a 5,25% por diluição com água destilada: NaOCl a 3% pela mistura de NaOCl a 5,25% e água destilada numa proporção volumétrica de 4:3 (por exemplo, 100 mL de NaOCl a 5,25% e 75 mL de água destilada), e NaOCl a 5% numa proporção volumétrica de 20:1 (por exemplo, 100 mL de NaOCl a 5,25% e 5 mL de água destilada).
ATENÇÃO: O hipoclorito de sódio é corrosivo para a pele, olhos e membranas mucosas. Prepare e manipule todas as soluções com luvas e proteção ocular, e evite a extrusão além do forame apical.
As raízes foram embutidas em material de impressão dentro de tubos de centrífuga e divididas longitudinalmente com um disco de diamante, sem penetrar no espaço do canal. Qualquer raiz na qual o espaço do canal fosse penetrado durante a divisão deveria ser excluída e substituída por um dente preparado da mesma forma; nenhuma raiz atendeu a esse critério na presente série. Dois sulcos artificiais, com 4 mm de comprimento, 0,2 mm de largura e 0,5 mm de profundidade, foram feitos na parede do canal com uma ponteira de profilaxia montada em uma unidade endodôntica ultrassônica piezoelétrica a 40% da potência, sob microscópio cirúrgico odontológico com ampliação de ×20. Os sulcos foram preparados em paredes opostas do canal, a 2 a 6 mm e 10 a 14 mm do ápice (Figura 1). Após a preparação dos sulcos, a camada de smear foi removida utilizando 2 mL de EDTA a 17%.
As ranhuras de 100 dentes foram preenchidas com CeraSeal e as dos 100 dentes restantes com BioRoot Flow, utilizando pontas de guta-percha. O preenchimento completo das ranhuras foi confirmado sob microscópio operatório odontológico com ampliação de ×20. As metades das raízes foram novamente unidas dentro de tubos Eppendorf, a cavidade de acesso foi selada com um material de obturação temporária, o forame apical e as superfícies radiculares foram cobertos com cera e os espécimes foram mantidos a 37 °C e umidade de 100% por 30 dias. A pega do cimento foi então verificada sob microscópio operatório odontológico com ampliação de ×20.
Procedimentos de remoção
Espécimes para cada selador foram atribuídos a cinco técnicas de remoção (n = 20 por grupo), sendo o SNI o controle não ativado. Os grupos SNI, PUI, R-SWEEPS e Er,Cr:YSGG compartilharam um mesmo protocolo de irrigação composto por seis ciclos de entrega-ativação, sendo três com NaOCl a 5% seguidos por três com EDTA a 17%. Em cada ciclo, 5 mL de irrigante foram administrados durante 150 s a 2 mL/min com uma bomba de irrigação, e o irrigante preenchendo o canal foi então ativado por 20 s com a técnica em teste. Os três ciclos com NaOCl foram concluídos antes dos três ciclos com EDTA, de modo que cada espécime recebeu 15 mL de NaOCl a 5% e 15 mL de EDTA a 17% (30 mL no total) e seis ativações de 20 s (três por irrigante, 120 s no total). O tempo de tratamento nos três grupos ativados foi, portanto, aproximadamente 17 min (6 × 150 s de administração mais 6 × 20 s de ativação).
No grupo SNI, os irrigantes foram administrados por meio de uma agulha de 30 G posicionada a 2 mm da extensão de trabalho, sem ativação; este grupo recebeu os mesmos volumes, fluxo e sequência de irrigantes que os grupos com ativação, mas sem intervalo de espera entre as administrações no lugar dos períodos de ativação, de modo que o tempo total de exposição foi de aproximadamente 15 min (6 × 150 s).
No grupo PUI, o irrigante foi ativado utilizando uma ponteira IrriSafe tamanho 20 acoplada à unidade endodôntica ultrassônica piezoelétrica a 40% da potência, com a ponteira posicionada a 2 mm do comprimento de trabalho, durante três ciclos de 20 s por irrigante.
No grupo R-SWEEPS, o irrigante foi ativado com um laser Er:YAG de 2940 nm no modo R-SWEEPS, utilizando uma ponta radial (diâmetro de 400 µm, comprimento de 14 mm) mantida na orifício do canal, sem penetrar no canal, por três ciclos de 20 s por irrigante, com o spray de ar e água desligados. Nesse modo, cada pulso de 15 mJ é entregue como um dos pares sincronizados com uma taxa de repetição de pares de pulsos de 15 Hz (30 mJ por par), resultando em uma potência média de 0,45 W, 9 J por ativação de 20 s e 54 J por espécime; a energia do pulso corresponde a uma densidade de energia de 11,9 J/cm2 na extremidade da ponta de 400 µm.
No grupo Er,Cr:YSGG, o irrigante foi ativado com um laser Er,Cr:YSGG de 2780 nm no modo H (25 mJ por pulso, 50 Hz, 1,25 W; 25 J por ativação de 20 s e 150 J por espécime) utilizando uma ponteira radial RFT2 posicionada a 2 mm do comprimento de trabalho, por três ciclos de 20 s por irrigante, com o spray de ar e água desligados. Em ambos os grupos com laser, o canal foi preenchido com o irrigante fornecido pela bomba antes da ativação do laser, e os parâmetros utilizados foram as configurações pré-definidas pelo fabricante para ativação de irrigante endodôntico, aplicadas sem modificações. Tabela 1 apresenta os parâmetros completos de irradiação, incluindo a energia por pulso, a densidade de energia e a energia total entregue.
No grupo GentleWave G4, o espécime remontado foi mantido no tubo de centrífuga, uma plataforma foi construída sobre a extremidade coronal da raiz com a resina SoundSeal do fabricante para criar um selamento hermético entre o instrumento de irrigação endodôntica e a abertura do canal, e o ciclo automatizado do sistema GentleWave G4 com software ProControl foi executado com os fluidos de procedimento do fabricante na seguinte sequência: NaOCl a 3% por 5 min, água destilada por 30 s, EDTA a 8% por 2 min e uma irrigação final com água destilada por 30 s (aproximadamente 8 min no total). O instrumento de procedimento foi mantido no lugar pela plataforma durante todo o ciclo. As concentrações de irrigantes, as taxas de fluxo, a desgaseificação e os tempos de ciclo são pré-definidos pelo fabricante e não podem ser modificados pelo operador, de modo que este grupo diferiu dos outros quatro grupos quanto à concentração de irrigante, volume e tempo de tratamento (ver seção de Discussão).
Avaliação do selador residual
As metades da raiz foram separadas e examinadas sob microscópio operatório odontológico com aumento de ×20. O selante residual em cada sulco foi pontuado em uma escala de quatro pontos29: 0, ausência de selante no sulco; 1, selante em menos da metade; 2, selante em mais da metade; e 3, sulco completamente preenchido. Dois observadores calibrados, cegos quanto ao tipo de selante e à técnica de remoção, pontuaram os sulcos de forma independente; a concordância entre observadores foi κ = 0,92 (kappa de Cohen). Os desacordos foram resolvidos por consenso.
Análise estatística
Os dados foram analisados utilizando Python 3.9.6 com as bibliotecas SciPy 1.13.1, statsmodels 0.14.6 e scikit-posthocs 0.14.0. Os sulcos apicais e coroais foram analisados separadamente. Os escores de selante residual entre os 10 grupos foram comparados utilizando o teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn com correção de Bonferroni. O epsilon-ao-quadrado foi calculado como tamanho do efeito. Os efeitos do selante e da técnica de remoção, juntamente com sua interação, foram examinados utilizando o teste de Scheirer-Ray-Hare. Dentro de cada técnica de remoção, os dois selantes foram comparados utilizando o teste U de Mann-Whitney com correção de Bonferroni, e o delta de Cliff com intervalos de confiança de 95% baseados em reamostragem foi relatado como tamanho do efeito. O nível de significância foi estabelecido em 5%.