O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em <a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">protocolos atuais em biologia celular</a> .

Os autores não têm nada a declarar.

obtenção de ovos de xenopus laevis fêmeas

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

Os ovos de Xenopus laevis intacta, lisadas, e / ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo mostra como induzir a postura de ovos, coletar e dejelly os ovos, e classificar os ovos para remover quaisquer ovos danificados.

Obtenção de ovos de Xenopus laevis fêmeas

Os ovócitos de Xenopus laevis intactos, lisados e/ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo demonstra como induzir a postura de ovos, ...

Extratos de ovos de Xip Labis são úteis como fontes de material citoplasmático e de organelas para a reconstituição in vitro de eventos celulares, como montagem do núcleo e importação de proteínas nucleares. É claro que, antes de poder usar extratos de ovos, é necessário obter os ovos de rãs fêmeas. Olá, meu nome é Marie Cross e sou aluna de pós-graduação no laboratório da Dra. Maureen Power, do Departamento de Biologia Celular da Universidade Emory, em Atlanta, Geórgia.Hoje vamos mostrar como obter ovos de ágar-ágar D de fêmeas adultas de opus lavis. Este procedimento inclui os seguintes passos: preparo dos sapos para a postura de ovos com soro de gonadotrofina de rã prenhe, indução da postura de ovos com gonadotrofina coriônica humana e seleção de ovos ou cistos defeituosos. Então, vamos começar.Para produzir ovos, rãs fêmeas maduras são primeiramente sensibilizadas com gonadotrofina de soro de égua prenhe. Para iniciar o procedimento de sensibilização, prepare um tanque contendo cloreto de sódio de cem milimolares para acomodar as rãs. Após a injeção, as rãs sensibilizadas devem ser mantidas numa densidade de aproximadamente uma rã por litro.A produção ideal de ovos é mantida mantendo-se os sapos a 18 graus Celsius. Usando uma agulha de 27 gauge acoplada a uma seringa de um mil, injete 0,5 mils de 200 unidades por mil de gonadotropina de soro de égua prenhe no saco linfático dorsal do sapo por via subcutânea.Retorne os sapos maduros ao tanque contendo cloreto de sódio de cem milimolares. Após dois a três dias, induza a postura de ovos injetando nos sapos 0,5 mililitros de cem unidades por mililitro de gonadotrofina coriônica humana, novamente por via subcutânea no saco linfático dorsal.Após a injeção, coloque cada sapo em cinco litros de cloreto de sódio de cem milimolares. É melhor colocar cada sapo em um recipiente separado, pois a qualidade dos ovos varia de sapo para sapo. Cerca de 16 a 22 horas após a injeção de gonadotrofina coriônica humana, remova o sapo para um tanque com água limpa e despeje os ovos em um béquer.É aconselhável observar os sapos por um a dois dias em busca de sinais de infecção no local da injeção. Nesta fase, um revestimento gelatinoso transparente envolve cada ovo, o que impede que eles entrem em contato uns com os outros. Para remover a geleia dos ovos, lave os ovos uma vez com solução de L-cisteína a 2%, pH 8,0, e continue então a incubação em um recipiente com 100 mL de solução de L-cisteína a 2% por sapo durante aproximadamente cinco minutos. À temperatura ambiente, agite suavemente os ovos periodicamente após cinco minutos.Despeje a solução de cisteína dos ovos de deje e lave-os três vezes em uma solução de Ringer modificada 0,25 x. Para remover detritos, despeje os ovos em uma placa de Petri de vidro de cem milímetros, trabalhando sob um microscópio estereoscópico. Remova os ovos estragados da placa de Petri com uma pipeta de Pasteur.Os óvulos maduros de xip possuem uma metade superior fortemente pigmentada e uma metade inferior clara. Um pequeno ponto branco, indicativo da maturação do oócito, deve ser visível no centro da metade fortemente pigmentada do óvulo maduro. Um bom óvulo é aquele que apresenta pigmentação uniforme e bem modelada.Tudo o que não tiver essa mancha branca é um ovócito e deve ser removido. Quaisquer ovos que estejam brancos, aumentados ou com pigmentação não uniforme também devem ser removidos. Um ovo particularmente ruim apresenta-se como uma bolinha branca e esbranquiçada, com o limite entre os hemisférios completamente obscurecido. Lave e selecione os ovos duas a três vezes, despejando o tampão de lise de ovos sobre eles e, em seguida, derramando cuidadosamente o tampão, minimizando o número de ovos que são derramados.Agora os ovos podem ser lisados e os extratos podem ser preparados. Acabamos de mostrar como obter e remover o gel dos ovos de fêmeas maduras de Xenopus laevis. Certifique-se de assistir aos nossos outros dois vídeos, que mostram como preparar extratos de ovos brutos, bem como como reconstituir in vitro a montagem nuclear utilizando extratos de ovos fracionados.Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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Emory University.  Os ovos de Xenopus laevis intacta, lisadas, e / ou fracionados são úteis para uma ampla variedade de experimentos. Este protocolo mostra como induzir a postura de ovos, coletar e dejelly os ovos, e classificar os ovos para remover quaisquer ovos danificados.

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