Este vídeo mostra como usar um extrator programáveis para fazer pipetas patch e eletrodos afiada para eletrofisiologia. O mesmo procedimento pode ser usado para fazer uma variedade de ferramentas de vidro, inclusive agulhas de injeção.
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Artigo de método
Tornando-Patch pipetas e Eletrodos Sharp com um extrator programável
Neste artigo
Resumo
Resumo
Microeletrodos de vidro (também chamado de pipetas) ter sido um cavalo de batalha da eletrofisiologia por décadas. Hoje, pipetas, tais são feitas de vidro capilares usando um extrator programável. Calor tais instrumentos do capilar usando um filamento de metal ou de um laser e tirar o vidro usando a gravidade, um motor ou ambos. Pipetas para patch-clamp de gravação são formadas utilizando apenas o calor ea gravidade, enquanto eletrodos afiados para a gravação intracelular usar uma combinação de calor, gravidade, e um motor. O procedimento usado para fazer gravação de pipetas intracelular é semelhante ao usado para fazer agulhas de injeção para uma variedade de aplicações, incluindo cRNA injeção em oócitos Xenopus. Em vidro, em geral capilar <1,2 mm de diâmetro é usado para fazer pipetas para gravação de patch clamp, enquanto estreito de vidro é usado para a gravação intracelular (diâmetro externo = 1,0 mm). Para cada ferramenta, o extrator é programado de forma ligeiramente diferente. Este vídeo mostra como fazer os dois tipos de pipetas de gravação usando programas pré-estabelecidos extrator.
Protocolo
Pipetas puxando
Utilizando um extrator de microeletrodos como o Sutter P-97 Flaming / Brown, puxe um conjunto de aproximadamente 10-20 pipetas.
- Selecione seu vidro capilar. Usamos borosilicato capilares (Sutter BF150-110-10, diâmetro externo 1,5 mm, diâmetro interno 1,1 milímetros, 10 centímetros de comprimento). Armazenar o vidro com cuidado para que ele permaneça limpo e livre de poeira.
- Conceber um programa de puxar. Usamos um programa passo 5, com o calor descendente e velocidade a cada passo, e um pequeno empuxo na etapa final. Cookbook Sutter pipeta é uma excelente referência para o desenvolvimento de programas a....
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Discussão
O protocolo aqui é ilustrado no uso diário em eletrofisiologia laboratórios e também é usado para fazer agulhas de injeção de células e animais. Com um extrator programáveis, é fácil de fazer pipetas para uma variedade de usos. Com atenção e cuidado, o filamento em seu puxador vai durar um ano ou mais. Boa sorte com suas experiências.
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Agradecimentos
Agradecemos aos seguintes agências de fomento e fundações de apoio: National Institutes of Health, National Science Foundation, a American Heart Association, Associação de Distrofia Muscular, o B. Donald e Delia E. Baxter Foundation, o Fundo Klingenstein e da Fundação McKnight for Neuroscience.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Puxador de micropipetas | Instrumento | Sutter Instrument Co. | P-97 | Ou instrumento semelhante (por exemplo, Sutter P-87 ou P-2000) |
| Capilares de vidro | Reagente | Sutter Instrument Co. | BF150-86-10 | Ou capilar de vidro semelhante. Para facilitar o preenchimento da pipeta, utilize um capilar com filamento de vidro. |
Referências
- Sutter Instrument, P-97 Pipette Cookbook. , Sutter Instrument. http://www.sutter.com/contact/faqs/pipette_cookbook.pdf (2008).
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Reimpressões e permissões
