Artigo de método

Coleta e medição Mediadores nociceptiva e inflamatória em feridas cirúrgicas

DOI:

10.3791/962

⸱

29 de outubro de 2008

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology, Stanford University School of Medicine

Neste artigo

Retraction Notice

This article has been retracted at the request of the authors due to duplication of text in J Pain (Carvalho B, Clark DJ, Angst MS (2008) Local and Systemic Release of Cytokines, Nerve Growth Factor, Prostaglandin E2, and Substance P in Incisional Wounds and Serum Following Cesarean Delivery. J Pain 9: 650-657.) due to an honest mistake of the authors. View Retraction Notice

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Uma técnica para recolher e medir os mediadores bioquímicos da ferida cirúrgica em momentos específicos.

Resumo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os objetivos deste estudo foram testar a viabilidade de coleta e medição inflamatórios e nociceptivos mediadores bioquímicos no local da cirurgia, para avaliar a relação entre ferida e os níveis séricos, e para determinar as associações entre a liberação do mediador, a dor eo consumo de analgésicos pós-cesariana entrega. Vinte mulheres saudáveis ​​submetidos a cesariana eletiva com raquianestesia foram incluídos. Exsudato da ferida e mediadores de soro, os escores de dor eo consumo de analgésicos foram medidos no 1, 6, 24 e 48 horas pós-cesariana. No exsudato da ferida, 19 dos 20 mediadores foram detectados de forma confiável, incluindo IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL -17, TNFa, INFγ, G-CSF, GM-CSF, MCP-1 e MIP-1β, fator de crescimento neural (NGF), a prostaglandina E2 (PG-E2) e substância P. Wound PG-E2 e várias citocinas pico início , enquanto NGF mostrou uma versão mais atrasada. Não houve correlação entre a concentração versus perfil de tempo de ferida e citocinas no soro. Este estudo demonstra a viabilidade da recolha e medição de mediadores nociceptivos e inflamatórios em feridas cirúrgicas em momentos específicos. A falta de correlações significativas entre os níveis séricos de feridas e enfatiza a importância de determinar site-specific libertação se patologias localizadas estão a ser estudado.

Protocolo

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Coleta de mediador nociceptiva e inflamatória bioquímicos

  1. O On-Q ® ® System PainBuster Alívio da Dor é inserido na camada subcutânea pela equipe cirúrgica pouco antes de fechamento da ferida. O sistema fornece continuamente soro fisiológico (ou anestésico local) por via subcutânea na ferida a uma taxa de 2 ml / h.
  2. A torneira de três vias é incorporado a este sistema para permitir a aspiração do exsudato da ferida em pontos de tempo especificado.
  3. Em pontos de tempo especificado pelo protocolo (por exemplo, 1, 6, 24 e 48 horas após cesariana), 1 ml de exsudato da ferida é retirada para um copo de polietileno contendo 30 mL de inibidor de protease.
  4. Em intervalos ao mesmo tempo, 10 ml de sangue é coletado em um tubo de coleta de sangue top verde contendo heparina de lítio. 300 ml de inibidor de proteinase é então adicionado às amostras de sangue.
  5. Dentro de 1 hora da coleta, as amostras são colocadas em gelo e centrifugado a 3000 rpm por 10 min.
  6. O soro e supranate ferida é removido e colocar em um tubo de microcentrífuga padrão e armazenadas a -20 ° C.

Análise do ensaio

  1. Uma vez que todas as amostras são coletadas, são descongeladas e analisadas ao mesmo tempo.
  2. As citocinas são medidos utilizando-A17 multiplex placa de imunoensaio bead array. Tecnologia Multiplex imuno-ensaio permite a dosagem até 100 analitos no corpo de líquido amostras tão pequenas no volume de 50 ul e produzir resultados comparáveis ​​com aqueles obtidos com ELISA. Esta placa é capaz de medir interleucina 1ß (IL-1ß), a interleucina 2 (IL-2), interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), a interleucina 6 (IL-6), a interleucina 7 (IL -7), interleucina 8 (IL-8), interleucina (IL-10), a interleucina 12 (IL-12), a interleucina 13 (IL-13), a interleucina 17 (IL-17), fator de necrose tumoral α (TNF) , interferon α (INFα), fator estimulante de colônias de granulócitos (G-CSF), granulócitos e macrófagos fator estimulador de colônia (GM-CSF), proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP-1) e proteína inflamatória de macrófagos 1 (MIP-1β).
  3. Fator de crescimento neural é medido com NGF anticorpos DY256 adicionando-o à placa 17-plex com auxílio do kit de acoplamento Bio-Plex amina.
  4. Cada medição é feita em duplicata e de acordo com as especificações do fabricante. Curvas padrão para cada analito são gerados usando os analitos de referência fornecidos pelos fabricantes em concentrações de 0,20, 0,78, 3,13, 12,5, 50, 200, 800, 3200 pg / ml, mais um zero (solução salina normal apenas) padrão. Curvas padrão são incluídos em cada amostra e as concentrações foram calculadas com Bio-Plex software Manager.
  5. Prostaglandina E2 e substância P são medidos através de uma sensibilidade altamente Kits ELISA Cada ensaio é realizado em duplicata de acordo com a especificação do fabricante.

    Figura 1
    Figura 1

    Figura 1: Níveis de exsudato e soro de várias citocinas pró e anti-inflamatórias (interleucina 1ß (IL-1ß), a interleucina 2 (IL-2), interleucina 4 (IL-4), interleucina 5 (IL-5), a interleucina 6 (IL-6), a interleucina 7 (IL-7), interleucina 8 (IL-8), interleucina (IL-10), a interleucina 12 (IL-12), a interleucina 13 (IL-13), a interleucina 17 (IL -17), fator de necrose tumoral α (TNF-α), interferon γ (INFγ), fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF), granulócitos e macrófagos fator estimulador de colônias (GM-CSF), proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP-1 ) e proteína inflamatória de macrófagos 1 (MIP-1ß), fator de crescimento neural (NGF), a prostaglandina E2 (PG-E2) e substância P (SP) níveis (pg / mL), medidos no início do estudo, 6 e 24 horas pós-parto cesárea .

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O On-Q ® ® System PainBuster alívio da dor deve ser inserido através da incisão em toda a camada subcutânea pouco antes do fechamento da ferida. Isso facilita a aspiração através da torneira de três vias nos intervalos de tempo especificado. O sistema On-Q ® fornece continuamente solução salina por via subcutânea na ferida a uma taxa de 2 ml / h. Isso evita que o cateter de coagulação e melhora a confiabilidade do sistema para produzir amostras de exsudato. Se a aspiração do exsudato é difícil (aproximadamente 5% dos casos), considere a mud...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores não têm nada a declarar.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

O trabalho do Dr. Carvalho é apoiado por uma Carreiras Construção Interdisciplinar em pesquisa Saúde da Mulher concessão do Escritório de Pesquisa sobre Saúde da Mulher e Instituto Nacional de Saúde Infantil e Desenvolvimento Humano dos Institutos Nacionais de Saúde (5K12 HD043452). Angst Dr receberam suprimentos (On-Q ® ® PainBuster Pós-Op Sistema de Alívio da Dor) e financiamento para a realização dos testes bioquímicos de I-Flow (Lake Forest, CA).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
On-Q® PainBuster® Sistema de Alívio da Dor Pós-Operatória I-Flow, Lake Forest, CA
Inibidor completo de protease Roche Group
Placa de imunoensaio multiplexado com microesferas Bio-PlexTM 17-plexBio-Rad
Kit de acoplamento de amina Bio-PlexBio-Rad
O anticorpo anti-NGF DY256R&D Systems
Ensaios imunoenzimáticos (ELISA) para prostaglandina E2 e substância PAssay Designs

Referências

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Elshal, M. F., McCoy, J. P. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA. Methods. 38, 317-323 (2006).
  2. Heijmans-Antonissen, C., Wesseldijk, F., Munnikes, R. J., Huygen, F. J., van der Meijden, P., Hop, W. C., Hooijkaas, H., Zijlstra, F. J. Multiplex bead array assay for detection of 25 soluble cytokines in blister fluid of patients with complex regional pain syndrome type 1. Mediators Inflamm.. 28398, 1-8 (2006).
  3. Buvanendran, A., Kroin, J. S., Berger, R. A., Hallab, N. J., Saha, C., Negrescu, C., Moric, M., Caicedo, M. S., Tuman, K. J. Upregulation of prostaglandin E2 and interleukins in the central nervous system and peripheral tissue during and after surgery in humans. Anesthesiology. 104, 403-410 (2000).
  4. Holzheimer, R. G., Steinmetz, W. Local and systemic concentrations of pro- and anti-inflammatory cytokines in human wounds. Eur J Med Res. 5, 347-355 (2000).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Solicitar permissão para reutilizar o texto ou as figuras deste artigo JoVE

Solicitar permissão

Etiquetas

Mediadores NociceptivosColeta de Ferida Cir rgicaAn lise de Exsudato da FeridaMedi o de CitocinasProstaglandina E2Subst ncia PFator de Crescimento NervosoAvalia o do Escore de DorConsumo de Analg sicos