Remoção de Compostos Ramificados e Cíclicos por Adução de Ureia para Paleotermometria Uk'37

1. Instalação e Preparação de Materiais

1. Obtenha um extrato lipídeco total (TLE) usando um método de extração de solvente (Sonication, Soxhlet ou Accelerated Solvent Extraction (ASE).
2. Comprar os seguintes materiais de qualquer revendedor químico: pipetas e lâmpadas de vidro borossilicato queimados; água pura; hexana; diclorometano (DCM); metanol; ureia.
   1. Os reagentes devem ser puros e livres de hidrocarbonetos. Alternativamente, a água pura pode ser feita em um laboratório usando um sistema de purificação de água.
3. Obtenha frascos de vidro borossilicato de 4 mL com tampas forradas com PTFE.

2. Métodos

1. Faça uma mistura de 2:1 DCM:Hexane (v:v).
   1. Em um frasco de Erlenmeyer, misture 200 mL de DCM e 100 mL de hexano.
2. Faça uma mistura de ureia em metanol (100 mg/mL).
   1. Despeje 300 mL de metanol em um frasco de Erlenmeyer.
   2. Adicione 300 mg de ureia.
   3. Mexa em uma placa de mexida automática até que a ureia esteja completamente dissolvida.
3. Comece com a amostra seca em um frasco de 4 mL.
4. Suspenda a amostra em 1,5 mL de uma mistura de 2:1 de DCM:Hexane (v:v).
   1. Se a amostra não dissolver completamente, sonicar por 5 minutos.
5. Nessa mistura, adicione 1,5 mL de ureia no metanol.
   1. Após esta adição, observe para um precipitado branco para formar. Isso sinaliza a criação de cristais de ureia.
6. Seque suavemente os cristais sob nitrogênio, usando calor suave. Certifique-se de que todo solvente tenha evaporado antes de prosseguir para o próximo passo.
7. Enxágüe os cristais 3x com aproximadamente 1 mL de hexano. Remova o hexano entre cada enxágue usando uma pipeta de vidro para transferi-lo para um frasco rotulado como "não-aduto".
8. Dissolva os cristais em 2 mL de água pura. Agite para garantir a dissolução completa.
9. Extrair a fase aquosa com hexano adicionando 1 mL e tremendo suavemente por 5 s.
10. Deixe o hexano e a água se separarem completamente antes de remover aproximadamente 75% do hexano usando uma pipeta de vidro e transferi-la para um frasco rotulado de "aduto".
11. Repita o passo 2.10 duas vezes.
12. Descarte a solução de água e ureia em um recipiente de resíduos apropriado.