Eletroforese Capilar (CE)

1. Configuração de instrumentação CE

1. Ligue o instrumento CE e o computador. Usando o software do computador, ligue a fonte de luz para análise UV para permitir que ele se aqueça. Alguns softwares têm um indicador quando a lâmpada está pronta para uso (o ícone da lâmpada vira cor).
2. Faça um arquivo de métodos. Defina os parâmetros importantes para a execução do CE. Nesta análise, as temperaturas do cartucho e do armazenamento da amostra são de 35 °C. O comprimento de onda para detecção de UV é de 214 nm.
3. Escreva um programa de tempo. O programa geralmente consiste em passos de lavagem (para limpar o capilar antes da análise), passos de injeção e, em seguida, um passo de eletroforese. Para a etapa de lavagem, realize 2 enxágües por 1 min usando 20 psi de pressão. A primeira lavagem é com NaOH, que ajuda a garantir que os grupos de silanol na parede capilar sejam desprodoados. A segunda lavagem é com buffer de execução (tampão de 0,025 M de borate aqui) para garantir que o capilar seja deixado equilibrado com buffer.
4. Para a injeção, a injeção de pressão é usada a 0,5 psi para 5 s.
5. Para o passo da eletroforese, as condições são tensão de separação: 20 kV, tempo: 5 min, polaridade normal. Para cada etapa, indique também qual frasco é a entrada e qual frasco é a saída. Salve o arquivo de métodos depois que todos os parâmetros forem inseridos.

2. Preparação das Normas e Amostras de Refrigerante

1. Faça soluções de estoque de 500 ppm de aspartame, cafeína e ácido benzoico na água. Faça 50 mL de cada um, usando um frasco volumoso.
2. Faça uma solução padrão de 150 ppm aspartame, 150 ppm de cafeína e 100 ppm de ácido benzoico em um frasco volumoso de 10 mL.
3. Faça soluções padrão de cafeína de 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm e 200 ppm em frascos volumosos de 10 mL.

3. Execute as amostras no CE

1. Coloque os frascos contendo normas ou amostras de refrigerante no porta-frascos de amostra. Certifique-se de anotar qual amostra está em qual slot. Dois slots têm o buffer de execução de borate e a solução de enxaguante NaOH de 0,1 M.
2. No arquivo do método, entrada que slot o primeiro frasco de amostra está dentro
3. Adquira uma única execução, certificando-se de inserir todas as informações de dados que o programa solicita.
4. Continue a adquirir dados, alterando o frasco de entrada para cada amostra. Execute o padrão de combinação, as 3 concentrações de cafeína, e uma amostra pepsi e pepsi diet.
5. Insira o alvo no instrumento e escolha o instrumento apropriado.
6. Analise os dados no computador. Calcule as áreas de pico e os padrões de sobreposição e amostras reais para ajudar a identificar picos. Faça uma curva de calibração para os dados da cafeína.